中成藥非法添加鹽酸西布曲明的快速檢測(cè)方法研究

★ 楊建冬 余蔥蔥

(1.宜春市食品藥品檢驗(yàn)所 江西宜春336000;2.四川省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院亞健康監(jiān)測(cè)與評(píng)估實(shí)驗(yàn)室 四川成都610041)

中西醫(yī)結(jié)合是我國(guó)現(xiàn)代衛(wèi)生事業(yè)發(fā)展的一大顯著特色。合理的中西藥聯(lián)用可使臨床療效增強(qiáng)，近年來(lái)一些制假者和不法商販利用中成藥所含成分復(fù)雜、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)不完善的缺點(diǎn)，在中成藥和保健食品中非法添加化學(xué)藥品，而中成藥中擅自加入西藥成分，可能會(huì)產(chǎn)生不可預(yù)知的嚴(yán)重后果。鹽酸西布曲明作為一種新型減肥藥，其效果是顯著的，但近年來(lái)鹽酸西布曲明在歐盟、澳大利亞等國(guó)家和地區(qū)進(jìn)行的臨床研究顯示，使用該藥可能增加受試者嚴(yán)重心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)，包括非致死性心梗，非致死性卒中，可復(fù)蘇的心臟驟停，心血管死亡等。基于國(guó)際上對(duì)該品種的最新評(píng)估結(jié)果，2010年10月國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局決定停止鹽酸西布曲明制劑和原料藥在我國(guó)的生產(chǎn)、銷(xiāo)售和使用。然而，在中成藥中擅自非法添加鹽酸西布曲明的事件仍有發(fā)生。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)利用TLC和HPLC法建立中成藥中添加鹽酸西布曲明的定性分析方法，該方法能快速有效的檢出中成藥中的鹽酸西布曲明，為消費(fèi)者的用藥安全提供保障。

1 儀器和材料

1.1 儀器 惠普HP1100高效液相色譜儀;N2000色譜工作站;硅膠G板為(自制);929型全自動(dòng)簿層鋪板器;TU1901紫外分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)。

1.2 材料 鹽酸西布曲明對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)100624-200401);試驗(yàn)樣品為市場(chǎng)隨機(jī)抽檢所得;甲醇為色譜純和分析純;三氯甲烷，醋酸乙酯，乙酸均為分析純，改良碘化鉍鉀溶液。

2 方法

2.1 對(duì)照品溶液的配制 取鹽酸西布曲明對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1mL含0.1mg的溶液，即得。

2.2 供試品溶液的配制 取本品(口服液5支，混勻，取半支量;膠囊10粒，內(nèi)容物混勻，稱(chēng)取2粒的量;片劑取10片，研細(xì)，混勻，稱(chēng)取相當(dāng)于2片的量)，置25mL容量瓶中，加甲醇適量，固體制劑超聲15min，放冷，加甲醇至刻度，濾過(guò)，取續(xù)濾液。即得。

2.3 TLC鑒別 分別取供試品溶液，對(duì)照品溶液各10μL，點(diǎn)于經(jīng)活化的硅膠G板上，以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇(16∶0.5∶0.5)，并滴加乙酸2滴為展開(kāi)劑，飽和20min后，展開(kāi)，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀溶液顯色。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上，不得顯相同顏色的斑點(diǎn)。

2.4 HPLC檢查 用十八烷基硅膠鍵合硅膠為填充劑色譜柱，以甲醇-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(60∶40，用磷酸調(diào)至2.9～3.1)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為223nm，進(jìn)樣量均為10μL，注入液相色譜儀中。供試品色譜中，不得出現(xiàn)與對(duì)照品保留時(shí)間相同的色譜峰。

3 結(jié)果與討論

3.1 TLC鑒別 觀察TLC簿層色譜圖，其斑點(diǎn)顏色及位置，對(duì)應(yīng)于鹽酸西布曲明對(duì)照品及陽(yáng)性對(duì)照，供試品呈現(xiàn)出相同的橘紅色斑點(diǎn)，樣品中其他成分能與西布曲明很好的分離，不干擾鑒別。

3.1.1 展開(kāi)劑的選擇 此實(shí)驗(yàn)中由于我們是在中等極性溶劑體系中進(jìn)行，根據(jù)多數(shù)文獻(xiàn)中報(bào)道該類(lèi)化合物中展開(kāi)劑選擇，最終選擇以甲苯-乙酸乙酯-異丙醇 -濃氨試液(12∶6∶3∶0.5)為展開(kāi)劑［1］和以氯仿-甲醇(8∶1)為展開(kāi)劑［2］進(jìn)行實(shí)驗(yàn)摸索，經(jīng)過(guò)考慮環(huán)保與實(shí)驗(yàn)效果，選擇以三氯甲烷-醋酸乙酯-甲醇為展開(kāi)劑，在不斷的混合配比后，發(fā)現(xiàn)比例在(16∶0.5∶0.5)時(shí)能很好的符合上述展開(kāi)劑的條件，但斑點(diǎn)有拖尾現(xiàn)象，考慮鹽酸西布曲明具酸性，于是在原比例展開(kāi)劑中滴加乙酸2滴并混和，發(fā)現(xiàn)展開(kāi)后組分分離效果好;斑點(diǎn)圓而且集中。

3.1.2 顯色劑的選擇 一般來(lái)說(shuō)在TLC需要顯色，先采用紫外光顯色，如果紫外光顯色不能成功再考慮使用顯色劑。在本實(shí)驗(yàn)中由于照紫外后發(fā)現(xiàn)其顯色效果沒(méi)有使用顯色劑好。參考部分文獻(xiàn)后，采用4%氫氧化鈉溶液及稀碘化鉍鉀為顯色劑進(jìn)行顯色［1］和改良碘化鉍鉀溶液顯［2］，實(shí)驗(yàn)探索后，發(fā)現(xiàn)在選用改良碘化鉍鉀溶液顯色進(jìn)行顯色，靈敏度高，斑點(diǎn)顏色穩(wěn)定、斑點(diǎn)與背景間的對(duì)比度好，斑點(diǎn)的大小及顏色的深度與物質(zhì)的量成正比。

3.1.3 簿層檢測(cè)的樣品檢測(cè)結(jié)果

陽(yáng)性某生物科技有限公司 20060410 陽(yáng)性某保健品公司 20070106 陰性某藥業(yè)公司 20070915生產(chǎn)廠家 批號(hào) 結(jié)果某藥業(yè)公司(美國(guó)) 20070206陰性

3.2 HPLC定性分析

3.2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 分取一定量甲醇和對(duì)照品溶液，先取適量甲醇置于1cm的石英吸收池中，在200nm～400nm處進(jìn)行基線校準(zhǔn)，將第一個(gè)吸收池吸中的甲醇溶液倒出，取適量對(duì)照品溶液，加入到吸收池中，在200nm～400nm處進(jìn)行掃描，發(fā)現(xiàn)在222nm和200nm附近有吸收峰，但是考慮到甲醇溶液的末端吸收和部分文獻(xiàn)的選擇，而且該波長(zhǎng)出的波基線平穩(wěn)波形好。所以選擇223nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖1 高效液相色譜圖

3.2.2 流動(dòng)相的選擇 實(shí)驗(yàn)中參考部分文獻(xiàn)，以文獻(xiàn)記載流動(dòng)相:甲醇 - 水(80∶20，pH4.5)［2］為基礎(chǔ)，為考慮實(shí)驗(yàn)效果，分別采用10%，20%，70%，80%，90%，100%的甲醇(或乙睛)和0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液的混合液作為流動(dòng)相，改變甲醇(或乙睛)溶液和磷酸二氫鉀溶液的比值，發(fā)現(xiàn)當(dāng)該比值在(40∶60)在相較于其他比例時(shí)更容易出峰，然后用100%的甲醇/水(或緩沖溶液)進(jìn)行試驗(yàn)，這樣可以很快地得到分離結(jié)果，然后根據(jù)出峰情況調(diào)整有機(jī)溶劑甲醇的比例和用磷酸調(diào)節(jié)pH。每次減少10%的有機(jī)溶劑甲醇的量，保留因子約增加3倍，調(diào)整的過(guò)程中，觀察各個(gè)峰的分離情況，發(fā)現(xiàn)當(dāng)甲醇100%/0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液且流動(dòng)相pH為2.9～3.1時(shí)出峰好，分離效果佳，而西布曲明用甲醇做時(shí)觀察峰的分離能達(dá)到理想效果，實(shí)驗(yàn)中由于時(shí)間有限，所以在沒(méi)做乙腈做流動(dòng)相時(shí)的實(shí)驗(yàn)，所以最終選定100%的甲醇和和0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(60∶40，用磷酸調(diào)至pH2.9～3.1)作為流動(dòng)相。

3.2.3 樣品的高效液相色譜圖 見(jiàn)圖1。

3.3 討論 確定樣品中有沒(méi)有加入鹽酸西布曲明相對(duì)較容易，通過(guò)簿層色譜就能分離檢視了，做簿層色譜中發(fā)現(xiàn)在鹽酸西布曲明的相應(yīng)斑點(diǎn)處有相應(yīng)的斑點(diǎn)。若是要最終確定是否添加有西布曲明則需要進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)確定。應(yīng)采用高效液相色譜法進(jìn)行定性的檢測(cè)，對(duì)確定為西布曲明有決定性的作用。

曾分別采用50%甲醇，甲醇，二次水為溶劑，進(jìn)行樣品的提取溶劑的比較，試驗(yàn)結(jié)果證明，在其他條件完全相同的情況下，其中50%甲醇會(huì)使藥品中的有效成分溶解不完全，而二次水提取的樣品雜質(zhì)峰較多，所以選擇了甲醇作為溶劑本實(shí)驗(yàn)在開(kāi)始時(shí)供試品溶液的制備時(shí)采用了超聲10，15，20min比較，發(fā)現(xiàn)15min的效果要好于10min的，但是20min的于15min的無(wú)明顯差異。所以采用以甲醇為溶劑經(jīng)過(guò)超聲處理15min的提取方法。

以上結(jié)果表明:本實(shí)驗(yàn)?zāi)苡行У臋z測(cè)出中成藥中非法添加的鹽酸西布曲明，對(duì)于控制中藥品種質(zhì)量有實(shí)際意義。

［1］劉吉金，李軍等.減肥食品或保健品中非法添加鹽酸西布曲明、鹽酸芬氟拉明、酚酞的快速檢測(cè)方法研究［J］.藥物分析雜志，2006，26(6):793.

［2］胡娟，鄭春松，朱新法的等.減肥中成藥中添加西布曲明西藥成分的檢測(cè)［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2006，41(12):945.