柱前衍生HPLC法測定保山透心綠蠶豆中氨基酸的含量

張紹龍 劉超 楊麗英 梅麗寶

建立了柱前衍生高效液相色譜法同時(shí)測定保山透心綠蠶豆中16種氨基酸的方法。方法以異硫氰酸苯酯（PITC）為柱前衍生試劑，采用Diamonsil AAA氨基酸分析柱用二元梯度洗脫，于UV254 nm 波長下檢測，60min 內(nèi)16種氨基酸得到良好的分離。氨基酸濃度在0.1～0.5 umol/mL范圍內(nèi)其濃度與響應(yīng)值具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.9997，樣品的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在1.36%～5.43%之間，檢出限為0.05umol/mL。相對其他柱前衍生測定氨基酸的方法而言，該方法快速、靈敏、準(zhǔn)確，樣品處理簡便易行，可用于保山透心綠蠶豆及其他豆類中氨基酸的分析測定。

保山透心綠蠶豆屬蠶豆中的稀有名貴品種，特產(chǎn)于云南保山，特殊的地理氣候使其維生素、營養(yǎng)物質(zhì)含量均比普通蠶豆高[1]，是高蛋白、富淀粉、低脂肪的豆類作物，含有人體必須的8種氨基酸、維生素和礦物質(zhì)，被譽(yù)為云南高原特種綠蠶豆。氨基酸作為評價(jià)營養(yǎng)質(zhì)量的一項(xiàng)重要指標(biāo)，研究保山透心綠蠶豆中的氨基酸組成及其含量，對研究其營養(yǎng)價(jià)值和質(zhì)量控制具有十分重要的意義。

測定氨基酸的方法很多[2-5] ，如氨基酸分析儀柱后衍生測定，但是氨基酸分析儀價(jià)格昂貴，分析時(shí)間長，且只能用于分析氨基酸，限制了氨基酸分析技術(shù)的廣泛使用。七十年代以來，柱前衍生高效液相色譜法開始應(yīng)用于氨基酸的測定[6]，特別是異硫氰酸苯酯（ PITC）柱前衍生法由于其產(chǎn)物苯基硫酸鹽較穩(wěn)定，該法是目前氨基酸分析中具有吸引力的分析方法之一。

本文以異硫氰酸苯酯（PITC）為柱前衍生劑，結(jié)合紫外檢測器定量檢測保山透心綠蠶豆中16種氨基酸含量。該方法快速、靈敏、準(zhǔn)確，樣品處理簡便易行，可用于保山透心綠蠶豆及其他豆類中氨基酸的分析測定。

1實(shí)驗(yàn)部分

本研究建立了異硫氰酸苯酯（PITC）柱前衍生高效液相色譜法同時(shí)測定保山透心綠蠶豆中16種氨基酸的方法，該方法快速、靈敏、準(zhǔn)確，可用于豆類中氨基酸的分析。同時(shí)，測定結(jié)果表明保山透心綠蠶豆氨基酸總含量為30.3%，處于蠶豆中含量的上端[7-8]，由此可見，保山透心綠蠶豆蛋白質(zhì)含量較高，具有較高的營養(yǎng)價(jià)值，是值得推廣的地方特色產(chǎn)品。

（作者單位：云南省保山市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督綜合檢測中心）