GC-MS法測定中江縣產(chǎn)藿香揮發(fā)油

張慧慧，陳繼蘭，黃秀深，高必興，盧先明，王吉娥(成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川成都 611137)

藿香為唇形科藿香屬植物藿香Agastache rugosa(Fisch.et.Mey.)O.Kuntze.的全草，俗稱“土藿香”。據(jù)報道［1］，藿香揮發(fā)油中主要含有甲基胡椒酚。冉蓉［2］分析了四川省成都市郫縣產(chǎn)藿香，發(fā)現(xiàn)川產(chǎn)藿香揮發(fā)油主要含有薄荷酮類化合物。本次測驗進一步研究了中江縣產(chǎn)藿香不同部位的揮發(fā)油，發(fā)現(xiàn)胡薄荷酮為中江縣產(chǎn)藿香的主要成分，故建立了測定中江縣產(chǎn)藿香揮發(fā)油中胡薄荷酮的方法，為川產(chǎn)藿香的深入開發(fā)利用提供參考。

1 材料、試劑與儀器

1.1 材料 藿香采自2013年8月四川省德陽市中江縣，并經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室盧先明教授鑒定確認為唇形科藿香Agastache rugosa(Fisch.et Mey.)O.Kuntze.的植物。

1.2 試劑 無水硫酸鈉 (分析純)，萘 (分析純)，二次蒸餾水，正己烷 (色譜純)，胡薄荷酮對照品，購于中國藥品生物制品檢定所 (批號111706-201205)。

1.3 儀器 美國Agilent 7890A/5975C氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀，揮發(fā)油提取器，十萬分之一電子天平(德國 Sartorius BP211D)，微型植物試樣粉碎機(北京中興偉業(yè)儀器有限公司，F(xiàn)Z102)。

2 方法

2.1 內(nèi)標(biāo)物溶液的制備 取萘適量，精密稱定，用正己烷配制成2.501 mg/mL的溶液作為內(nèi)標(biāo)溶液。

2.2 揮發(fā)油供試品溶液的制備［3］取藿香藥材，干燥，分開其花、葉、莖、全草粉碎，稱取藥材適量 (花、葉、全草各10 g，莖50 g)，分別加入10倍量水，浸泡8 h，水蒸氣蒸餾提取6 h，得黃色透明揮發(fā)油約0.1 mL，用1 mL正己烷溶解，用無水硫酸鈉干燥，置10 mL量瓶中，再加入1 mL內(nèi)標(biāo)物溶液，正己烷定容，為加入內(nèi)標(biāo)的供試品溶液。

2.3 色譜條件 毛細管氣相色譜柱HP-5 MS(5%Phenyl Methyl Silox，30 m ×250 μm ×0.25 μm);載氣為氦氣，體積流量1.84 mL/min;分流比為100 ∶1;進樣量 1 μL。

程序升溫方法 初始溫度60℃，保持3 min;以4℃/min速率升至150℃;再以10℃/min速率升至260℃，保持10 min。

2.4 質(zhì)譜條件 電離方式:離子源EI源，電子能量70 eV;離子源溫度230℃，四級桿溫度150℃，電子倍增器電壓1729 V。溶劑延遲:3 min。

通過Agilent 5975C MSD化學(xué)工作站檢索NIST標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫，同時結(jié)合有關(guān)質(zhì)譜圖文獻解析，確認中江產(chǎn)藿香揮發(fā)油化學(xué)成分，相對含有量的確定為面積歸一化法。

2.5 線性關(guān)系考察 精密稱取胡薄荷酮對照品73.20 mg，置10 mL量瓶中，加正己烷溶解并稀釋至刻度制成含對照品7.32 mg/mL的對照品貯備液。從該貯備液中各精密量取 5、2.5、1.25、0.5、0.25、0.125、0.0625 mL，置 10 mL量瓶中，加內(nèi)標(biāo)物溶液，再加正己烷稀釋至刻度，分別制成含內(nèi)標(biāo)物萘0.25010 mg/mL，對照品3.66、1.83、0.915、0.366、0.183、0.0915、0.04575 mg/mL的系列對照品溶液。分別吸取上述溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計算，以對照品與內(nèi)標(biāo)峰面積比值為縱坐標(biāo) (Y)，對照品質(zhì)量濃度 (mg/mL)為橫坐標(biāo) (X)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=3.7719X－0.0281(r=0.9999)，表明胡薄荷酮在0.04575～3.66 mg/mL之間呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗 精密吸取同一含內(nèi)標(biāo)物的供試品溶液1 μL，重復(fù)進樣6次，測得胡薄荷酮與內(nèi)標(biāo)物峰面積比值的RSD為3.5%(n=6)，表明儀器的精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 取同一含內(nèi)標(biāo)物的供試品溶液，放置0、2、4、6、8、12 h依法測定，胡薄荷酮與內(nèi)標(biāo)物峰面積比值的RSD為1.3%(n=6)，表明本品在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 重復(fù)性試驗 取同一批藿香的花藥材6份，按“2.1”項下方法制備供試品溶液，測定揮發(fā)油中胡薄荷酮的量，結(jié)果揮發(fā)油中胡薄荷酮含有量的RSD為3.8%(n=6)，表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 回收率試驗 采用加樣回收法，取同一批藿香的花藥材6份，按“2.1”項下方法提取揮發(fā)油，分別將6份揮發(fā)油置于10 mL量瓶中，精密加入胡薄荷酮對照品適量，精密加入內(nèi)標(biāo)物溶液1 mL，加正己烷至刻度，搖勻，0.22 μm微孔濾膜過濾，精密吸取1 μL注入氣相色譜儀中測定。胡薄荷酮回收率為99.6%，RSD為2.6%(n=6)。

2.10 樣品的測定 取各供試品溶液，0.22 μm微孔濾膜過濾，精密吸取1 μL注入氣相色譜儀中測定。

3 結(jié)果

3.1 藿香不同部位揮發(fā)油含有量及GC-MS比較中江縣產(chǎn)藿香不同部位揮發(fā)油的主要成分基本相同，為薄荷酮類化合物，其中含有量較高的化合物為胡薄荷酮 (8)和薄荷酮 (5)，其次為異薄荷酮(4)，吉瑪烯 (14)，右旋萜二烯 (3)，異胡薄荷酮 (6)，1-石竹烯 (13)等。中江產(chǎn)藿香揮發(fā)油化學(xué)成分和相對百分含有量見表1。在花及葉中含揮發(fā)油較高，莖中極低，色譜圖見圖1?？傠x子流面積百分比結(jié)果表明:不同部位揮發(fā)油中均以含胡薄荷酮最高，達55%以上，薄荷酮在花及全草中含有量相對較高，莖中最低;異薄荷酮在花及全草中含有量相對較高，結(jié)果見表2。

表1 中江縣產(chǎn)藿香全草揮發(fā)油的化學(xué)成分和各化學(xué)成分峰面積占峰總面積的比例Tab.1 Components and proportions between oils character peaks area and total peaks area in the herb of Agastache rugosa from Zhongjiang County

圖1 不同部位藿香揮發(fā)油色譜圖Fig.1 Chromatograms of volatile oil in different parts of Agastache rugosa

表2 藿香不同部位出油率及油中主要化合物的相對含有量Tab.2 Oil yield and relative contents of the main compounds in different parts of Agastache rugosa

3.2 藿香不同部位揮發(fā)油中胡薄荷酮測定 精密吸取含內(nèi)標(biāo)物的供試品溶液1 μL注入氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀中測定，按內(nèi)標(biāo)法以相對峰面積計算胡薄荷酮的量。其葉和花中胡薄荷酮的量較高，結(jié)果見表3。藿香的莖揮發(fā)油及對照品溶液色譜圖見圖2、圖3。

表3 胡薄荷酮測定結(jié)果Tab.3 Determination results of pulegone

圖2 胡薄荷酮對照品 (加內(nèi)標(biāo))色譜圖Fig.2 Chromatogram of pulegone reference substance with internal standard substance

圖3 藿香的莖揮發(fā)油 (加內(nèi)標(biāo))色譜圖Fig.3 Chromatogram of volatile oil substance in the stem of Agastache rugosa with internal standard substance

4 討論

藿香是一味常用中藥，具有祛暑解表、芳香化濕和胃之功效，主治夏令感冒，寒熱頭痛，胸脘痞悶，嘔吐泄瀉，妊娠嘔吐，鼻淵［4］。關(guān)于藿香揮發(fā)油的化學(xué)成分組成，國外文獻報道以甲基胡椒酚為主［5］，國內(nèi)文獻報道藿香揮發(fā)油的主要成分不盡一致:有報道以甲基胡椒酚［1，6-8］、甲基丁香酚［9］、甲氧基苯丙烯［10］、β-杜松烯［3］、百里香醌［11］或薄荷酮類化合物［2，12-13］為主。本實驗用 GCMS法檢測藿香不同部位揮發(fā)油，結(jié)果表明中江產(chǎn)藿香揮發(fā)油的主要成分為薄荷酮類，主要又以胡薄荷酮和薄荷酮為主，與文獻報道的有差異，這可能主要受地域影響。因此，植物種名一樣的情況下，其主要化學(xué)成分也可能存在很大差異，進而引起原藥材的性味、歸經(jīng)與功效的不同，這一點在中藥的鑒定研究中需要加以注意。

胡薄荷酮具有抗炎［14］、抗組胺的作用，本實驗建立了中江產(chǎn)藿香揮發(fā)油胡薄荷酮的定量測定方法，該方法簡單易行，準(zhǔn)確，為中江產(chǎn)藿香揮發(fā)油提供了一種可靠性強的定量分析方法，也為川產(chǎn)藿香資源開發(fā)利用提供基礎(chǔ)理論參考。

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