正交試驗(yàn)法優(yōu)選黃芩飲片最佳切制工藝

戴衍朋，周 倩，孫立立*，曹玉華，王建剛

(1山東省中醫(yī)藥研究院，山東濟(jì)南 250014;2山東博康中藥飲片有限公司，山東濟(jì)南 250014)

黃芩為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根，具有清熱燥濕，瀉火解毒，止血，安胎的功效［1］。黃芩臨床應(yīng)用廣泛［2-5］，為清熱燥濕，瀉火解毒之要藥。除中醫(yī)配方外，還大量用作中成藥和提取黃芩素、黃芩苷的制藥原料。

黃芩無論是中醫(yī)處方調(diào)劑用還是制備中成藥，均是以飲片為原料，黃芩飲片的制備方法，《中國藥典》2010年版［1］規(guī)定為沸水煮10 min，取出，悶透或蒸0.5 h，切薄片。切制過程中蒸或煮主要是抑制酶對黃芩苷的酶解作用［6-8］。黃芩中的黃芩苷是其主要活性成分［9-13］，具有抗菌、抗病毒、解熱、鎮(zhèn)痛、降壓、利尿、抗腫瘤等多種藥理活性，黃芩苷在酶的作用下可發(fā)生水解，生成黃芩素，易被氧化為綠色的醌類衍生物［14］，影響黃芩的臨床療效。在高溫處理抑制酶活性的同時(shí)，也不可避免地使有效成分流失和破壞。為更好地保證飲片質(zhì)量，在滅酶的同時(shí)，需要最大程度的減少有效成分損失。因此本研究采用正交試驗(yàn)法對黃芩炮制工藝進(jìn)行了優(yōu)選，通過研究，明確了制備黃芩飲片的各項(xiàng)工藝參數(shù)，對于保證黃芩飲片的質(zhì)量提供了重要的保障。

1 儀器和試藥

Waters2695高效液相色譜儀 (Waters公司)，R200D型電子天平 (Sartorius公司)，DHG-9146A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 (上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)，HH-4型數(shù)顯恒溫水浴鍋 (金壇市晶玻實(shí)驗(yàn)儀器廠)。

甲醇為色譜純，水為超純水，乙醇、磷酸等其他試劑為分析純，黃芩苷 (批號110715-201117，中國藥品生物制品檢定所)。黃芩藥材購自亳州藥材市場，經(jīng)山東省中醫(yī)藥研究院林慧彬研究員鑒定為唇形科植物黃芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根。

2 黃芩藥材加熱方法的考察

2.1 樣品制備

2.1.1 煮法 取凈黃芩藥材100 g，投入沸水中，煮10 min，悶透，切薄片，干燥，即得。

2.1.2 蒸法 取凈黃芩藥材100 g，置已“圓氣”的蒸鍋內(nèi)，蒸0.5 h，切薄片，干燥，即得。

2.2 外觀性狀 照《中國藥典》2010年版黃芩飲片【炮制】項(xiàng)下要求對外觀性狀進(jìn)行觀察，主要包括切片形狀，切面顏色和飲片完整情況。

2.3 內(nèi)在質(zhì)量 以黃芩中主要有效成分黃芩苷的量作為內(nèi)在質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，照《中國藥典》收載方法［1］進(jìn)行測定。

2.3.1 色譜條件 Thermo Syncronis C18色譜柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，流動相為甲醇-水-磷酸 (47∶53∶0.2)。檢測波長280 nm，體積流量1 mL/min，柱溫25℃。

一是強(qiáng)化在評標(biāo)階段對虛假材料的甄別。二是堅(jiān)持增加競標(biāo)活動的透明度，同時(shí)防范惡意質(zhì)疑和投訴。三是統(tǒng)一供應(yīng)商違規(guī)行為處罰政策，加大處罰力度。對虛假應(yīng)標(biāo)的處罰，監(jiān)管部門應(yīng)嚴(yán)格按《中華人民共和國政府采購法》第十三條、第七十七條(一)規(guī)定，處以罰款，并列入不良行為記錄名單，一至三年內(nèi)禁止參加政府采購活動。四是推出供應(yīng)商違規(guī)行為的賠償政策，打擊供應(yīng)商僥幸心理，調(diào)動政府采購各參與方追究違規(guī)供應(yīng)商行為的積極性。

2.3.2 對照品溶液制備 取黃芩苷對照品適量，加甲醇適量制成每1 mL含60 μg黃芩苷對照品的溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備 取本品粉末 (過40目篩)，每份 0.3 g，精密稱定，加 70%的乙醇40 mL，加熱回流 3 h，放冷，濾過，濾液置100 mL量瓶中，用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)礈煲簽V入同一量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，精密量取1 mL，置10 mL量瓶中用甲醇定容至刻度，經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，即得。

2.3.4 測定法 取黃芩苷對照品溶液及各黃芩供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，照上述色譜條件進(jìn)行測定，計(jì)算。

2.4 比較結(jié)果 黃芩飲片外觀性狀和內(nèi)在質(zhì)量結(jié)果見表1。由表1可知，兩種方法制備的黃芩飲片，均未呈現(xiàn)綠色，表明蒸法和煮法均可殺滅黃芩藥材中所含酶。但蒸法制備的黃芩飲片在切面顏色和飲片完整性方面均優(yōu)于煮法，黃芩苷含量亦為蒸法較高，表明蒸的熱處理方法優(yōu)于煮法，更適于黃芩飲片的熱處理。

表1 熱處理方法對黃芩飲片質(zhì)量影響Tab.1 Effects of different heating methods on the quality of Scutellaria pieces

3 “圓氣”對黃芩飲片質(zhì)量的影響

取凈黃芩藥材2份，每份100 g，置蒸鍋內(nèi)，分別以冷水 (不“圓氣”)和沸水(“圓氣”)蒸0.5 h，然后切薄片，干燥，得黃芩飲片。照“2.2”和“2.3”項(xiàng)下方法對二者進(jìn)行外觀性狀和內(nèi)在質(zhì)量的比較，結(jié)果見表2。

表2 “圓氣”對黃芩飲片質(zhì)量影響Tab.2 Effects of“Yuanqi”on the quality of Scutellaria pieces

由表2可知，不“圓氣”方法制備的黃芩飲片，切面略帶黃綠色，表明該方法的殺酶效果較差，原因可能是冷水逐漸升溫的過程中，黃芩酶尚未破壞，從而導(dǎo)致部分黃芩苷被酶解，進(jìn)而變綠。黃芩苷含有量低于“圓氣”蒸法制備的黃芩飲片。該結(jié)果提示，在蒸法處理黃芩藥材時(shí)，應(yīng)當(dāng)在“圓氣”后，加入藥材處理。

4 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選黃芩切制工藝參數(shù)及結(jié)果

4.1 正交設(shè)計(jì) 根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，首先確定了黃芩切制時(shí)宜采用蒸制的加熱方法，在切制過程中影響黃芩飲片質(zhì)量的主要因素為蒸制時(shí)間、切片厚度、烘制溫度和烘制時(shí)間，因此將該四因素確定為正交試驗(yàn)的主要因素，每個(gè)因素分別設(shè)定三個(gè)水平，以傳統(tǒng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) (外觀性狀)和內(nèi)在質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) (黃芩苷量)為考察指標(biāo)，選用L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)。因素、水平設(shè)計(jì)見表3。

表3 因素水平Tab.3 Factors and levels

4.2 考察指標(biāo)選擇依據(jù)及評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

4.2.1 傳統(tǒng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 參照《中國藥典》2010年版黃芩【性狀】項(xiàng)下規(guī)定 (類圓形或不規(guī)則形薄片。外表皮黃棕色或棕褐色。切面黃棕色或黃綠色，具放射狀紋理。)將性狀評分標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定為:切面黃棕色4～5分，黃綠色2～3分，綠色1分，切片完整4～5分，有少量碎片2～3分，碎片多1分。評分結(jié)果見表4。

表4 L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果和直觀分析Tab.4 Results of L9(34)orthogonal test and visual analysis

4.2.2 內(nèi)在質(zhì)量評價(jià)指標(biāo) 以黃芩中主要有效成分黃芩苷量作為內(nèi)在質(zhì)量評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。照“2.3”項(xiàng)下方法進(jìn)行測定。結(jié)果見表4。

4.2.3 綜合評分標(biāo)準(zhǔn) 以綜合加權(quán)評分的方法對各炮制品進(jìn)行評價(jià)，傳統(tǒng)質(zhì)量和內(nèi)在質(zhì)量評價(jià)指標(biāo)加權(quán)系數(shù)均定為0.5，各評價(jià)指標(biāo)加權(quán)處理如下:外觀性狀評分=性狀得分/9個(gè)樣品中最高分×50;黃芩苷量評分=黃芩苷量/9個(gè)樣品最高含有量×50;綜合評分為二者之和;以綜合評分為指標(biāo)進(jìn)行分析。

4.3 正交試驗(yàn)結(jié)果與分析 取凈黃芩藥材9份，每份100 g，置已“圓氣”蒸鍋中，照正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)方進(jìn)行試驗(yàn)。各制備樣品進(jìn)行傳統(tǒng)質(zhì)量和內(nèi)在質(zhì)量評分性狀評分，結(jié)果見表4。

直觀分析:由極差 (R)可知，對綜合評分影響大小依次為A＞C＞B＞D;對A因素＞＞，對B因素＞＞，對C因素＞＞，對D因素＞＞，可得黃芩最佳切制工藝為 A2B1C1D1。

由表5方差分析可見A因素 (蒸制時(shí)間)和C因素 (烘制時(shí)間)對試驗(yàn)結(jié)果顯著性影響。

表5 方差分析Tab.5 Variance analysis

綜合直觀分析和方差分析結(jié)果及實(shí)際情況，黃芩最佳切制工藝為A2B1C1D2，即取黃芩藥材，蒸制30 min，取出切1～2 mm薄片，40℃烘60 min，即得。

5 工藝驗(yàn)證

取3份黃芩藥材，每份500 g，按最佳切制工藝制備3批黃芩飲片，分別進(jìn)行性狀評分以及黃芩苷的定量測定，結(jié)果見表6。

表6 工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果Tab.6 Results of confirmatory experiment

結(jié)果，制備的3批黃芩飲片外觀性狀均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，黃芩苷含有量平均為11.95%，RSD為2.1%，表明確定的黃芩切制工藝穩(wěn)定可行。

6 小結(jié)與討論

本實(shí)驗(yàn)通過預(yù)試驗(yàn)對煮法和蒸法進(jìn)行了比較，結(jié)果，煮法制得的黃芩飲片顏色晦暗，片型不齊整，黃芩苷含有量較蒸法低，推測是由于黃芩粗細(xì)質(zhì)地不同，煮法滲透力不夠，受熱不均，致殺酶效果不一［15］。同時(shí)通過比較發(fā)現(xiàn)， “圓氣”蒸的方法優(yōu)于不“圓氣”蒸，因此最終確定以“圓氣”蒸法作為黃芩的軟化切制方法。

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，采用正交試驗(yàn)法對黃芩的切制具體工藝參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)選，以傳統(tǒng)外觀質(zhì)量要求和內(nèi)在質(zhì)量為指標(biāo)，采用綜合評分法，把黃芩飲片的傳統(tǒng)質(zhì)量與內(nèi)在質(zhì)量兩方面結(jié)合在一起，可較客觀反映各因素水平對黃芩飲片質(zhì)量的影響，優(yōu)選的最佳切制工藝為:取黃芩藥材，蒸制30 min，切1～2 mm薄片，40℃烘60 min，即得。采用優(yōu)選的炮制工藝制備了3批黃芩飲片，驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，優(yōu)選的切制工藝穩(wěn)定可行。

通過正交設(shè)計(jì)，優(yōu)選出黃芩切制最佳炮制工藝，對于規(guī)范黃芩的炮制工藝，指導(dǎo)企業(yè)飲片生產(chǎn)，保證黃芩飲片的質(zhì)量具有一定的意義。

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