• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    太平洋鱈染色體核型及銀染分析

    2014-11-05 06:32:54姜志強(qiáng)李雅娟高小強(qiáng)
    水生生物學(xué)報(bào) 2014年1期
    關(guān)鍵詞:著絲點(diǎn)核型數(shù)目

    范 瑞 姜志強(qiáng) 李雅娟 高小強(qiáng) 錢 聰 高 敏

    (大連海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)部北方海水增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 大連 116023)

    近年來, 由于我國海水魚類資源過度利用以及環(huán)境污染等問題, 加快了海水魚類資源的衰退,再加上近親繁殖嚴(yán)重, 遺傳多樣性降低, 造成了一系列種質(zhì)退化現(xiàn)象, 因此, 魚類種質(zhì)資源的開發(fā)及改良尤為重要。太平洋鱈(Gadus macrocephalus)又名大頭鱈, 隸屬鱈形目、鱈科、鱈屬(Gadus), 屬冷水性底層魚類, 分布于太平洋北部沿岸海域, 從北太平洋西南部的黃海, 經(jīng)韓國至白令海峽和阿留申群島一帶沿海, 我國太平洋鱈主要產(chǎn)于黃海, 最高年產(chǎn)量達(dá)到2.6×107kg, 是我國北方乃至世界的重要海洋經(jīng)濟(jì)魚類之一。太平洋鱈具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值, 它的蛋白質(zhì)含量高, 脂肪含量低, 其肉質(zhì)白細(xì)鮮嫩, 清口不膩, 世界上不少國家把鱈魚作為主要食用魚類[1]。除鮮食外, 還加工成各種水產(chǎn)食品,此外鱈魚肝大而且含油量高, 含豐富的維生素 A和 D, 是提取魚肝油的原料。另外, 太平洋鱈生長溫度低, 耐嚴(yán)寒, 生長耗能少, 對于彌補(bǔ)我國北方冬季深水網(wǎng)箱養(yǎng)殖種類缺乏及室內(nèi)工廠化養(yǎng)殖品種的選擇提供了新的思路, 但是由于近年來太平洋鱈過度捕撈、環(huán)境污染嚴(yán)重、產(chǎn)卵地的破壞等使其產(chǎn)量大幅度降低, 嚴(yán)重威脅了其種群資源。因此,積極開展太平洋鱈的人工育苗與養(yǎng)殖對太平洋鱈種質(zhì)資源的恢復(fù)及北方深水網(wǎng)箱的有效利用具有重大意義。目前, 國外對同屬大西洋鱈研究的較多,Ghigliotti, et al.[2]研究表明大西洋鱈核型為16m/sm+30st/t, 且通過熒光免疫雜交技術(shù)對染色體上18S和5S rDNA進(jìn)行了定位研究, 為大西洋鱈遺傳圖譜的建立奠定了基礎(chǔ)。Ghigliotti, et al.[3]通過靜水壓方法成功誘導(dǎo)了大西洋鱈雌核發(fā)育二倍體, 并進(jìn)一步完善了大西洋鱈全雌化理論和性別決定機(jī)制。而有關(guān)太平洋鱈的研究主要集中在種群分布[4,5]、繁殖生物學(xué)[6,7]、早期發(fā)育[8]以及遺傳多樣性[9]等方面, 在細(xì)胞遺傳學(xué)特別是染色體核型研究還較少, 而在國內(nèi)關(guān)于太平洋鱈的研究也只是在繁殖及早期脅迫研究等方面, 如姜志強(qiáng)等[10]對大連海域太平洋鱈的繁殖力、卵徑分布、性腺指數(shù)和肝指數(shù)進(jìn)行周年調(diào)查, 充分闡述了太平洋鱈不同發(fā)育階段性腺發(fā)育特點(diǎn)和營養(yǎng)來源; 王偉等[11]對不同溫度脅迫下太平洋鱈仔稚魚成活率及生理生化進(jìn)行了研究, 結(jié)果表明培育溫度為 8℃時(shí), 仔稚魚成活率最高, 15℃時(shí)最低, 且體內(nèi)抗氧化還原酶系在溫度脅迫下最先表現(xiàn)出變化, 其他方面幾乎為空白。因此, 在本研究中, 作者對大連海域的太平洋鱈染色體核型進(jìn)行了比較分析, 以期了解其遺傳背景, 為開展太平洋鱈的人工育苗提供細(xì)胞遺傳學(xué)參數(shù), 也為其種群恢復(fù)、種質(zhì)資源的開發(fā)、遺傳育種及演化地位提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    實(shí)驗(yàn)用魚采自遼寧省大連市黑石礁海區(qū), 為性腺發(fā)育成熟的野生太平洋鱈, 共5尾(3♂, 2♀), 體質(zhì)量為(520—990) g?;铙w運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室放置于 14℃海水充氣暫養(yǎng)。

    1.2 染色體的制備

    樣本前處理 參照林義浩[12]PHA直接注射法制備染色體標(biāo)本。實(shí)驗(yàn)前一天注射PHA(6 μg/g魚體重), 18h后, 第二次注射PHA劑量同上, 5h后活體腹腔注射0.1%秋水仙素(6 μg/g魚體重)。

    腎懸浮液的制備 注射秋水仙素2.5h后實(shí)驗(yàn)魚斷尾放血15min, 取頭腎置于生理鹽水中多次沖洗, 棄去組織碎塊并剪碎, 用紗布過濾細(xì)胞懸液至離心管中, 1500 r/min離心5min, 用生理鹽水洗滌細(xì)胞2次, 再用0.075 mol/L 的KCl溶液于低滲處理30min, 最后用新鮮配制的卡諾氏液(甲醇︰冰醋酸=3︰1 v/v)固定3次, 每次15min。

    制片 采用冷滴片法制片, 空氣干燥過夜。完全干燥的染色體玻片用pH為6.8的磷酸緩沖液配置的體積分?jǐn)?shù)為10%的Giemsa染色液染色45min,自然干燥后顯微鏡觀察拍照。

    核型分析 選取圖像清晰、染色體分散較好的中期分裂相計(jì)數(shù)以確定染色體數(shù)目, 并選出10個(gè)染色體分散良好、形態(tài)清晰、長度適中的中期分裂相在油鏡下進(jìn)行顯微照相、放大、測量、統(tǒng)計(jì), 根據(jù) Levan, et al.[13]的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類、配對和核型分析。染色體相對長度計(jì)算公式: 染色體相對長度=(實(shí)測長度/全部染色體長度總和)×100。

    1.3 Ag-NORs顯帶

    參照Howell, et al.[14]的快速銀染法略加修改。將 50% AgNO3溶液與 2% 明膠溶液(內(nèi)含 1%甲酸)以2︰1比例混合后, 立即均勻滴加到染色體標(biāo)本上,加蓋玻片; 70 ℃處理2—5min。當(dāng)整張玻片呈棕黃色時(shí)取出, 用70℃蒸餾水沖去蓋玻片, 干燥后鏡檢。

    2 結(jié)果

    2.1 太平洋鱈體細(xì)胞染色體數(shù)目

    本實(shí)驗(yàn)對137個(gè)分散良好、染色體形態(tài)清晰的中期分裂相進(jìn)行計(jì)數(shù)。結(jié)果表明, 染色體數(shù)目為 46的分裂相最多, 有94個(gè), 占68.61%(表1), 由此可確定太平洋鱈二倍體染色體眾數(shù)為46, 即2n=46。

    表1 太平洋鱈染色體中期分裂相的統(tǒng)計(jì)結(jié)果Tab. 1 Chromosome numbers of Gadus macrocephalus

    2.2 染色體核型

    選擇分散良好, 形態(tài)清晰, 數(shù)目完整的染色體中期分裂相進(jìn)行顯微拍照, 測量其染色體臂長, 計(jì)算出染色體相對長度, 臂比并統(tǒng)計(jì)染色體類型。結(jié)果分析表明, 太平洋鱈染色體核型公式為:2n=8m+6sm+20st+12t, NF=60, 即有 4對中部著絲點(diǎn)染色體(m)、3對亞中部著絲點(diǎn)染色體(sm)、10對亞端部著絲點(diǎn)染色體(st)和 6對端部著絲點(diǎn)染色體(t), 染色體臂數(shù)(NF)為60 (圖 1、圖2)。在進(jìn)行了顯微拍照的染色體中期分裂相中, 太平洋鱈染色體的大小差異較大, 最大染色體相對長度為6.53±0.11, 最小染色體相對長度為 2.37±0.03, 在第 12對染色體中有 l個(gè)亞端部著絲點(diǎn)染色體帶有明顯的次縊痕。雌魚與雄魚的染色體核型無明顯差異, 未發(fā)現(xiàn)與性別相關(guān)的異型染色體。染色體核型分析數(shù)據(jù)見表2。

    2.2 Ag-NORs帶型

    太平洋鱈銀染位點(diǎn)清晰可見, 對中期分裂相 85個(gè), 間期核 50個(gè)進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析, 太平洋鱈Ag-NORs的數(shù)目為1—3, 在不同細(xì)胞中表現(xiàn)出多態(tài)性且各種數(shù)目的 Ag-NORs出現(xiàn)的頻率差異性較大;在間期核中, 具有 2個(gè)銀染位點(diǎn)的比列最高, 占總個(gè)數(shù)的82%, 1個(gè)銀染位點(diǎn)其次, 占總個(gè)數(shù)的12%, 3個(gè)銀染位點(diǎn)的最少為6%。在分裂期, 具有1個(gè)銀染位點(diǎn)的占87.1%, 具有2個(gè)銀染位點(diǎn)的占12.9%。在多數(shù)中期分裂相中, 第12對同源染色體的一條近著絲粒次縊痕區(qū)具有明顯的銀染位點(diǎn), 并沒有發(fā)現(xiàn)Ag-NORs聯(lián)合現(xiàn)象。

    表2 太平洋鱈各染色體的相對長度和臂比值Tab. 2 The relative length and arm ratio of chromosomes of Gadus macrocephalus

    圖1 太平洋鱈染色體中期分裂相(箭頭示次縊痕)Fig. 1 Metaphase chromosomes of Gadus macrocephalus

    圖2 太平洋鱈染色體核型分析Fig. 2 Karyotype of Gadus macrocephalus

    3 討論

    染色體作為遺傳信息的載體, 對生物的進(jìn)化、變異和生存都至關(guān)重要。在脊椎動(dòng)物中, 開展魚類染色體的研究不僅僅對認(rèn)識(shí)和探索魚類的分類系統(tǒng)、進(jìn)化關(guān)系及染色體演化過程具有重要意義, 還可為魚類遺傳育種提供細(xì)胞遺傳學(xué)依據(jù)[6,16]。到目前為止, 已報(bào)道染色體核型的鱈科魚類8種(包括本研究在內(nèi)), 隸屬于5個(gè)屬。由表3可知, 鱈形目鱈科魚類二倍體染色體數(shù)差異性較大(2n=26-48), 核型組成中中部和亞中部染色體相對較多, 核型變化呈現(xiàn)多態(tài)性, 且不具與性別相關(guān)的異型染色體。Klinkhardt對鱈科魚類的研究表明, 鱈科各屬之間核型的高度多變性, 這暗示了染色體臂間倒位和羅伯遜易位可能是該類群魚類核型進(jìn)化的主要機(jī)制[17]。Caputo, et al.[18]研究表明形目魚類染色體數(shù)目及臂數(shù)的減少與染色體串聯(lián)融合具有直接關(guān)系。由此可知, 鱈科各屬魚類二倍體染色體數(shù)目差異及核型的多樣性主要是染色體發(fā)生了不同程度的變異所導(dǎo)致的, 即染色體結(jié)構(gòu)在進(jìn)化上發(fā)生了較大變化, 表現(xiàn)出不保守性。

    很多研究表明魚類的進(jìn)化程度與染色體有一定的關(guān)系。周暾[19]、小島吉雄[20]等均認(rèn)為在魚類系統(tǒng)進(jìn)化上越是處于上位, 染色體越收斂, 端部著絲點(diǎn)染色體多, 中部和亞中部染色體少或缺。如石斑魚亞科種類染色體大多數(shù)為端位著絲點(diǎn)染色體, 染色體臂數(shù)少, 典型的高位類魚類[21]。寬突鱈屬和平頭鱈屬魚類具有較多的中部或亞中部著絲粒染色體,端部著絲粒染色體少, 因此, 在魚類系統(tǒng)演化上應(yīng)屬于低位類群, 而其他鱈屬魚類均正好相反, 則屬于中高位類群; 也有研究表明[22], 在特定的分類類群中, 具有較多端部或亞端部著絲粒染色體的種類為原始類群, 而具有較多中部或亞中部著絲粒染色體的是特化類群, 即染色體臂數(shù)多的類群比染色體臂數(shù)少的類群更為特化。鱈屬中太平洋鱈和大西洋鱈具有相同的染色體數(shù)目, 但太平洋鱈具有相對較多端部或亞端部著絲粒染色體, 且染色體臂數(shù)相對少, 屬于鱈屬的原始類型, 應(yīng)該是鱈屬魚類演化過程中較早出現(xiàn)的魚類。 寬突鱈屬的細(xì)身寬突鱈和寬突鱈在核型和染色體數(shù)目相一致, 說明了種間進(jìn)化的保守性和分類地位的一致性; 青鱈和綠青鱈雖然屬于同一屬, 但染色體數(shù)目、核型及臂數(shù)均不相同,主要是兩個(gè)種群在進(jìn)化過程中染色體發(fā)生了易位、倒位等重組現(xiàn)象, 表現(xiàn)出了染色體的多態(tài)性。

    表3 十種鱈科魚類的染色體特征Tab. 3 Chromosome characteristics of 10 species in genus Gadidae

    本實(shí)驗(yàn)中太平洋鱈核型為 2n=46, 8m+6ms+20st+12t, NF=60, Ghigliotti, et al.[2]研究的同屬種大西洋鱈 2n=46, 16m/sm+30st/t, NF=62, 兩者具有相同的染色體數(shù)目, 1對較大的中部著絲點(diǎn)染色體, 且均未發(fā)現(xiàn)有性別相關(guān)的異染色體, 核型組成上存在一定的差異。毛連菊等[25]研究表明, 魚類染色體臂間倒位可以使端部或亞端部著絲點(diǎn)染色體變?yōu)橹胁炕騺喼胁恐z點(diǎn)染色體, 只改變?nèi)旧w形態(tài)及總臂數(shù), 不改變?nèi)旧w數(shù)目。因此, 太平洋鱈和大西洋鱈核型的差異可能是發(fā)生了染色體臂間倒位。王祖熊等研究表明, 魚類雜交育種中核型越相近, 雜交越能成功[26], 可見, 此研究對太平洋鱈與同屬的大西洋鱈的雜交育種提供了理論依據(jù), 為種質(zhì)資源的開發(fā)提供了新的方向。

    Ag-NORs的數(shù)目、分布及形態(tài)特征是物種親緣關(guān)系和染色體進(jìn)化的指標(biāo), 且Ag-NORs通常分布在染色體次縊痕和隨體區(qū)域[27,28], 有研究也指出, 核仁組織區(qū)是染色體上與核仁形成有關(guān)的區(qū)域, 位于染色體的次縊痕部位, 次縊痕是染色體上的一個(gè)縊縮的部位, 是核仁組織區(qū)所在的位置, 每種生物的染色體組中一般至少有一條或一對染色體上有次縊痕, 它可作為鑒定某條染色體的標(biāo)志[29,30]。在本實(shí)驗(yàn)中, 太平洋鱈第12對同源染色體中有l(wèi)個(gè)亞端部著絲點(diǎn)染色體帶有明顯的次縊痕, 且次縊痕的大小、形態(tài)及位置與Ag-NORs的分析結(jié)果相吻合, 可見, 次縊痕所在的位置即為核仁組織區(qū)。有些魚類在中期分裂相中, Ag-NORs僅出現(xiàn)在同源染色體之中的一條上, 稱之為NORs的活性異形(NOR activity heteromorphism)[31,32]。在本實(shí)驗(yàn)中, 太平洋鱈大多數(shù)分裂期的同源染色體僅一條短臂末端發(fā)現(xiàn)了銀染位點(diǎn), 與上述結(jié)論相一致, 可見太平洋鱈的同源染色體表現(xiàn)出了 NORs活性異形現(xiàn)象, 這也說明了在細(xì)胞有絲分裂過程中, 太平洋鱈染色體上的rRNA基因轉(zhuǎn)錄活性存在著差異性。

    本實(shí)驗(yàn)也經(jīng)過不斷地摸索最終解決了太平洋鱈染色體制備過程中劑量和時(shí)間等問題, 得出最佳PHA處理劑量為6 μg/g, 作用時(shí)間兩次, 一共 23h,秋水仙素劑量為6 μg/g, 作用時(shí)間為2.5h時(shí)能獲得大量的中期分裂相。

    迄今, 對于鱈形目魚類細(xì)胞遺傳學(xué)研究仍舊相當(dāng)匱乏, 對鱈魚資源的開發(fā)仍有很大空間, 本文結(jié)果的提出為其他鱈科魚的核型分析及系統(tǒng)進(jìn)化提供了理論依據(jù), 也為太平洋鱈人工繁育、遺傳育種及種質(zhì)資源的保護(hù)開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

    猜你喜歡
    著絲點(diǎn)核型數(shù)目
    有機(jī)物“同分異構(gòu)體”數(shù)目的判斷方法
    SNP-array技術(shù)聯(lián)合染色體核型分析在胎兒超聲異常產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用
    抗著絲點(diǎn)抗體B陽性的臨床價(jià)值探討
    再談著絲粒、著絲點(diǎn)在有絲分裂和減數(shù)分裂中的修訂
    抗著絲點(diǎn)抗體在多種疾病中的變化和意義
    《哲對寧諾爾》方劑數(shù)目統(tǒng)計(jì)研究
    對著絲點(diǎn)分裂還是著絲粒分裂的分析
    牧場里的馬
    2040例不孕不育及不良孕育人群的染色體核型分析
    染色體核型異?;颊呷蚪M芯片掃描結(jié)果分析
    一级黄色大片毛片| 国产高清视频在线播放一区| 极品教师在线免费播放| 国产精品98久久久久久宅男小说| 黄色丝袜av网址大全| 国产精品二区激情视频| 色综合欧美亚洲国产小说| 一级片'在线观看视频| 大型av网站在线播放| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 男女床上黄色一级片免费看| 精品人妻1区二区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 黄色丝袜av网址大全| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 久久精品91无色码中文字幕| 他把我摸到了高潮在线观看 | 亚洲国产看品久久| 无人区码免费观看不卡 | 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 欧美中文综合在线视频| 亚洲天堂av无毛| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 日韩人妻精品一区2区三区| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 99在线人妻在线中文字幕 | 日韩中文字幕欧美一区二区| 久久久国产一区二区| 亚洲熟女精品中文字幕| 久久国产精品大桥未久av| 啦啦啦 在线观看视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 久久久久久久国产电影| 女性被躁到高潮视频| 在线播放国产精品三级| 人人妻人人澡人人看| 亚洲人成电影观看| 国产福利在线免费观看视频| videosex国产| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 十八禁高潮呻吟视频| 999精品在线视频| 亚洲av片天天在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 欧美精品一区二区大全| 国产精品.久久久| 日韩欧美一区二区三区在线观看 | 国产麻豆69| 最近最新免费中文字幕在线| av超薄肉色丝袜交足视频| a级毛片在线看网站| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲,欧美精品.| videos熟女内射| 日韩欧美国产一区二区入口| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 久久国产精品影院| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 99九九在线精品视频| 精品国产乱子伦一区二区三区| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 51午夜福利影视在线观看| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产欧美亚洲国产| 欧美黑人精品巨大| 日韩有码中文字幕| 最新的欧美精品一区二区| 午夜福利乱码中文字幕| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 成人18禁在线播放| 国产av又大| 国产av精品麻豆| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 午夜视频精品福利| 黄色视频在线播放观看不卡| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 91九色精品人成在线观看| 99久久精品国产亚洲精品| 香蕉丝袜av| 他把我摸到了高潮在线观看 | 成人国产一区最新在线观看| 香蕉久久夜色| 青青草视频在线视频观看| 国产高清激情床上av| 亚洲专区国产一区二区| 人妻久久中文字幕网| 丝袜人妻中文字幕| 99re6热这里在线精品视频| 亚洲精品在线美女| 女同久久另类99精品国产91| 精品高清国产在线一区| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲色图综合在线观看| 国产成人欧美在线观看 | 色在线成人网| 欧美性长视频在线观看| 99香蕉大伊视频| 91精品三级在线观看| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产三级黄色录像| 精品亚洲成a人片在线观看| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 成人永久免费在线观看视频 | 999精品在线视频| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 日本五十路高清| 制服人妻中文乱码| 国产又色又爽无遮挡免费看| www.999成人在线观看| 自线自在国产av| 在线av久久热| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲专区国产一区二区| √禁漫天堂资源中文www| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产欧美亚洲国产| 精品久久久精品久久久| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲第一青青草原| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 女人精品久久久久毛片| 后天国语完整版免费观看| 亚洲av电影在线进入| 宅男免费午夜| 男人舔女人的私密视频| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 女性被躁到高潮视频| 男人舔女人的私密视频| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 久久久久精品人妻al黑| 成人黄色视频免费在线看| 欧美精品av麻豆av| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 国产日韩欧美视频二区| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 一二三四社区在线视频社区8| 母亲3免费完整高清在线观看| 操美女的视频在线观看| 脱女人内裤的视频| 悠悠久久av| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 国产高清国产精品国产三级| 美女扒开内裤让男人捅视频| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 成人国产一区最新在线观看| 亚洲久久久国产精品| 黄片大片在线免费观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 成人国语在线视频| 一区二区三区精品91| 大香蕉久久成人网| av天堂久久9| 亚洲专区字幕在线| av天堂在线播放| 日本精品一区二区三区蜜桃| 人妻久久中文字幕网| 两人在一起打扑克的视频| 最新美女视频免费是黄的| 曰老女人黄片| 国产亚洲精品第一综合不卡| 成在线人永久免费视频| 狂野欧美激情性xxxx| 一本综合久久免费| 免费少妇av软件| 中文字幕人妻丝袜制服| 久久中文字幕一级| 免费看十八禁软件| 99久久精品国产亚洲精品| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 99re在线观看精品视频| 亚洲午夜理论影院| 99国产精品99久久久久| 黄色怎么调成土黄色| 18禁裸乳无遮挡动漫免费视频| 热99re8久久精品国产| bbb黄色大片| 日韩有码中文字幕| 捣出白浆h1v1| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 一进一出好大好爽视频| 午夜激情av网站| 老司机亚洲免费影院| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 热re99久久精品国产66热6| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 曰老女人黄片| 一本综合久久免费| 午夜91福利影院| www日本在线高清视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产精品二区激情视频| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 91大片在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 1024香蕉在线观看| 久久精品亚洲av国产电影网| 国产精品电影一区二区三区 | 国产熟女午夜一区二区三区| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 9191精品国产免费久久| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 欧美 日韩 精品 国产| 精品少妇黑人巨大在线播放| 一区二区av电影网| 超碰成人久久| 天堂动漫精品| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 国产成人免费观看mmmm| 久久久久网色| 免费在线观看完整版高清| tocl精华| 丝袜美足系列| 999久久久精品免费观看国产| 亚洲男人天堂网一区| 91av网站免费观看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 天天躁日日躁夜夜躁夜夜| 97人妻天天添夜夜摸| 日韩免费av在线播放| 免费高清在线观看日韩| 一本色道久久久久久精品综合| 国产麻豆69| 国产精品久久电影中文字幕 | 国产精品九九99| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| av国产精品久久久久影院| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 黄色视频,在线免费观看| 国产麻豆69| 天堂8中文在线网| 国产99久久九九免费精品| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| aaaaa片日本免费| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 99re在线观看精品视频| 国产精品 国内视频| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 老汉色∧v一级毛片| 老汉色av国产亚洲站长工具| 99久久精品国产亚洲精品| 国产激情久久老熟女| 日日夜夜操网爽| 12—13女人毛片做爰片一| 午夜福利免费观看在线| 2018国产大陆天天弄谢| 中文字幕制服av| 国产av精品麻豆| 成人国产av品久久久| 亚洲av电影在线进入| 久久 成人 亚洲| 久久人妻av系列| 久久青草综合色| av一本久久久久| 在线观看免费视频网站a站| 丝袜在线中文字幕| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产日韩欧美视频二区| 欧美精品啪啪一区二区三区| 欧美精品啪啪一区二区三区| 黄色成人免费大全| 国产一区有黄有色的免费视频| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 天天添夜夜摸| 天堂8中文在线网| 欧美+亚洲+日韩+国产| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 久久 成人 亚洲| av在线播放免费不卡| 18在线观看网站| 黄色怎么调成土黄色| av线在线观看网站| 国产黄色免费在线视频| 欧美人与性动交α欧美软件| 午夜福利乱码中文字幕| 黄片大片在线免费观看| 国产免费视频播放在线视频| 日韩视频在线欧美| 久久久国产成人免费| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产伦理片在线播放av一区| 久久午夜亚洲精品久久| 国产精品99久久99久久久不卡| 高清视频免费观看一区二区| 黄色视频不卡| av片东京热男人的天堂| 黄色视频在线播放观看不卡| 午夜福利乱码中文字幕| 操出白浆在线播放| 下体分泌物呈黄色| 亚洲 国产 在线| 欧美激情 高清一区二区三区| 老司机午夜十八禁免费视频| 国产免费视频播放在线视频| 国产一卡二卡三卡精品| 亚洲免费av在线视频| 激情在线观看视频在线高清 | 最新在线观看一区二区三区| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 肉色欧美久久久久久久蜜桃| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 亚洲精品国产区一区二| 成人亚洲精品一区在线观看| 黄色丝袜av网址大全| 亚洲国产成人一精品久久久| 男女边摸边吃奶| 亚洲伊人久久精品综合| 亚洲五月色婷婷综合| 国产亚洲精品第一综合不卡| 黄片大片在线免费观看| 国产成+人综合+亚洲专区| 欧美变态另类bdsm刘玥| 操出白浆在线播放| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 丁香六月天网| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲欧美色中文字幕在线| 又大又爽又粗| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 亚洲精品乱久久久久久| 国产精品久久久久久精品古装| 免费少妇av软件| 桃红色精品国产亚洲av| 欧美性长视频在线观看| 国产午夜精品久久久久久| 麻豆av在线久日| 欧美大码av| 亚洲一区中文字幕在线| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 老司机福利观看| 悠悠久久av| 俄罗斯特黄特色一大片| 777米奇影视久久| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 中文字幕人妻丝袜制服| 啦啦啦在线免费观看视频4| 久久狼人影院| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产精品国产高清国产av | 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 国产在线一区二区三区精| 日本黄色视频三级网站网址 | 欧美日韩福利视频一区二区| 高清在线国产一区| 国产亚洲av高清不卡| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 亚洲七黄色美女视频| 国产免费福利视频在线观看| 男女床上黄色一级片免费看| 大陆偷拍与自拍| 国产区一区二久久| 日日爽夜夜爽网站| 国产视频一区二区在线看| 国产不卡一卡二| 精品国产乱码久久久久久男人| 精品一区二区三区av网在线观看 | 日韩欧美国产一区二区入口| 欧美精品高潮呻吟av久久| 99re在线观看精品视频| 午夜福利一区二区在线看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产亚洲av高清不卡| 国产福利在线免费观看视频| 精品高清国产在线一区| 中文字幕色久视频| 99国产精品一区二区三区| 国产精品99久久99久久久不卡| 黄色视频在线播放观看不卡| 久久久国产欧美日韩av| 美女午夜性视频免费| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 啦啦啦在线免费观看视频4| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 午夜精品国产一区二区电影| 一夜夜www| 国产一区二区 视频在线| 下体分泌物呈黄色| 亚洲欧美激情在线| 黄片小视频在线播放| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产成人免费观看mmmm| 在线观看免费高清a一片| 国产在线一区二区三区精| 久久中文字幕一级| 欧美一级毛片孕妇| 国产免费视频播放在线视频| 亚洲少妇的诱惑av| 在线天堂中文资源库| 99精品久久久久人妻精品| 日本av手机在线免费观看| 纯流量卡能插随身wifi吗| 一级片免费观看大全| 国产成+人综合+亚洲专区| 俄罗斯特黄特色一大片| 啦啦啦在线免费观看视频4| 亚洲中文av在线| 无人区码免费观看不卡 | 国产精品一区二区在线观看99| 99香蕉大伊视频| 美女国产高潮福利片在线看| 91成人精品电影| 国产免费福利视频在线观看| 午夜福利,免费看| 另类亚洲欧美激情| 欧美日韩成人在线一区二区| 国产99久久九九免费精品| av天堂在线播放| 亚洲av日韩在线播放| 欧美黄色淫秽网站| 欧美国产精品va在线观看不卡| 国产不卡一卡二| 最近最新免费中文字幕在线| 色综合欧美亚洲国产小说| 国产成+人综合+亚洲专区| 飞空精品影院首页| 欧美精品一区二区大全| 一级毛片电影观看| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 精品乱码久久久久久99久播| 超色免费av| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 岛国在线观看网站| 亚洲久久久国产精品| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产成人精品在线电影| 国产片内射在线| 久久人人97超碰香蕉20202| 老司机影院毛片| 无人区码免费观看不卡 | 欧美精品av麻豆av| 日韩中文字幕欧美一区二区| 男女床上黄色一级片免费看| 久久免费观看电影| www.精华液| 一区二区三区激情视频| 国产有黄有色有爽视频| 精品卡一卡二卡四卡免费| 亚洲第一av免费看| 欧美乱妇无乱码| 色播在线永久视频| avwww免费| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 精品福利观看| 女人久久www免费人成看片| 国产伦人伦偷精品视频| 啪啪无遮挡十八禁网站| 日韩三级视频一区二区三区| 大型av网站在线播放| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 欧美乱码精品一区二区三区| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲av日韩在线播放| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 人妻 亚洲 视频| 十八禁人妻一区二区| 亚洲欧美日韩高清在线视频 | 国产亚洲精品久久久久5区| 国产成人av激情在线播放| 一进一出好大好爽视频| 多毛熟女@视频| 日韩视频在线欧美| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 免费黄频网站在线观看国产| www.熟女人妻精品国产| 久久久精品免费免费高清| 国产激情久久老熟女| 日韩精品免费视频一区二区三区| 亚洲avbb在线观看| 国产不卡一卡二| 2018国产大陆天天弄谢| 高清视频免费观看一区二区| 淫妇啪啪啪对白视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 91成年电影在线观看| 欧美激情久久久久久爽电影 | 国产不卡av网站在线观看| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 日本av免费视频播放| 亚洲人成77777在线视频| 国产精品九九99| 精品国产乱码久久久久久男人| 超色免费av| 99久久99久久久精品蜜桃| 午夜福利欧美成人| 亚洲天堂av无毛| 精品国产国语对白av| 成年人免费黄色播放视频| 欧美精品av麻豆av| 国产成人免费无遮挡视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 国产在线免费精品| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| av线在线观看网站| 久久中文字幕人妻熟女| 亚洲精品久久午夜乱码| 热99久久久久精品小说推荐| aaaaa片日本免费| 久久99热这里只频精品6学生| 男人舔女人的私密视频| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 91大片在线观看| 一个人免费看片子| 99香蕉大伊视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 久久久久国产一级毛片高清牌| 亚洲精品在线美女| 91成年电影在线观看| 久久99热这里只频精品6学生| 久久亚洲精品不卡| 国产熟女午夜一区二区三区| aaaaa片日本免费| 精品少妇久久久久久888优播| 9热在线视频观看99| 91成人精品电影| 一级片免费观看大全| 色综合婷婷激情| 午夜福利乱码中文字幕| 黄色片一级片一级黄色片| 757午夜福利合集在线观看| 精品乱码久久久久久99久播| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲精品久久午夜乱码| 99九九在线精品视频| 一个人免费看片子| 久久精品人人爽人人爽视色| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 欧美日韩亚洲高清精品| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 高清黄色对白视频在线免费看| 国精品久久久久久国模美| 啦啦啦免费观看视频1| 99精品欧美一区二区三区四区| 大香蕉久久成人网| 两个人看的免费小视频| 精品福利观看| 成在线人永久免费视频| 成年女人毛片免费观看观看9 | 亚洲成人免费电影在线观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 一本久久精品| 51午夜福利影视在线观看| 一级片免费观看大全| 国产在线精品亚洲第一网站| 男女床上黄色一级片免费看| 亚洲综合色网址| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 国产成人精品在线电影| e午夜精品久久久久久久| 国产日韩欧美视频二区| 99国产综合亚洲精品| 日韩视频一区二区在线观看| 啪啪无遮挡十八禁网站| 怎么达到女性高潮| 在线亚洲精品国产二区图片欧美| av视频免费观看在线观看| 狂野欧美激情性xxxx| 午夜激情av网站| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 在线天堂中文资源库| 国产97色在线日韩免费| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲 国产 在线| 欧美在线一区亚洲| 手机成人av网站| 久久精品成人免费网站| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲人成电影免费在线| 极品少妇高潮喷水抽搐| 国产成人欧美在线观看 | 亚洲,欧美精品.| tocl精华| 美女主播在线视频| 亚洲国产欧美网| www.自偷自拍.com| 老鸭窝网址在线观看| 色视频在线一区二区三区| 午夜两性在线视频| 亚洲av日韩精品久久久久久密| av又黄又爽大尺度在线免费看| 国产精品免费大片| 欧美日韩精品网址| 国产伦理片在线播放av一区| 欧美精品av麻豆av| 九色亚洲精品在线播放| 久久久水蜜桃国产精品网| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 欧美激情 高清一区二区三区| 51午夜福利影视在线观看| 啦啦啦视频在线资源免费观看| 美女视频免费永久观看网站| 亚洲人成77777在线视频| 国产精品九九99| 香蕉国产在线看| 国产片内射在线| 免费在线观看影片大全网站| 中文字幕人妻丝袜制服| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 99国产精品99久久久久| 搡老岳熟女国产| 色视频在线一区二区三区| 日韩免费av在线播放|