HPLC法測定復(fù)方魚腥草片中綠原酸的含量

天津市寶坻區(qū)藥品檢驗所（301800）曹金枝 蘇志剛

復(fù)方魚腥草片是由魚腥草等五位藥材經(jīng)提取制成的中藥制劑，具有清熱解毒的功效。臨床用于外感風(fēng)熱引起的咽喉疼痛；急性咽炎等癥。收載于《中國藥典》2010年版一部，標準中該制劑項下有TLC鑒別，黃芩苷含量測定項[1]。本文采用高效液相色法對其綠原酸的含量進行測定，結(jié)果滿意。

1 儀器與試藥

高效液相色譜儀：島津LC-2010AHT，試藥：綠原酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110753-201314）；陰性樣品自制（藥材均購自市場），復(fù)方魚腥草片市售品為廣東某制藥有限公司生產(chǎn)（批號1311106，1309104，1307094），水為超純水，乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：phenomenex Luna C18,5μm，250×4.60mm;流動相：乙腈-0.05%磷酸（10∶90）；流速：1.0ml·min-1；檢測波長：327nm；柱溫：40℃。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對照品適量（10.10mg），置25ml量瓶中，加70%乙醇溶解至刻度，精取5ml置50ml量瓶，加70%乙醇溶解至刻度，搖勻（每1ml含40μg的綠原酸），即得。

2.3 供試品溶液的制備 取本品l0片，精密稱定，研細，精密稱取細粉約1g，置25ml量瓶，精密加入70%乙醇25ml，稱定重量，超聲波處理30min，放冷，補足減失的重量，搖勻、濾過，精取續(xù)濾液即得。

2.4 陰性對照溶液的制備及干擾試驗 按處方及制劑工藝取除金銀花外的其他各藥物，制得陰性對照溶液。按上述色譜條件下測定，結(jié)果表明，陰性樣品無干擾。供試品溶液色譜圖中綠原酸的保留時間約26min，理論塔板數(shù)以綠原酸計算為7000。(見附圖1～3)。

附表1 回收率試驗數(shù)據(jù)表

附表2 樣品測定結(jié)果

2.5 線性關(guān)系考察 精密稱取綠原酸對照品適量，加70%乙醇制成每毫升含40μg的溶液。精密吸取對照品溶液5、10、15、20、25ul，按上述色譜條件測定峰面積，以進樣量(ul)為橫坐標，綠原酸峰面積為縱坐標，得回歸方程y=116327x+105065，r=0.9997，表明綠原酸在0.20～1.0μg范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。（見附圖4）

附圖1 A對照品溶液色譜圖

附圖2 B樣品溶液色譜圖

附圖3 C陰性對照色譜圖

附圖4 綠原酸與峰面積的線性關(guān)系

2.6 精密度試驗 取對照品溶液10μl，連續(xù)進樣6次，分別測其峰面積，RSD為0.16%。

2.7 重復(fù)性試驗 取同一批號樣品5份，按供試品溶液制備方法制備，依法測定，含量RSD為0.61%。

2.8 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液于0、2、4、6、12、24h測定，RSD為1.2%,結(jié)果表明在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗 取已知含量的樣品6份，分別加入一定量的綠原酸對照品(0.088mg.ml-1)25ml按供試品溶液制備與測定項下同法定，結(jié)果平均回收率為99.54%，RSD：0.92%。（結(jié)果見附表1）2.10 樣品的含量測定 取本品3個樣品，按供試品項下方法試驗，分別精密吸取上述對照品與供試品溶液各10μl，按上述色譜條件測定，記錄色譜圖，以外標法計算樣品中的綠原酸含量。（結(jié)果見附表2）

3 討論

3.1 經(jīng)測定，綠原酸在327nm處有最大吸收，本試驗選擇327nm為檢測波長，保證了檢測的靈敏度。

3.2 在供試品溶液制備時，以30%的乙醇，50%的乙醇，70%的乙醇為提取溶劑，分別超聲提取30min。以70%的乙醇為溶劑，分別超聲提取10、20、30分鐘，以30分鐘提取完全。因此，采用“2.3”制備供試品溶液。

3.3 曾試驗改變流動相比例，以甲醇∶水∶冰醋酸(20∶80∶0.1)，乙腈∶0.05%磷酸（10∶90）為流動相，分別注入樣品溶液，結(jié)果以本實驗流動相比例最佳，綠原酸與相鄰峰基線分離較好，分離度約為2.8。市售品與自制品含量差異較大，除與原料有關(guān)外，與其生產(chǎn)工藝也有關(guān)系。

3.4 本法操作簡便，結(jié)果準確，可用于本制劑中綠原酸的含量測定。