板藍(lán)根顆粒制備過程中有機(jī)酸的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律

鄒艾岑，承 偉，李 悅

(遼寧醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，遼寧錦州 121001)

板藍(lán)根顆粒是由板藍(lán)根加入適量輔料糊精制顆粒而成，具有清熱解毒、涼血利咽的功效，用于急性扁桃體炎、腮腺炎等證的治療［1］，也有報(bào)道用于癌癥治療［2］。板藍(lán)根顆粒一直沿用熒光反應(yīng)、茚三酮反應(yīng)、TLC法等定性鑒別，也有測(cè)定其中靛藍(lán)、靛玉紅［3］、表告依春［4］、精氨酸［5］、亮氨酸［6］等的報(bào)道，因其藥效物質(zhì)不明確，難于對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行有效的控制。研究表明，板藍(lán)根所含的苯甲酸、水楊酸、鄰氨基苯甲酸、丁香酸、琥珀酸等有機(jī)酸類成分具有抗病原微生物和抗內(nèi)毒素作用，而表現(xiàn)出清熱解毒的功效［7］，其中水楊酸具有明顯的抗菌活性［8］。因板藍(lán)根顆粒制備過程涉及水提、醇沉、濃縮等工藝，難以避免有機(jī)酸的損失。因此，對(duì)其制備過程中有機(jī)酸類成分的變化規(guī)律進(jìn)行研究，對(duì)于優(yōu)化工藝、提高質(zhì)量、保證療效有重要意義。

1 儀器與試藥

ZDJ-3D全自動(dòng)電位滴定儀 (北京先驅(qū)威峰技術(shù)開發(fā)公司)配有XQ-10電磁攪拌臺(tái)、AL204電子天平 (梅特勒-托利多儀器上海有限公司);RE－52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (上海亞榮生化儀器廠);酒精計(jì);水楊酸對(duì)照品 (中國食品藥品檢定研究院，純度為99.5%，批號(hào)100106-200303);板藍(lán)根藥材 (產(chǎn)地河北定州)，糊精，乙醇 (體積分?jǐn)?shù)95%)、鹽酸滴定液 (濃度約0.1 mol/L)、氫氧化鈉滴定液 (濃度約0.075 mol/L)均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 板藍(lán)根顆粒的制備［1］

2.1.1 處方 板藍(lán)根140 g，糊精適量。

2.1.2 工藝 取板藍(lán)根，加水煎煮2次，第1次2 h，第2次1 h，煎液濾過，濾液合并，得板藍(lán)根水提液2550 mL;濃縮至相對(duì)密度為1.20(50℃)，得板藍(lán)根水提濃縮液270 mL;加入乙醇使醇體積分?jǐn)?shù)達(dá)60%，靜置使沉淀，過濾，棄去濾渣，得板藍(lán)根醇沉液745 mL;回收乙醇并濃縮至適量，得板藍(lán)根醇沉濃縮液23 mL;加入適量的糊精制成顆粒，干燥，得板藍(lán)根顆粒60 g。

2.2 電位指示反滴定法測(cè)定樣品中有機(jī)酸與總量

2.2.1 電位滴定儀參數(shù)條件［9］最大增量為0.500 mL，最小增量為0.020 mL，滴定體積流量為10.00 mL/min，采樣周期為0.3 s，電位變化閾值為8.00 mV，預(yù)加液體積為1.00 mL，預(yù)加液體積流量為10 mL/min，最大等待時(shí)間為30 s，最小等待時(shí)間為30%，溫度為25.0℃，終點(diǎn)停止(V為80.00 mL，pH為4.00，E為3000 mV)，等當(dāng)點(diǎn)閾值為5000 mV，電子攪拌器轉(zhuǎn)速為100 r/min。

2.2.2 水楊酸等當(dāng)點(diǎn)的確定 精密稱取水楊酸對(duì)照品30 mg置于100 mL燒杯中，精密加入氫氧化鈉溶液20 mL，超聲使溶解，靜置30 min，以鹽酸溶液為滴定液，電位指示滴定終點(diǎn)，繪制滴定曲線見圖1，E～V二階導(dǎo)數(shù)曲線的等當(dāng)點(diǎn)為曲線與X軸交點(diǎn)，結(jié)果在9.29 mL處為等當(dāng)點(diǎn)。

圖1 水楊酸滴定E～V二階導(dǎo)數(shù)曲線

2.2.3 線性關(guān)系考察 精密稱取水楊酸對(duì)照品5、10、20、30、50、70 mg分別置于100 mL燒杯中，精密加入20 mL氫氧化鈉溶液，超聲使溶解，靜置30 min，以鹽酸溶液為滴定液，電位指示滴定終點(diǎn)，以水楊酸質(zhì)量為橫坐標(biāo)，消耗鹽酸體積為縱坐標(biāo)，得回歸方程:Y=－0.191X+15.017，r=－0.9998。結(jié)果表明在5～70 mg范圍內(nèi)，水楊酸線性關(guān)系良好。

2.2.4 精密度試驗(yàn) 精密稱取水楊酸6份，每份30 mg，分別置于100 mL燒杯中，精密加入氫氧化鈉溶液20 mL，超聲使溶解，靜置30 min，以鹽酸溶液為滴定液，電位指示滴定終點(diǎn)，計(jì)算水楊酸的量，RSD=0.22%(n=3)，說明測(cè)定結(jié)果精密度良好。

2.2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取“2.1”項(xiàng)下板藍(lán)根顆粒5份，每份0.5 g，分別置于100 mL燒杯中，精密加入氫氧化鈉溶液20 mL，超聲使溶解，靜置30 min，以鹽酸溶液為滴定液，電位指示滴定終點(diǎn)，計(jì)算其有機(jī)酸的量，平均為57.69 mg/g，RSD=0.31%，說明該方法重復(fù)性良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱取“2.1”項(xiàng)下板藍(lán)根顆粒3份，每份0.5 g，分別置于100 mL燒杯中，精密加入氫氧化鈉20 mL，超聲使溶解，靜置30 min，分別在0、2、4、6、8、10、12 h以鹽酸溶液為滴定液，電位指示滴定終點(diǎn)，測(cè)定有機(jī)酸的量并計(jì)算其RSD，測(cè)得平均每1 g板藍(lán)根顆粒含有機(jī)酸57.67 mg，RSD=0.76%，說明12 h內(nèi)該樣品穩(wěn)定。

2.2.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含有量的板藍(lán)根顆粒6份，每份0.25 g，加入水楊酸適量，精密加入氫氧化鈉20 mL，超聲使溶解，靜置30 min，電位指示滴定終點(diǎn)，測(cè)定樣品中有機(jī)酸的量，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1，平均回收率為99.5%，RSD=1.44%，說明本法測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.3 有機(jī)酸測(cè)定樣品的制備

2.3.1 板藍(lán)根藥材中有機(jī)酸測(cè)定樣品的制備 取板藍(lán)根藥材，粉碎，精密稱取板藍(lán)根細(xì)粉0.5 g于100 mL燒杯中，精密加入氫氧化鈉溶液20 mL，超聲30 min，靜置30 min，過濾，濾渣水洗，收集濾液，得板藍(lán)根藥材有機(jī)酸測(cè)定樣品。

2.3.2 板藍(lán)根顆粒各樣品中有機(jī)酸測(cè)定樣品的制備 各精密量 (稱)取“2.1”項(xiàng)下板藍(lán)根水提液、板藍(lán)根水提濃縮液、板藍(lán)根醇沉液、板藍(lán)根醇沉濃縮液、板藍(lán)根顆粒適量，取樣量見表2，置于100 mL燒杯中，精密加入氫氧化鈉溶液20 mL，振搖溶解，靜置30 min，得板藍(lán)根顆粒各樣品中有機(jī)酸測(cè)定樣品。

2.4 各樣品有機(jī)酸測(cè)定結(jié)果 取“2.3”項(xiàng)下各有機(jī)酸測(cè)定樣品，按“2.2”項(xiàng)下電位滴定儀參數(shù)條件，以鹽酸溶液為滴定液，電位指示滴定終點(diǎn)，繪制E～V二階導(dǎo)數(shù)曲線，見圖2，按“2.2”項(xiàng)下方法確定等當(dāng)點(diǎn)，計(jì)算各樣品中有機(jī)酸量及各樣品中有機(jī)酸總量，見表2。

圖2 樣品有機(jī)酸滴定E～V二階導(dǎo)數(shù)曲線

表2 板藍(lán)根不同樣品中有機(jī)酸測(cè)定結(jié)果

在板藍(lán)根顆粒制備的全過程各樣品有機(jī)酸損失率分別為:水提過程54.5%、水提液濃縮過程1.1%、醇沉過程4.0%、醇沉液濃縮過程0.6%、板藍(lán)根顆粒成型過程0.4%。以板藍(lán)根制備過程各樣品中有機(jī)酸的轉(zhuǎn)移率為指標(biāo)繪制有機(jī)酸動(dòng)態(tài)變化折線圖，見圖3。可見，在板藍(lán)根顆粒制備過程中，有機(jī)酸的含量是呈動(dòng)態(tài)變化的，呈逐級(jí)較少的趨勢(shì)，板藍(lán)根水提過程有機(jī)酸損失較大，水提液醇沉過程有機(jī)酸有一定損失，在水提液濃縮、醇沉液濃縮與制顆粒過程有機(jī)酸損失較少。

圖3 板藍(lán)根顆粒制備過程有機(jī)酸變化趨勢(shì)

3 討論

由于板藍(lán)根水提液和醇提液顯一定本底顏色，使用指示劑會(huì)對(duì)觀察滴定終點(diǎn)產(chǎn)生干擾，故選用較靈敏的電位變化指示滴定終點(diǎn)，可從E～V二階導(dǎo)數(shù)曲線直觀讀取;由于板藍(lán)根有機(jī)酸酸性較弱，酸堿滴定過程反應(yīng)時(shí)間長，因此采用反滴定法測(cè)定總有機(jī)酸的量。

研究表明，板藍(lán)根顆粒有機(jī)酸的藥材轉(zhuǎn)移率不高，尤以水提過程損失較多，達(dá)到54.5%，原因是有機(jī)酸大多在水中溶解度較小，或者水提加熱過程導(dǎo)致部分的有機(jī)酸降解;醇沉過程有機(jī)酸損失率約4.0%，可能由于部分有機(jī)酸不溶于60%乙醇，或者部分有機(jī)酸包裹于醇沉沉淀中所致。因此可以適當(dāng)改變水提工藝，如采用稀堿液提取等方法，提高有機(jī)酸轉(zhuǎn)移率;適當(dāng)優(yōu)化醇沉工藝，這些都可以在板藍(lán)根顆粒制備過程中發(fā)揮比較重要的作用。

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