HPLC法測(cè)定復(fù)方杜仲流浸膏中松脂醇二葡萄糖苷的含量

★ 萬麗玲 李晶

(江西省中醫(yī)藥研究院 江西南昌330077)

復(fù)方杜仲流浸膏為中藥成方制劑復(fù)方杜仲片的主要組成，由杜仲(炒)、益母草、夏枯草、黃芩經(jīng)水煎煮提取而得。方中君藥杜仲，有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、降血壓功效;臣藥黃芩，有清熱燥濕、瀉火解毒、降血壓等作用。有文獻(xiàn)［1，2］以黃芩苷為研究對(duì)象，對(duì)其進(jìn)行了含量測(cè)定方法研究，但未見對(duì)杜仲進(jìn)行質(zhì)量控制的研究報(bào)道。由于杜仲所含的松脂醇二葡萄糖苷為其降血壓主要有效成分，因此本文參照中國(guó)藥典2010年版杜仲藥材標(biāo)準(zhǔn)，采用HPLC對(duì)復(fù)方杜仲流浸膏中松脂醇二葡萄糖苷進(jìn)行含量測(cè)定研究，并進(jìn)行了方法學(xué)考察。

1 儀器與藥品

HP-1100高效液相色譜儀(美國(guó)，包括1322A在線脫氣機(jī)、G1311A四元梯度泵、G1315A二極管陣列檢測(cè)器、HP化學(xué)工作站);SimplicityTM個(gè)人型超純水系統(tǒng)(Millipore公司)，CQ-250超聲波清洗儀(上海船舶電子設(shè)備研究所)，松脂醇二葡萄糖苷對(duì)照品(含量測(cè)定用，批號(hào):111537-200501，中國(guó)藥品生物制品檢定所);乙腈(色譜純)，水(純化水)，其它試劑均為分析純。復(fù)方杜仲流浸膏(自制)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件的選擇 色譜柱:Dikma Diamonsil C18(2)(4.6mm ×250mm，5μm)，流動(dòng)相:乙腈 -水(15∶85)，流速:1.0mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng) 227nm，柱溫:30℃。在此條件下對(duì)照品、供試品在約10min相同時(shí)間有一色譜峰，且陰性無干擾，見圖1、圖2、圖3。

圖1 對(duì)照品色譜圖

圖2 供試品色譜圖

圖3 陰性對(duì)照色譜圖

2.2 線性關(guān)系的考察 精密稱取松脂醇二葡萄糖苷對(duì)照品適量，加50%甲醇制成每1mL含松脂醇二葡萄糖苷0.3996mg的對(duì)照品溶液。取此對(duì)照品溶液適量，加甲醇分別稀釋每1mL含松脂醇二葡萄糖苷7.992μg、15.984μg、19.98μg、39.96μg、99.9μg、158.4μg、199.8μg 的對(duì)照品溶液，分別吸取 10μL，注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測(cè)定，將樣品濃度與峰面積進(jìn)行回歸，得松脂醇二葡萄糖苷回歸方程為:Y=28533.42X+44.05，r=0.9999(n=7)，在7.992～199.8μg·mL-1范圍內(nèi)松脂醇二葡萄糖苷濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3 精密度試驗(yàn) 取本品，研細(xì)，稱取約1.0g，精密稱定，置50mL具塞三角瓶中，精密加入50%甲醇25mL，稱定重量，超聲(功率250w，頻率33kHz)處理30min，放冷，再次稱定重量，加50%甲醇補(bǔ)足減少的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45μm)濾過，作為供試品溶液。精密吸取10μL，按上述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定供試品溶液中松脂醇二葡萄糖苷峰面積值，計(jì)算供試品峰面積值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差為1.73%。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液10μL，按上述色譜條件，分別在0h、1h、2h、4h、8h、12h 進(jìn)行測(cè)定，測(cè)得供試品中松脂醇二葡萄糖苷峰面積的RSD為2.07%。表明本品中對(duì)松脂醇二葡萄糖苷采用的提取方法穩(wěn)定可行。

2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品共6份，照精密度試驗(yàn)中供試品溶液制備方法制成供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算含量，RSD為1.52%。

2.6 加樣回收率試驗(yàn) 取本品適量，研細(xì)，取約0.5g，共6份，精密稱定，置具塞三角瓶中，各精密加入松脂醇二葡萄糖苷對(duì)照品溶液(0.01584mg/mL)10mL和50%甲醇溶液15mL，余照含量測(cè)定項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)，吸取10μL注入液相色譜儀中進(jìn)行含量測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。經(jīng)計(jì)算，平均回收率為99.38%，RSD為1.35%。

表1 松脂醇二葡萄糖苷回收率測(cè)定結(jié)果

2.7 樣品測(cè)定 取本品，按供試品溶液的制備方法制備供試液。分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。測(cè)定6批樣品中松脂醇二葡萄糖苷含量，結(jié)果為每克流浸膏含松脂醇二葡萄糖苷為 0.3126mg、0.3151mg、0.3226mg、0.3087mg、0.3151mg、0.3219mg。

3 討論

3.1 杜仲藥材中主要化學(xué)成分有木脂素類、環(huán)烯醚萜類、有機(jī)酸、黃酮、多糖及杜仲膠等有機(jī)化合物，美國(guó)威斯康星大學(xué)等研究發(fā)現(xiàn)，杜仲降低血壓的有效成分是松脂醇二葡萄糖苷［3］。由于松脂醇二葡萄糖苷為水溶性的苷類成分，因此，選用松脂醇二葡萄糖苷作為浸膏質(zhì)量評(píng)價(jià)研究對(duì)象。

3.2 本次實(shí)驗(yàn)中除了對(duì)色譜條件中流動(dòng)相進(jìn)行考察外，還分別對(duì)提取溶劑(甲醇、50%甲醇、乙醇、70%乙醇)、提取方法(超聲和回流)、提取時(shí)間(20min、30min、45min、60min)和溶劑用量(15mL、25mL、50mL)等條件進(jìn)行考察，結(jié)果表明，松脂醇二葡萄糖苷以25mL50%甲醇超聲提取30min效果最好。

［1］梁建寧，李波.復(fù)方杜仲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究［J］.中南藥學(xué)，2004，2(4):224-226.

［2］何勇，黃曉玲，李桂珍，等.復(fù)方杜仲片中黃芩苷的含量測(cè)定［J］.中成藥，2006，28(6):924-925.

［3］管淑玉，蘇薇薇.杜仲化學(xué)成分與藥理研究進(jìn)展［J］.中藥材，2003，26(2):124.