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    應(yīng)用流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)水體中的微藻

    2014-11-07 00:40:19吳曉文
    科技創(chuàng)新導(dǎo)報(bào) 2014年19期
    關(guān)鍵詞:微藻精密度準(zhǔn)確度

    吳曉文

    摘 要:為了探討流式細(xì)胞儀對(duì)不同濃度條件下微藻個(gè)數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確度和精密度,該文應(yīng)用流式細(xì)胞儀和血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)兩種方法,對(duì)水體中的赤潮異灣藻數(shù)目進(jìn)行不同濃度梯度的檢測(cè)對(duì)比分析,可以發(fā)現(xiàn),流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)結(jié)果的RSD值均小于5%,體現(xiàn)了更好的精密度,是一種可以代替血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的快速準(zhǔn)確的方法。

    關(guān)鍵詞:流式細(xì)胞儀 血球計(jì)數(shù)板 微藻 準(zhǔn)確度 精密度

    中圖分類號(hào):X835 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1674-098X(2014)07(a)-0196-01

    Counting microalgae by flow cytometry

    WU Xiaowen

    (College of Ocean Science and Engineering,Shanghai Maritime University,Shanghai 201306,P.R.China)

    Abstract:To discuss the accuracy and precision of microalgae counting by flow cytometry in different concentrations, this experiment researched two methods of flow cytometry and hemocytometer to make a comparative analysis about counting microalgae(Heterosigma akashiwo)in different concentrations.Flow cytometry gained RSD less than 5%,which is a fast and accurate method to replace hemocytometer.

    Key words:flow cytometer Hemocytometer microalgae accuracy precision

    細(xì)胞計(jì)數(shù)是醫(yī)學(xué)、環(huán)境科學(xué)和生物學(xué)等領(lǐng)域研究中的重要環(huán)節(jié)。其在了解細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)、密度測(cè)定、環(huán)境監(jiān)測(cè)等方面具有十分重要的作用和影響。用于檢測(cè)單細(xì)胞微藻的方法多采用血球計(jì)數(shù)板法,但該方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力,重現(xiàn)性較差。為了提高檢測(cè)效率以及檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度,本文嘗試?yán)昧魇郊?xì)胞儀計(jì)數(shù)法,選取微型浮游植物赤潮異彎藻,通過用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法和流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)法對(duì)不同濃度梯度的微藻溶液進(jìn)行計(jì)算值和實(shí)測(cè)值的對(duì)比分析,驗(yàn)證流式細(xì)胞儀對(duì)微藻計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確度和精密度。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料和儀器

    流式細(xì)胞儀染色劑Guava ViaCount(Merck Millipore),血球計(jì)數(shù)板(MARIENFELD),流式細(xì)胞儀(Partec CyFlow Cube),光學(xué)顯微鏡(XSP-8CA,上海),圓周振蕩器(Vortex 3,IKA)。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法

    取1 mL微藻懸液于離心管,加入160 ?L4%的戊二醛,震蕩搖勻后靜置5 min。試驗(yàn)中采用25×16格的血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下對(duì)稀釋后的微藻懸液進(jìn)行計(jì)數(shù)。

    其計(jì)算公式如下:?jiǎn)渭?xì)胞微藻數(shù)/mL=80小格內(nèi)微藻個(gè)數(shù)/80×400×104×稀釋倍數(shù)。

    1.2.2 流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)法

    取適量微藻培養(yǎng)液于離心管中振蕩均勻,從中移取400 ?L藻液至3.5 mL樣品管,加入適量染色劑振蕩混勻并避光存放30 min,取海水稀釋待測(cè)液至1.2 mL,混勻過濾后即可使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行計(jì)數(shù)。

    其計(jì)算公式如下:?jiǎn)渭?xì)胞微藻數(shù)/mL=儀器讀出的活體微藻數(shù)/測(cè)樣體積×1000×稀釋倍數(shù)。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 流式細(xì)胞儀的精確度分析

    該文采用了傳統(tǒng)的血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)對(duì)比流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù),每種方法重復(fù)3次,取平均值,兩種計(jì)數(shù)方法所得到的平均值非常接近,但是血球計(jì)數(shù)板多次計(jì)數(shù)所得到的各項(xiàng)數(shù)值偏離平均值的程度較大,其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD約為5%,而流式細(xì)胞儀精確度較好,其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為2%,Eva L.Joachimsthal和Yingying Wang也在研究中提到了流式細(xì)胞儀的標(biāo)準(zhǔn)偏差都小于5%,能得到比較可信的結(jié)果。

    2.2 流式細(xì)胞儀的準(zhǔn)確度分析

    實(shí)驗(yàn)設(shè)置了幾組不同的濃度梯度,對(duì)異灣藻進(jìn)行實(shí)驗(yàn),根據(jù)測(cè)出的原始初樣濃度,進(jìn)行相應(yīng)稀釋度的理論計(jì)算和流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù),如圖1所示,不同稀釋度的計(jì)算值和實(shí)際測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差大都小于2%,擬合度比較好,說明流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)的精確度很高,從圖中也可以看出,在不同稀釋度下的計(jì)算值和實(shí)際測(cè)量值之間的差值也非常小,表明流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確度良好。

    3 結(jié)語

    通過兩種計(jì)數(shù)方法的對(duì)比分析可以看出,流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)具有較高的準(zhǔn)確度和精密度,解決了傳統(tǒng)方法計(jì)數(shù)中活體藻游動(dòng)和取樣過程帶來的隨機(jī)性問題,計(jì)數(shù)過程簡(jiǎn)便快捷,更適合實(shí)際應(yīng)用。

    參考文獻(xiàn)

    [1] 侯建軍,黃邦欽,戴相輝.赤潮藻細(xì)胞計(jì)數(shù)方法比較研究[J].中國(guó)公共衛(wèi)生, 2004,20(8):907-908.

    [2] 陳坤,張前前,史海燕,等.浮游植物計(jì)數(shù)方法比較研究[J].海洋環(huán)境科學(xué),2007,26(4):383-385.

    [3] 瞿唯鋼,魏方林,劉梅鳳,等.藻類生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)中藻細(xì)胞計(jì)數(shù)方法比較[J].農(nóng)藥, 2013,52(7):497-502.

    [4] Eva L.Joachimsthal,Volodymyr Ivanov,Joo-Hwa Tay,et al.Flow cytometry and conventional enumeration of microorganisms[J].Marine Pollution Bulletin,2003(46):308-313.endprint

    摘 要:為了探討流式細(xì)胞儀對(duì)不同濃度條件下微藻個(gè)數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確度和精密度,該文應(yīng)用流式細(xì)胞儀和血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)兩種方法,對(duì)水體中的赤潮異灣藻數(shù)目進(jìn)行不同濃度梯度的檢測(cè)對(duì)比分析,可以發(fā)現(xiàn),流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)結(jié)果的RSD值均小于5%,體現(xiàn)了更好的精密度,是一種可以代替血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的快速準(zhǔn)確的方法。

    關(guān)鍵詞:流式細(xì)胞儀 血球計(jì)數(shù)板 微藻 準(zhǔn)確度 精密度

    中圖分類號(hào):X835 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1674-098X(2014)07(a)-0196-01

    Counting microalgae by flow cytometry

    WU Xiaowen

    (College of Ocean Science and Engineering,Shanghai Maritime University,Shanghai 201306,P.R.China)

    Abstract:To discuss the accuracy and precision of microalgae counting by flow cytometry in different concentrations, this experiment researched two methods of flow cytometry and hemocytometer to make a comparative analysis about counting microalgae(Heterosigma akashiwo)in different concentrations.Flow cytometry gained RSD less than 5%,which is a fast and accurate method to replace hemocytometer.

    Key words:flow cytometer Hemocytometer microalgae accuracy precision

    細(xì)胞計(jì)數(shù)是醫(yī)學(xué)、環(huán)境科學(xué)和生物學(xué)等領(lǐng)域研究中的重要環(huán)節(jié)。其在了解細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)、密度測(cè)定、環(huán)境監(jiān)測(cè)等方面具有十分重要的作用和影響。用于檢測(cè)單細(xì)胞微藻的方法多采用血球計(jì)數(shù)板法,但該方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力,重現(xiàn)性較差。為了提高檢測(cè)效率以及檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度,本文嘗試?yán)昧魇郊?xì)胞儀計(jì)數(shù)法,選取微型浮游植物赤潮異彎藻,通過用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法和流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)法對(duì)不同濃度梯度的微藻溶液進(jìn)行計(jì)算值和實(shí)測(cè)值的對(duì)比分析,驗(yàn)證流式細(xì)胞儀對(duì)微藻計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確度和精密度。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料和儀器

    流式細(xì)胞儀染色劑Guava ViaCount(Merck Millipore),血球計(jì)數(shù)板(MARIENFELD),流式細(xì)胞儀(Partec CyFlow Cube),光學(xué)顯微鏡(XSP-8CA,上海),圓周振蕩器(Vortex 3,IKA)。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法

    取1 mL微藻懸液于離心管,加入160 ?L4%的戊二醛,震蕩搖勻后靜置5 min。試驗(yàn)中采用25×16格的血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下對(duì)稀釋后的微藻懸液進(jìn)行計(jì)數(shù)。

    其計(jì)算公式如下:?jiǎn)渭?xì)胞微藻數(shù)/mL=80小格內(nèi)微藻個(gè)數(shù)/80×400×104×稀釋倍數(shù)。

    1.2.2 流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)法

    取適量微藻培養(yǎng)液于離心管中振蕩均勻,從中移取400 ?L藻液至3.5 mL樣品管,加入適量染色劑振蕩混勻并避光存放30 min,取海水稀釋待測(cè)液至1.2 mL,混勻過濾后即可使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行計(jì)數(shù)。

    其計(jì)算公式如下:?jiǎn)渭?xì)胞微藻數(shù)/mL=儀器讀出的活體微藻數(shù)/測(cè)樣體積×1000×稀釋倍數(shù)。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 流式細(xì)胞儀的精確度分析

    該文采用了傳統(tǒng)的血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)對(duì)比流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù),每種方法重復(fù)3次,取平均值,兩種計(jì)數(shù)方法所得到的平均值非常接近,但是血球計(jì)數(shù)板多次計(jì)數(shù)所得到的各項(xiàng)數(shù)值偏離平均值的程度較大,其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD約為5%,而流式細(xì)胞儀精確度較好,其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為2%,Eva L.Joachimsthal和Yingying Wang也在研究中提到了流式細(xì)胞儀的標(biāo)準(zhǔn)偏差都小于5%,能得到比較可信的結(jié)果。

    2.2 流式細(xì)胞儀的準(zhǔn)確度分析

    實(shí)驗(yàn)設(shè)置了幾組不同的濃度梯度,對(duì)異灣藻進(jìn)行實(shí)驗(yàn),根據(jù)測(cè)出的原始初樣濃度,進(jìn)行相應(yīng)稀釋度的理論計(jì)算和流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù),如圖1所示,不同稀釋度的計(jì)算值和實(shí)際測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差大都小于2%,擬合度比較好,說明流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)的精確度很高,從圖中也可以看出,在不同稀釋度下的計(jì)算值和實(shí)際測(cè)量值之間的差值也非常小,表明流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確度良好。

    3 結(jié)語

    通過兩種計(jì)數(shù)方法的對(duì)比分析可以看出,流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)具有較高的準(zhǔn)確度和精密度,解決了傳統(tǒng)方法計(jì)數(shù)中活體藻游動(dòng)和取樣過程帶來的隨機(jī)性問題,計(jì)數(shù)過程簡(jiǎn)便快捷,更適合實(shí)際應(yīng)用。

    參考文獻(xiàn)

    [1] 侯建軍,黃邦欽,戴相輝.赤潮藻細(xì)胞計(jì)數(shù)方法比較研究[J].中國(guó)公共衛(wèi)生, 2004,20(8):907-908.

    [2] 陳坤,張前前,史海燕,等.浮游植物計(jì)數(shù)方法比較研究[J].海洋環(huán)境科學(xué),2007,26(4):383-385.

    [3] 瞿唯鋼,魏方林,劉梅鳳,等.藻類生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)中藻細(xì)胞計(jì)數(shù)方法比較[J].農(nóng)藥, 2013,52(7):497-502.

    [4] Eva L.Joachimsthal,Volodymyr Ivanov,Joo-Hwa Tay,et al.Flow cytometry and conventional enumeration of microorganisms[J].Marine Pollution Bulletin,2003(46):308-313.endprint

    摘 要:為了探討流式細(xì)胞儀對(duì)不同濃度條件下微藻個(gè)數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確度和精密度,該文應(yīng)用流式細(xì)胞儀和血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)兩種方法,對(duì)水體中的赤潮異灣藻數(shù)目進(jìn)行不同濃度梯度的檢測(cè)對(duì)比分析,可以發(fā)現(xiàn),流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)結(jié)果的RSD值均小于5%,體現(xiàn)了更好的精密度,是一種可以代替血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的快速準(zhǔn)確的方法。

    關(guān)鍵詞:流式細(xì)胞儀 血球計(jì)數(shù)板 微藻 準(zhǔn)確度 精密度

    中圖分類號(hào):X835 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):1674-098X(2014)07(a)-0196-01

    Counting microalgae by flow cytometry

    WU Xiaowen

    (College of Ocean Science and Engineering,Shanghai Maritime University,Shanghai 201306,P.R.China)

    Abstract:To discuss the accuracy and precision of microalgae counting by flow cytometry in different concentrations, this experiment researched two methods of flow cytometry and hemocytometer to make a comparative analysis about counting microalgae(Heterosigma akashiwo)in different concentrations.Flow cytometry gained RSD less than 5%,which is a fast and accurate method to replace hemocytometer.

    Key words:flow cytometer Hemocytometer microalgae accuracy precision

    細(xì)胞計(jì)數(shù)是醫(yī)學(xué)、環(huán)境科學(xué)和生物學(xué)等領(lǐng)域研究中的重要環(huán)節(jié)。其在了解細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)、密度測(cè)定、環(huán)境監(jiān)測(cè)等方面具有十分重要的作用和影響。用于檢測(cè)單細(xì)胞微藻的方法多采用血球計(jì)數(shù)板法,但該方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力,重現(xiàn)性較差。為了提高檢測(cè)效率以及檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度和精密度,本文嘗試?yán)昧魇郊?xì)胞儀計(jì)數(shù)法,選取微型浮游植物赤潮異彎藻,通過用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法和流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)法對(duì)不同濃度梯度的微藻溶液進(jìn)行計(jì)算值和實(shí)測(cè)值的對(duì)比分析,驗(yàn)證流式細(xì)胞儀對(duì)微藻計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確度和精密度。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料和儀器

    流式細(xì)胞儀染色劑Guava ViaCount(Merck Millipore),血球計(jì)數(shù)板(MARIENFELD),流式細(xì)胞儀(Partec CyFlow Cube),光學(xué)顯微鏡(XSP-8CA,上海),圓周振蕩器(Vortex 3,IKA)。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法

    取1 mL微藻懸液于離心管,加入160 ?L4%的戊二醛,震蕩搖勻后靜置5 min。試驗(yàn)中采用25×16格的血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下對(duì)稀釋后的微藻懸液進(jìn)行計(jì)數(shù)。

    其計(jì)算公式如下:?jiǎn)渭?xì)胞微藻數(shù)/mL=80小格內(nèi)微藻個(gè)數(shù)/80×400×104×稀釋倍數(shù)。

    1.2.2 流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)法

    取適量微藻培養(yǎng)液于離心管中振蕩均勻,從中移取400 ?L藻液至3.5 mL樣品管,加入適量染色劑振蕩混勻并避光存放30 min,取海水稀釋待測(cè)液至1.2 mL,混勻過濾后即可使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行計(jì)數(shù)。

    其計(jì)算公式如下:?jiǎn)渭?xì)胞微藻數(shù)/mL=儀器讀出的活體微藻數(shù)/測(cè)樣體積×1000×稀釋倍數(shù)。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 流式細(xì)胞儀的精確度分析

    該文采用了傳統(tǒng)的血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)對(duì)比流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù),每種方法重復(fù)3次,取平均值,兩種計(jì)數(shù)方法所得到的平均值非常接近,但是血球計(jì)數(shù)板多次計(jì)數(shù)所得到的各項(xiàng)數(shù)值偏離平均值的程度較大,其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD約為5%,而流式細(xì)胞儀精確度較好,其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為2%,Eva L.Joachimsthal和Yingying Wang也在研究中提到了流式細(xì)胞儀的標(biāo)準(zhǔn)偏差都小于5%,能得到比較可信的結(jié)果。

    2.2 流式細(xì)胞儀的準(zhǔn)確度分析

    實(shí)驗(yàn)設(shè)置了幾組不同的濃度梯度,對(duì)異灣藻進(jìn)行實(shí)驗(yàn),根據(jù)測(cè)出的原始初樣濃度,進(jìn)行相應(yīng)稀釋度的理論計(jì)算和流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù),如圖1所示,不同稀釋度的計(jì)算值和實(shí)際測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差大都小于2%,擬合度比較好,說明流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)的精確度很高,從圖中也可以看出,在不同稀釋度下的計(jì)算值和實(shí)際測(cè)量值之間的差值也非常小,表明流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確度良好。

    3 結(jié)語

    通過兩種計(jì)數(shù)方法的對(duì)比分析可以看出,流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)具有較高的準(zhǔn)確度和精密度,解決了傳統(tǒng)方法計(jì)數(shù)中活體藻游動(dòng)和取樣過程帶來的隨機(jī)性問題,計(jì)數(shù)過程簡(jiǎn)便快捷,更適合實(shí)際應(yīng)用。

    參考文獻(xiàn)

    [1] 侯建軍,黃邦欽,戴相輝.赤潮藻細(xì)胞計(jì)數(shù)方法比較研究[J].中國(guó)公共衛(wèi)生, 2004,20(8):907-908.

    [2] 陳坤,張前前,史海燕,等.浮游植物計(jì)數(shù)方法比較研究[J].海洋環(huán)境科學(xué),2007,26(4):383-385.

    [3] 瞿唯鋼,魏方林,劉梅鳳,等.藻類生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)中藻細(xì)胞計(jì)數(shù)方法比較[J].農(nóng)藥, 2013,52(7):497-502.

    [4] Eva L.Joachimsthal,Volodymyr Ivanov,Joo-Hwa Tay,et al.Flow cytometry and conventional enumeration of microorganisms[J].Marine Pollution Bulletin,2003(46):308-313.endprint

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