高效液相色譜法測(cè)定八珍袋泡茶中鹽酸川芎嗪含量

肖 芳，王賢英

(1．重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院，重慶 400014;2．重慶市中藥研究院，重慶 400065)

八珍袋泡茶是由黨參、白芍、白術(shù)、川芎等8味中藥組方的復(fù) 方制劑，收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·中藥成方制劑(第5冊(cè))》，具有補(bǔ)氣益血的功效，可用于治療氣血兩虛、面色萎黃、食欲不振、四肢乏力、月經(jīng)過(guò)多等癥。處方中的川芎含有生物堿、酚類、有機(jī)酸、內(nèi)酯類、脂肪酸、甘油酯類、萜和甾醇類等多種有效成分[1]，具有活血化瘀、行氣止痛的作用。其所含的川芎嗪為主要有效成分之一，有明顯的擴(kuò)張冠脈、增加冠脈血流量、松弛血管平滑肌、降低血小板表面活性等藥理作用[2]。川芎中鹽酸川芎嗪的含量測(cè)定方法已見(jiàn)報(bào)道[3]。本研究中建立了八珍袋泡茶中鹽酸川芎嗪含量測(cè)定方法，旨在為八珍袋泡茶的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

LC－2010A型高效液相色譜儀(日本島津);AEG－45SM型十萬(wàn)分之一電子分析天平(日本島津);AB265－S型分析天平(梅特勒);SK250LH型超聲儀(上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司);D101大孔樹(shù)脂(天津市海光化工有限公司)。鹽酸川芎嗪對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，供含量測(cè)定用，批號(hào)為110817－200305);八珍袋泡茶(重慶市中藥研究院制藥廠，國(guó)藥準(zhǔn)字Z50020503，批號(hào)為 131001，131002，131003);甲醇為色譜純，甲醇、乙醇、鹽酸、氨水為分析純，水為重蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱:Diamonsil－ TM C18柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);柱溫:30℃;流動(dòng)相:甲醇－水(48∶52);檢測(cè)波長(zhǎng):293 nm;流速:0．8 mL/min;進(jìn)樣量:10 μL。按上述色譜條件，取鹽酸川芎嗪對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照品溶液各10 μL進(jìn)樣，高效液相色譜圖見(jiàn)圖1?？梢?jiàn)，陰性對(duì)照品溶液在鹽酸川芎嗪出峰時(shí)間區(qū)域無(wú)干擾峰出現(xiàn)，故對(duì)鹽酸川芎嗪的測(cè)定無(wú)干擾作用。

圖1 高效液相色譜圖

2．2 溶液制備

取鹽酸川芎嗪對(duì)照品，精密稱定8．55 mg，置25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質(zhì)量濃度為0．342 g/L的鹽酸川芎嗪貯備液。取鹽酸川芎嗪貯備液，精密量取1 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得鹽酸川芎嗪對(duì)照品溶液。取八珍袋泡茶約5．0 g，精密稱定，加10 mL熱水使溶解，將溶液加入已處理好的D101大孔樹(shù)脂柱(內(nèi)徑1．5 cm，填充高度15 cm)，先用50 mL水洗脫，棄去水洗脫液;再用100 mL 90%乙醇洗脫，收集90%乙醇洗脫液，水浴蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇30 mL，放置過(guò)夜，超聲30 min，濾過(guò)，殘?jiān)脽o(wú)水乙醇按上法再提取2次，合并濾液;將濾液用2 moL/L的鹽酸甲醇溶液調(diào)節(jié)pH至1～2，置恒溫水浴50℃蒸干。加1 moL/L的鹽酸 9 mL溶解殘?jiān)?，濾過(guò);濾液用濃氨水調(diào)pH至9～10后，再用二氯甲烷提取2次(每次10 mL);將二氯甲烷提取液用2 moL/L的鹽酸甲醇溶液調(diào)節(jié)pH至1～2，置恒溫水浴50℃蒸干;殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得供試品溶液。按處方工藝取缺川芎的其他各味藥材，制成陰性對(duì)照品，再按供試品溶液制備方法同法制成陰性對(duì)照品溶液。

2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:取對(duì)照品溶液 2，4，6，8，10，12 μL，分別注入高效液相色譜儀，按擬訂色譜條件測(cè)定峰面積。以對(duì)照品溶液的進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)、峰面積(Y)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 Y=2．144 9 ×106X+742．466 7，r=0．999 99(n=6)。結(jié)果表明，鹽酸川芎嗪進(jìn)樣量在 0．068 4～0．410 4 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取同一對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10 μL，測(cè)定鹽酸川芎嗪峰面積。結(jié)果的 RSD為0．62%(n=6)，表明儀器精密度較好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):依法制備供試品溶液，分別于 0，2，4，6，8，12，16 h時(shí)進(jìn)樣，測(cè)定鹽酸川芎嗪的峰面積。結(jié)果的 RSD=1．14%(n=7)，表明供試品溶液在16 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn):取同一批號(hào)樣品(批號(hào)為131001)6份，取約5．0 g，精密稱定，依法制備供試品溶液，并按擬訂色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算鹽酸川芎嗪含量。結(jié)果的 RSD=0．85%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取已知含量的樣品(批號(hào)為131001，含量0．1714 mg/g)9份，分別精密加入對(duì)照品溶液(0．342 g/L)1．5，2．5，3．5 mL 各 3 份，按供試品溶液制備方法制備待測(cè)，并按擬訂色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 鹽酸川芎嗪加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2．4 樣品含量測(cè)定

分別取不同批號(hào)樣品各約5．0 g，精密稱定，依法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，在擬訂色譜條件下以外標(biāo)法測(cè)定鹽酸川芎嗪的含量。結(jié)果批號(hào)為131001，131002，131003的3批樣品中，鹽酸川芎嗪的平均含量分別為 0．171 4，0．173 4，0．169 7 mg/g。

3 討論

試驗(yàn)中曾用甲醇直接超聲提取樣品中鹽酸川芎嗪[2]、將樣品過(guò)D101大孔樹(shù)脂進(jìn)行處理[4]、將樣品加80%乙醇回流提取[3]及將樣品用無(wú)水乙醇超聲提取[5]等方法，峰形均較差，雜質(zhì)峰太多、太大，分離度較差。選用本試驗(yàn)中的提取方法，獲得了較好的分離度，只是雜質(zhì)峰較大，樣品峰峰高較小，有待進(jìn)一步改進(jìn)提取方法。

試驗(yàn)中嘗試分別以甲醇－水(52∶48)[6]、甲醇－水(50∶50)、甲醇－水(30∶70)[7]、甲醇－1%醋酸水溶液(52∶48)[5]作為流動(dòng)相，在擬訂的色譜條件下，鹽酸川芎嗪都有出峰，但峰形較差，與相鄰色譜峰的分離度較低，調(diào)整流動(dòng)相為甲醇－水(48∶52)后，峰形較好，分離良好，且峰形對(duì)稱，重現(xiàn)性好。

本試驗(yàn)成功建立了測(cè)定八珍袋泡茶中鹽酸川芎嗪含量的高效液相色譜法，該法操作簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，靈敏度高，重復(fù)性好，可用于八珍袋泡茶中鹽酸川芎嗪的含量測(cè)定。

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