小葉榕葉抗炎成分分析及活性評(píng)價(jià)

黃 洋，邵慧凱，李 康，劉盛權(quán)，謝淑桐

(廣東藥學(xué)院藥科學(xué)院，廣東廣州 510006)

小葉榕葉是?？浦参镩艑傩∪~榕Ficus microcarpa的干燥葉子，全年可采，陰干入藥，其作為嶺南民間用藥，在我國(guó)南方分布廣泛，其水提物干浸膏作為咳特靈膠囊的主要成分被收載在《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十四分冊(cè)中。小葉榕葉具有抗炎、殺菌、鎮(zhèn)痛和止咳平喘等作用［1］，臨床上常將其干浸膏用于咳嗽、哮喘等多種疾病的治療［2］。它抗炎的藥效已有大量相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道［3］，但從有效部位的角度去研究其抗炎藥效物質(zhì)罕見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，此外，采用脂多糖 (Lipopolysaccharide，LPS)建立體外炎癥模型去探討其作用機(jī)理也未見(jiàn)學(xué)者涉足。深入了解炎癥的作用機(jī)理，可對(duì)中藥小葉榕葉的抗炎藥效物質(zhì)基礎(chǔ)提供可靠的理論指導(dǎo)。前期研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)其有效部位在小葉榕葉水提物的乙酸乙酯層萃取部位［4］;本研究主要對(duì)該部位進(jìn)行化學(xué)成分分析以及活性評(píng)價(jià)，為尋找其發(fā)揮抗炎藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)以期為小葉榕葉浸膏的質(zhì)量控制提供可靠的數(shù)據(jù)參考。

1 儀器與材料

1.1 儀器 AUW220D型十萬(wàn)分之一電子天平(日本島津公司);Kafler顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀 (北京泰克儀器有限公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 (鞏義市英峪高科儀器廠);渦旋混合器 (天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠);HH-S型恒溫水浴鍋 (鞏義市予華儀器有限公司);電熱套 (海寧市新華醫(yī)療器械廠);AVANCEIII500MHz型核磁共振波譜儀 (瑞士布魯克拜厄斯賓有限公司);Bruker AVANCEIII 500MHz全數(shù)字超導(dǎo)核磁共振譜儀 (瑞士 Bruker公司);GZX-9240MBE型數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱 (上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠);WFH-203型三用紫外分析儀(上海精科實(shí)業(yè)有限公司)。PerkinElmer Spectrum-100型傅立葉變換紅外光譜儀 (KBr壓片);Bruker AV-400超導(dǎo)核磁共振儀 (瑞士Bruker公司);四級(jí)桿串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜 (美國(guó)Waters公司)。CO2培養(yǎng)箱 (美國(guó)Thermo electron公司);倒置顯微鏡(廣州湘儀機(jī)電設(shè)備有限公司);超凈工作臺(tái) (蘇州凈化設(shè)備廠);全波長(zhǎng)多功能酶標(biāo)儀 (美國(guó)Biorad公司)，HH-S型恒溫水浴鍋 (鞏義市予華儀器有限公司);離心機(jī) (美國(guó)Thermo electron公司)。

1.2 試劑和藥材 小葉榕新鮮葉子采自廣州大學(xué)城穗石村，經(jīng)廣東藥學(xué)院中藥學(xué)院生藥學(xué)教研室劉基柱教授鑒定為?？崎艑俚闹参镩艠?shù)的葉，采摘葉子于室內(nèi)陰干。

RAW264.7細(xì)胞株 (中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心細(xì)胞庫(kù));地塞米松 (Dexamethasone，DEX，上海源葉生物科技有限公司);LPS(美國(guó)Sigma公司，L2880);DMEM培養(yǎng)基 (美國(guó) Hyclone公司);胎牛血清 (Gibco公司);胰酶 (Gibco公司);雙抗(Hyclone公司);噻唑藍(lán) (美國(guó) Axygen公司);NO檢測(cè)試劑盒 (碧云天生物技術(shù)研究所);TNF-α試劑盒 (武漢華美生物工程有限公司);血球計(jì)數(shù)板 (上海求精生化試劑儀器有限公司);DMSO(天津市大茂化學(xué)試劑廠)，PBS(北京鼎國(guó)昌盛生物科技技術(shù)有限責(zé)任公司);柱層析硅膠 (200～300目，分析純)、薄層層析硅膠G(青島海洋化工集團(tuán));化學(xué)試劑均為分析純。顯色劑為10%硫酸乙醇溶液，乙醇為食用級(jí)，實(shí)驗(yàn)中所用其他試劑均為分析純。

2 提取與分離

2.1 提取 取新鮮陰干后小葉榕葉約20 kg，剪碎后水提取，液料比20∶1，回流提取3次，每次2 h，濃縮至適當(dāng)?shù)南鄬?duì)密度后，靜置冷卻。按部頒標(biāo)準(zhǔn)用95%乙醇醇沉至含醇體積分?jǐn)?shù)為80%～85%，慢加快攪，靜置24 h，抽濾，回收乙醇。在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮，加水形成懸浮液，加石油醚脫酯，水相加乙酸乙酯萃取，取有機(jī)相，減壓濃縮，得到乙酸乙酯浸膏，真空干燥。

2.2 分離 取乙酸乙酯層干浸膏約200 g，與適量硅膠 (200～300目)研磨均勻，在干燥器中揮干，上硅膠柱 (200～300目)，其洗脫溶劑和比例見(jiàn)圖1和圖2所示，減壓旋干，根據(jù)TLC檢識(shí)結(jié)果合并相近的流份，各部分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析和重結(jié)晶得到化合物1～10。

3 細(xì)胞培養(yǎng)

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，經(jīng)0.25%胰酶消化，用含 10%胎牛血清、100 μL/mL青霉素、0.1 mg/mL硫酸鏈霉素的 DMEM培養(yǎng)基，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。根據(jù)代謝情況1～2 d換一次液，至對(duì)數(shù)期備用。

圖1 化合物結(jié)構(gòu)圖Fig.1 Structure of ten compounds

圖2 小葉榕葉乙酸乙酯層分離流程圖Fig.2 Flow chart of the ethyl acetate layer from Ficus microcarpa L.f.

3.1 各單體成分對(duì)RAW264.7細(xì)胞活性的影響取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的RAW264.7細(xì)胞，用0.25%的胰酶消化，吹打，使其成為均勻的單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)細(xì)胞，用培養(yǎng)基稀釋成約1.2×105個(gè)/mL并接種于96孔板中，每孔100 μL，置37℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)4 h。細(xì)胞貼壁后，試驗(yàn)組加入試驗(yàn)藥物(50.0、10.0、5.0、1.0、0.1 μg/mL)和陽(yáng)性藥物地塞米松 (10.0 μg/mL)，正常組 (不加藥物的細(xì)胞空白孔)，LPS組 (1.0 μg/mL)、調(diào)零孔 (不接種細(xì)胞的空白孔)，溶劑組 (含0.1%DMSO)，每個(gè)質(zhì)量濃度設(shè)置5個(gè)復(fù)孔。連續(xù)孵育20 h，在實(shí)驗(yàn)結(jié)束前4 h，每孔加入 MTT(5.0 mg/mL)20 μL，繼續(xù)孵育至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，吸棄上清，每孔加入150 μLDMSO充分溶解細(xì)胞沉淀，振蕩15 min，在l h內(nèi)用酶標(biāo)儀在波長(zhǎng)490 nm測(cè)量，參比波長(zhǎng)為630 nm處測(cè)定OD值，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用以存活率表示，存活率越高，表明藥物毒性越低。存活率計(jì)算公式如下:

存活率 (%)=(藥物干預(yù)孔A －空白對(duì)照孔A)/(正常細(xì)胞孔A－空白對(duì)照孔A)×100%。

3.2 細(xì)胞培養(yǎng)液中NO測(cè)定 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的RAW264.7細(xì)胞，用0.25%的胰酶消化，吹打，使其成為均勻的單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)細(xì)胞，用培養(yǎng)基稀釋成約1.0×105個(gè)/mL并接種于96孔板中，每孔100 μL，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)4 h。細(xì)胞貼壁后，設(shè)置正常組、LPS組、給藥組 (各單體成分50.0 μg/mL，20 μg/mL，10.0 μg/mL)和陽(yáng)性藥物DEX(10.0 μg/mL);再往培養(yǎng)體系中加入終質(zhì)量濃度為1.0 μg/mL LPS作為刺激劑，置37℃，5%CO2培養(yǎng)24 h，輕輕吸取上清。按照NO試劑盒操作進(jìn)行檢測(cè);抑制率 (%)=(模型組細(xì)胞因子濃度－給藥組細(xì)胞因子濃度)/(模型組細(xì)胞因子濃度－正常組細(xì)胞因子濃度)×100%。

3.3 ELISA法檢測(cè)各單體成分對(duì)TNF-α的抑制作用 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的RAW264.7細(xì)胞，用0.25%的胰酶消化，吹打，使其成為均勻的單細(xì)胞懸液，計(jì)數(shù)細(xì)胞，用培養(yǎng)基稀釋成約2.5×105個(gè)/mL，接種于96孔板中，每孔100 μL，于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)4 h。細(xì)胞貼壁后，設(shè)置正常組、LPS組、給藥組 (各單體成分 50.0μg/mL，20 μg/mL，10.0 μg/mL)和陽(yáng)性藥物 DEX(10.0 μg/mL);再往培養(yǎng)體系中加入終質(zhì)量濃度為1.0 μg/mL LPS作為刺激劑，置37℃，5%CO2培養(yǎng)24 h，收集上清液并以酶標(biāo)儀讀取450 nm波長(zhǎng)處的吸光度值，根據(jù)相應(yīng)的ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)操作并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算TNF-α的量，并進(jìn)行組間比較;抑制率 (%)=(模型組細(xì)胞因子濃度－給藥組細(xì)胞因子濃度)/(模型組細(xì)胞因子濃度－正常組細(xì)胞因子濃度)×100%。

4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，使用 SPSS 17.0中的one-way ANOVA進(jìn)行多個(gè)樣本間的兩兩比較，結(jié)果以來(lái)表示，P＜0.05為結(jié)果具有顯著性差異。

5 結(jié)果

5.1 化合物結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1:無(wú)色針晶，mp 122～124℃。IR(KBr)νmax:3071，3012，2952，2834，2672，2 558， 1 688， 1 583， 1454 cm－1。1H-NMR(500MHz，CDCl3)δ:8.16(2H，d，J=7.7 Hz，2，6-H)，7.65(1H，t，J=7.4 Hz，4-H)，7.52(2H，t，J=7.7 Hz，3，5-H)。13C-NMR(126 MHz，CDCl3)δ:172.55(C-7)，134.04(C-4)，130.44(C-6)，129.54(C-2)，128.72(C-3，5)，130.1(C-1)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［5］報(bào)道一致，可以確定化合物1為苯甲酸。

化合物2:白色結(jié)晶，mp 130～131℃。IR(KBr)νmax:3400，2956，1705，1610，1452，1410 cm－1。1H-NMR(500 MHz，MeOD)δ:7.02(2H，dt，J=8.6，2.8，2.1 Hz，2，6-H)，6.69(2H，dt，J=8.6，2.8，2.1 Hz，3，5-H)，2.79(2H， t， J=7.7Hz)，2.52(2H， t， J=7.7 Hz)。13C-NMR(126 MHz，MeOD)δ:176.96(C-3')，156.78(C-4)，132.96(C-1)，130.26(C-2，6)，116.32(C-3，5)，37.21(C-1')，31.27(C-2')。其中7.02(2H，dt，J=8.6，2.8，2.1 Hz，2，6-H)，6.69(2H，dt，J=8.6，2.8，2.1 Hz，3，5-H)，這兩組氫信號(hào)表明苯環(huán)存在1，4取代模式。碳譜中出現(xiàn)δ 176.96(s)為羧酸中羰基碳信號(hào)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［6］報(bào)道一致，可以確定化合物2為對(duì)羥基苯丙酸。

化合物3:白色針晶，mp 212～213℃。IR(KBr)νmax:3372，1700，1620，1523，1463 cm－1。1H-NMR(500 MHz，MeOD)δ:7.35(s，1H)，δ 3.91(d，J=4.2 Hz，3H)。13C-NMR(126 MHz，MeOD)δ:168.6(s)，147.66(s)，107.18(s)，55.60(s)。但從1H-NMR和13C-NMR可以看出，出現(xiàn)了4個(gè)碳信號(hào)和兩個(gè)氫信號(hào)，所以推測(cè)其可能含有一對(duì)稱結(jié)構(gòu)，而其中δ 3.91(d，J=4.2 Hz，3H)為甲氧基信號(hào)，據(jù)此可以推測(cè)在苯環(huán)上有一對(duì)稱取代的甲氧基。δ 7.35(s，1H)為苯環(huán)對(duì)稱1，3，4，5取代的信號(hào)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［7］報(bào)道一致，可以確定化合物3為3，5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸。

化合物4:白色針晶，mp 150～153℃。IR(KBr)νmax:3366，2975，2898，1711，1616，1517 cm－1。1H-NMR(500 MHz，MeOD)δ:7.12(2H，d，J=9.0 Hz)，6.78(2H，d，J=9.0 Hz)，3.49(s，2H)。13C-NMR(126 MHz，MeOD)δ:175.11(s)，156.23(s)，130.14(s)，125.63(s)，115.10(d，J=24.8 Hz)，47.81(dp，J=42.9，21.4 Hz)，39.94(s)。在芳香區(qū)給出了兩組芳香質(zhì)子信號(hào)δ 7.12(2H，d，J=9.0 Hz)，δ 6.78(2H，d，J=9.0 Hz)提示對(duì)位取代苯的存在。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］報(bào)道一致，可以確定化合物4為對(duì)羥基苯乙酸。

化合物5:白色針晶，mp 160～161℃，IR(KBr)νmax:3239，2864，1668，1525，1405 cm－1。1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ:10.42(2H，2-OH，7-OH)，7.97(dd，J=8.0，1.7 Hz，1H，H-6)，7.53(1H，dt，J=1.5，8.0 Hz，H-4)，7.05(d，J=8.4 Hz，1H，H-3)，6.96(1H，J=8.0 Hz，H-5)。13C-NMR(126 MHz，CDCl3)δ:176.25(C-7)，163.64(C-2)，138.44(C-4)，132.40(C-6)，121.06(C-5)，119.29(C-3)，112.75(C-1)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［9-10］基本一致，可以確定化合物5為水楊酸。

化合物6:白色針晶，mp 123～125℃，IR(KBr)νmax:3369，2984，2945，1665，1604，1517，1463 cm－1。1H-NMR(500 MHz，MeOD)δ:8.04(1H，4-OH)，7.32(2H，s，H-2，6)，3.92(6H，s，3，5-OMe)，2.57(3H，s，8-Me)。13CNMR(126 MHz，MeOD)δ:197.4(C-7)，147.78(C-3，5)，140.13(C-4)，127.98(C-1)，106.25(C-2，6)，55.65(3，5-OMe)，25.10(C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］基本一致，可以確定化合物6為3，5-二甲氧基-4 羥基-苯乙酮。

化合物7:白色針狀結(jié)晶，IR(KBr)νmax:3385，2976，1690，1594，1448 cm－1。1H-NMR(500 MHz，MeOD)δ:7.89(m，1H)，7.03(2H，m，H-4，6)，6.83(1H，d，J=7.9 Hz，H-5)，6.70(1H，d，J=7.9 Hz，H-5)，2.82(2H，t，J=6.1 Hz，H-7)，2.55(2H，t，J=6.1 Hz，H-8)。13C-NMR(126 MHz，MeOD)δ:175.82(C=O)，155.51(C-2)，131.80(C-1)，129.04(C-6)，121.51(C-5)，114.93(C-3)，36.00(C-8)，30.04(C-7)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［12］基本一致，可以確定化合物7為鄰羥基苯丙酸。

化合物 8:白色粉末，mp 61～63℃，IR(KBr)νmax:3367，2925，2854，1712 cm－1。1HNMR(500 MHz，CDCl3)δ:2.34(2H，t，J=7.5Hz)，1.62(2H，m)，1.30(11H，m)，0.92(3H，t)。13C-NMR(126 MHz，CDCl3)δ:180.29(C=O)，34.28(C-2)，32.1(C-13)，30.35 ～28.39(C-4～C-12)，24.89(C-3)，22.91(C-14)，14.33(C-1)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn) ［13］基本一致，可以確定化合物8為十五烷酸。

化合物 9:無(wú)色針晶，mp 86～88℃，IR(KBr)νmax:3444，2965，2941，2858，1708，1470，1059 cm－1。1H-NMR(500 MHz，MeOD)δ 3.53(tt，J=10.7，3.9 Hz，1H)，2.33 ～ 2.15(m，1H)，2.01(dd，J=8.5，4.8 Hz，4H)，1.56～1.40(m，2H)，1.39～1.17(m，2H)。13CNMR(126 MHz，MeOD)，179.52(C-1)，70.57(C-2)，43.53(C-3)，35.34(C-4)，28.53(C-5)。以上數(shù)據(jù)與數(shù)據(jù)庫(kù) ［14］中2-羥基-3-甲基丁酸報(bào)道一致［14］。

化合物10:白色針晶，mp 122～124℃，IR(KBr)νmax:3297，3025，2956，2934，1743，1593，1518，1445 cm－1。13C-NMR(126 MHz，MeOD)δ:179.06(s)，156.19(s)，130.43(s)，127.21(s)，115.16(d，J=12.3 Hz)，82.08(s)，40.05(s)，28.30(s)，26.66(s)。1H-NMR(500 MHz，MeOD)δ:7.12(2H，d，J=9.0 Hz)，6.78(2H，d，J=9.0 Hz)提示對(duì)位取代苯的存在。以上數(shù)據(jù)與數(shù)據(jù)庫(kù)中對(duì)羥基苯甲酸仲丁酯報(bào)道一致［15］。

5.2 單體化學(xué)成分MTT細(xì)胞活性試驗(yàn) 將不同質(zhì)量濃度各單體化學(xué)成分 (0.1、1.0、5、10、50 μg/mL)以及陽(yáng)性藥物 DEX(10.0 μg/mL)、LPS組 (1.0 μg/mL)、溶劑組 (加入0.1%DMSO培養(yǎng)基)和各質(zhì)量濃度水提物 (0.3、0.6、1.0、2.3、4.5 μg/mL)刺激24 h后，巨噬細(xì)胞活性通過(guò)MTT法檢測(cè)，相比正常組結(jié)果如圖3所示:各單體成分在0.1～50 μg/mL范圍內(nèi)以及DEX、LPS組、溶劑組 (0.1%DMSO培養(yǎng)基)對(duì)RAW264.7細(xì)胞的活力均無(wú)影響，結(jié)果見(jiàn)圖3。

圖3 不同質(zhì)量濃度各單體化學(xué)成分及水提物和相關(guān)試劑對(duì)RAW264.7細(xì)胞的存活率影響Fig.3 Effects of the isolated chemical compositions and the water extract，adding up to related reagents combining with solvent on RAW264.7 viability

5.3 單體化學(xué)成分對(duì)RAW264.7細(xì)胞上清液中NO因子釋放的抑制情況 用LPS刺激RAW264.7細(xì)胞可產(chǎn)生大量的NO，模型組細(xì)胞上清液中NO產(chǎn)物亞硝酸鹽量顯著提高，與空白對(duì)照組相比有顯著性差異 (P＜0.01);各單體化學(xué)成分的不同劑量在24 h內(nèi)對(duì)細(xì)胞上清液中亞硝酸鹽量的抑制情況，結(jié)果見(jiàn)表1、圖4。

表1 各單體化學(xué)成分對(duì)RAW264.7細(xì)胞分泌NO的影響Tab.1 Effect of the chemical compositions on NO secretion in RAW264.7

5.4 各單體化學(xué)成分對(duì)RAW264.7細(xì)胞上清液中TNF-α因子釋放的抑制情況 結(jié)果顯示 LPS 1.0 μg/mL誘導(dǎo)大鼠腹腔巨噬細(xì)胞分泌TNF-α，且與空白對(duì)照組相比有顯著性差異 (P＜0.01);不同質(zhì)量濃度各單體化學(xué)成分對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞中TNF-α的分泌的抑制情況見(jiàn)下表2。

圖4 NO抑制率柱狀圖Fig.4 Histogram of NO inhibition

表2 各單體化學(xué)成分對(duì)RAW264.7細(xì)胞分泌TNF-α的影響Tab.2 Effect of the chemical compositions on TNF-α secretion in RAW264.7

6 討論

小葉榕葉是嶺南常用中草藥，始載于《南方草木狀》，有著廣泛民間用藥基礎(chǔ)［16］。其乙酸乙酯層具有抗炎藥效早有文獻(xiàn)報(bào)道［2］，且經(jīng)本課題組前期試驗(yàn)研究也證實(shí)無(wú)誤，但深究其抗炎藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)研究頗少，前期藥效研究已篩選出有效部位為乙酸乙酯萃取部位，故本研究采用硅膠柱層析、重結(jié)晶等手段從有效部位化學(xué)成分群中分離純化并得到了10個(gè)單體成分，并測(cè)試了10個(gè)單體化合物對(duì)巨噬細(xì)胞RAW264.7的生長(zhǎng)抑制作用以及對(duì)RAW264.7細(xì)胞中NO和TNF-α代謝的抑制情況。結(jié)果顯示，各單體成分在0.1～50 μg/mL范圍內(nèi)對(duì)細(xì)胞的增殖抑制作用情況并無(wú)影響，將各單體成分 (高、中、低3個(gè)濃度水平)分別刺激LPS誘導(dǎo)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞RAW264.7炎癥模型，通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞上清液中釋放NO和TNF-α因子的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，與模型組相比較，炎癥因子NO的測(cè)試結(jié)果發(fā)現(xiàn)有6個(gè)藥效顯著的單體化合物，分別是苯甲酸、對(duì)羥基苯丙酸、3，5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸、對(duì)羥基苯乙酸、水楊酸、對(duì)羥基苯甲酸仲丁酯。其抑制率大小見(jiàn)表1，其中苯甲酸、水楊酸、對(duì)羥基苯丙酸存在一定劑量依賴性。此外，采用ELISA試劑盒對(duì)該細(xì)胞上清液中TNF-α表達(dá)情況進(jìn)行測(cè)試發(fā)現(xiàn)，利用SPSS統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，相比較模型組，藥效顯著的單體成分為苯甲酸、3，5-二甲氧基-4-羥基苯甲酸、對(duì)羥基苯乙酸、水楊酸、3，5二甲氧基-4-羥基-苯乙酮、鄰羥基苯丙酸。其抑制率大小情況見(jiàn)表2，其中3，5二甲氧基-4-羥基-苯乙酮呈現(xiàn)出較好的劑量依賴性。

中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)是指中藥進(jìn)入人體內(nèi)作用于多個(gè)靶點(diǎn)并產(chǎn)生整體功效的化學(xué)成分組［17］，本研究采用生物活性追蹤中藥活性成分的分離純化，最終闡明中藥活性成分與藥效之間的關(guān)聯(lián)性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示出小葉榕葉發(fā)揮藥效也具有整體性和多靶標(biāo)性的特點(diǎn)。該藥效物質(zhì)的發(fā)現(xiàn)可為下一步控制小葉榕浸膏的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供可靠參考，同時(shí)也為小葉榕葉發(fā)揮抗炎藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)和作用本質(zhì)進(jìn)行揭示。

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