非小細胞肺癌組織表達FOXM1與患者臨床特征及術后輔助化療療效的關系研究

江峰　呂賽平　黃秀珍　彭曉　匡裕康　吳九發(fā)　王東升　黃建

【摘要】 目的：探討非小細胞肺癌（NSCLC）組織表達叉頭框轉(zhuǎn)錄因子M1（FOXM1）與患者臨床特征及術后輔助化療療效的關系。方法：選取2012年5月-2013年7月本院收治的115例NSCLC患者作為研究對象，所有患者均接受肺癌完全性切除術治療。在手術過程中取腫瘤組織，并采用免疫組化法進行FOXM1表達檢測。結果：FOXM1表達陽性組與FOXM1表達陰性組之間性別、年齡、病理類型、淋巴結轉(zhuǎn)移、腫瘤細胞分化程度比較差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；FOXM1表達陽性組的臨床分期顯著高于FOXM1表達陰性組（P<0.05）。FOXM1表達陽性組的1年生存率顯著低于陰性組（P<0.05）。結論：NSCLC組織表達FOXM1與臨床分期有一定的關系，且與預后呈負相關。

【關鍵詞】 非小細胞肺癌； 叉頭框轉(zhuǎn)錄因子M1； 肺癌完全性切除術； 臨床分期

術后輔助化療是提高NSCLC患者遠期療效的主要手段之一，而腫瘤細胞對化療藥物的耐藥性常給術后輔助化療療效帶來一定的負性影響。目前研究認為，多種基因參與了腫瘤細胞的耐藥機制。為提高NSCLC患者的生存率，節(jié)約醫(yī)療及社會成本，在化療之前進行某些耐藥基因檢測是必要的，而探索相關基因亦成為NSCLC治療的重要研究方向之一[1-2]。本研究即旨在探討NSCLC組織表達FOXM1與患者臨床特征及輔助化療預后的關系，以期為臨床治療NSCLC提供新的思路，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年5月-2013年7月本院收治的115例NSCLC患者作為研究對象，其中男81例，女34例；年齡47～71歲，中位年齡62歲；病理類型鱗癌50例、腺癌43例、其他22例；淋巴結轉(zhuǎn)移61例、無轉(zhuǎn)移54例；腫瘤細胞分化程度低分化61例、中分化37例、高分化17例；臨床分期Ⅰ期11例，Ⅱa期32例，Ⅱb期33例，Ⅲa期39例。將患者按FOXM1表達檢測結果分為FOXM1表達陽性組和FOXM1表達陰性組。

1.2 納入標準 （1）接受完全性切除術治療（2005年國際肺癌研究會分期委員會的肺癌完全性切除定義）；（2）術前經(jīng)相關檢查排除遠處轉(zhuǎn)移；（3）術后病理證實為Ⅰb～Ⅲa期NSCLC；（4）術后2個月內(nèi)開始接受輔助化療；（5）術后化療周期數(shù)≥3個。

1.3 排除標準 （1）術前曾行新輔助化療或放療；（2）行肺段切除術或楔形切除等達不到完全切除標準；（3）不能耐受輔助化療的患者；（4）輔助化療開始時間與手術時間之差>2個月的患者。

1.4 研究方法

1.4.1 FOXM1表達檢測 石蠟切片脫蠟至水→抗原修復→磷酸鹽緩沖液（PBS）洗滌2～3次，5 min/次→3%過氧化氫溶液對內(nèi)源性過氧化物酶進行封閉，室溫靜置10 min→PBS洗滌2～3次，5 min/次→正常血清封閉，室溫靜置20 min，甩去多余液體→PBS洗滌2～3次，5 min/次→滴加一抗50 μL，4 ℃過夜→

37 ℃復溫45 min→PBS洗滌3次，2 min/次→滴加增強子→PBS洗滌3次，2 min/次→滴加酶標二抗

50 μL，37 ℃靜置1 h→PBS洗滌3次，5 min/次→二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色5～10 min→自來水沖洗10 min→蘇木素復染2 min→梯度酒精脫水→自來水沖洗10～15 min→二甲苯透明→封片。

1.4.2 術后輔助化療及隨訪 在手術后2個月內(nèi)給予研究對象輔助化療，化療周期數(shù)≥3個，化療結束后對所有研究對象進行隨訪，直至本研究結束。

1.5 FOXM1表達檢測結果判斷標準 每例標本選5個高倍視野，根據(jù)細胞質(zhì)染色程度、陽性染色細胞百分比進行評分。細胞質(zhì)染色程度評分：不著色為0分，淡黃色為1分，黃色為2分，棕褐色為3分。陽性染色細胞百分比評分：陽性細胞<1%為0分，1%～10%為1分，11%～50%為2分，>50%為3分。染色程度評分與陽性染色細胞百分比評分的乘積≥4分為FOXM1陽性表達，0～3分為FOXM1陰性表達。

1.6 統(tǒng)計學處理 采用SPSS 15.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行處理，組間性別、年齡、病理類型、淋巴結轉(zhuǎn)移比較采用R×C表 字2檢驗，組間腫瘤細胞分化程度、臨床分期比較采用秩和檢驗，組間1年生存率比較采用Log rank檢驗，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 NSCLC組織表達FOXM1與患者臨床特征的關系分析 FOXM1表達陽性組與FOXM1表達陰性組之間性別、年齡、病理類型、淋巴結轉(zhuǎn)移、腫瘤細胞分化程度比較差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；FOXM1表達陽性組的臨床分期顯著高于FOXM1表達陰性組（P<0.05），見表1。

2.2 NSCLC組織表達FOXM1與術后輔助化療療效的關系分析 經(jīng)12個月隨訪，F(xiàn)OXM1表達陽性組1年生存率為83.33%（35/42），低于FOXM1表達陰性組的97.26%（71/73），差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

3 討論

肺癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，世界衛(wèi)生組織2002年對世界人口調(diào)查發(fā)現(xiàn)肺癌男性發(fā)病率為42.4/10萬，死亡率為33.21/10萬，女性肺癌發(fā)病率為19.0/10萬，死亡率為13.45/10萬。目前臨床上常將肺癌分為NSCLC、小細胞肺癌（SCLC）兩大類，其中以前者最為常見。與其他絕大多數(shù)惡性腫瘤一樣，手術仍然是NSCLC最重要、最有效的治療手段，但由于早期NSCLC無典型的臨床癥狀，初診時約2/3的NSCLC患者已屬于局部晚期或發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移而喪失了根治性手術治療的機會[3]；盡管剩余1/3的NSCLC患者在初診時可以行根治性手術切除，但即使是完全切除的Ⅰ期患者，術后2年的復發(fā)率或轉(zhuǎn)移率高達40%左右[4]。因此NSCLC患者術后往往需要輔助化療，以提高其遠期療效。值得注意的是，目前臨床上主要依據(jù)臨床經(jīng)驗或指南選定術后輔助化療方案，并未參考腫瘤生物學特征、患者對化療藥物敏感性而選擇適合個體的抗癌藥物，從而使術后化療療效受到一定的影響[5-6]。因此在NSCLC患者接受術后化療之前，有必要對他們進行某些基因的檢測，從而使NSCLC化療患者獲得最佳的療效。

FOXM1是叉頭框轉(zhuǎn)錄因子家族中一種亞型，其表達與轉(zhuǎn)錄激活需要多因子、多細胞信號通路的共同參與，并依賴于細胞周期進程。FOXM1表達水平與正常細胞增殖、衰老及器官的形成過程密切相關，而FOXM1異常表達則通過影響基因組的穩(wěn)定性以及有絲分裂過程等促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移，且FOXM1在腫瘤干細胞的存在、維持干細胞多能性方面發(fā)揮重要作用，因此FOXM1表達水平將成為腫瘤診斷、評估、預后等提供一個重要指標[7-8]?；谏鲜鲈?，F(xiàn)OXM1與惡性腫瘤的關系成為近年來的研究熱點之一。Chan等[9]報道FOXM1過度表達與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展密切相關。Ahmad等[10]報道下調(diào)FOXM1表達可以抑制乳腺癌細胞的增殖、遷移、侵襲。Li等[11]報道FOXM1在胃癌血管生成、進展過程中發(fā)揮著關鍵的作用。Wang等[12]報道下調(diào)FOXM1表達可以抑制前列腺癌細胞的生長，并誘導癌細胞凋亡。

在本研究中，筆者主要探討NSCLC組織表達FOXM1與患者臨床特征及術后輔助化療療效的關系，結果顯示FOXM1表達陽性組與FOXM1表達陰性組之間性別、年齡、病理類型、淋巴結轉(zhuǎn)移、腫瘤細胞分化程度相比差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），F(xiàn)OXM1表達陽性組的臨床分期顯著高于FOXM1表達陰性組（P<0.05）；FOXM1表達陽性組的1年生存率顯著低于對照組（P<0.05）。目前國內(nèi)外有關FOXM1與NSCLC的研究較少，現(xiàn)有的研究均認為NSCLC組織表達FOXM1與其預后成負相關。Liu等[13]報道FOXM1表達狀況是影響NSCLC預后的獨立危險因素。Xu等[14]報道FOXM1表達在NSCLC細胞體外實驗對吉非替尼耐藥過程中發(fā)揮著重要作用。Xu等[15]報道FOXM1表達通過促進腫瘤轉(zhuǎn)移從而使NSCLC患者獲得更差的預后。在此需要強調(diào)的是，有關FOXM1表達影響NSCLC預后的確切機制有待進一步研究。

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（收稿日期：2014-05-14） （本文編輯：蔡元元）

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