一年蓬不同部位中焦袂康酸的含量測定

宋利，趙好冬，杜延佳，曲朋，張輝，孫佳明

(長春中醫(yī)藥大學，吉林 長春 130117)

*

張輝，教授，研究方向：中藥與天然藥物有效成分；E-mail：zhanghui_8080@163.com；

孫佳明，副研究員，研究方向：中藥與天然藥物有效成分；E-mail：sun_jiaming2000@163.com

一年蓬不同部位中焦袂康酸的含量測定

宋利，趙好冬，杜延佳，曲朋，張輝*，孫佳明*

(長春中醫(yī)藥大學，吉林 長春 130117)

目的建立一年蓬中焦袂康酸的HPLC含量測定方法，并對一年蓬藥材不同部位中焦袂康酸含量進行測定。方法采用Unitary C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，以甲醇-1‰三氟乙酸水溶液(5∶95)為流動相，檢測波長為270 nm，柱溫為30 ℃，流速為1.0 mL·min-1。結果焦袂康酸的線性范圍為0.25～62.0 μg·mL-1(r=0.999 3)，平均加樣回收率為98.4%，RSD=1.2%(n=6)。一年蓬花、葉、莖中焦袂康酸含量分別為2.56，0.40，0.08 mg·g-1，根中含量低于0.012 mg·g-1。結論該方法簡便、準確、重復性好，可以作為一年蓬中焦袂康酸的含量測定方法，為合理利用一年蓬藥材提供參考依據(jù)。

一年蓬；焦袂康酸；高效液相色譜法

一年蓬Erigeronannuus(L.)Pers.[AsterannuusL.]是菊科飛蓬屬植物，以全草入藥，又名女菀、野蒿、牙腫消、牙根消等。其味甘、苦，性涼，具有解毒，止血，消食，截瘧的功能，主治淋巴結炎，齒齦炎，瘧疾，消化不良，胃腸炎，血尿，毒蛇咬傷[1]。一年蓬化學成分包括黃酮類[2-3]、萜類和甾醇類[4-6]、有機酸類[7-9]等。其中，一年蓬全草含焦袂康酸[2]。張人偉等[10]研究表明焦袂康酸有升壓作用，其葡萄糖苷有降壓和鎮(zhèn)靜催眠作用。李鐵軍等[11]研究證明燈盞花中焦袂康酸苷(ES)對大鼠腦缺血再灌注損傷有保護作用，其抗氧化和抗活性氧作用可能是其保護作用機制之一。孫漢董等[12]研究證明焦袂康酸及其葡萄糖苷具有顯著增加腦血管流量，改善腦血循環(huán)，降低腦血管阻力，提高血腦屏障的通透性，增加心肌營養(yǎng)回流的作用，同時具備提高機體巨噬細胞免疫功能和較強的抑制內凝血等作用。此外，焦袂康酸也是制備香味增效劑麥芽酚、乙基麥芽酚的重要中間體[13]。目前尚未見有文獻報道測定一年蓬不同部位焦袂康酸含量的方法。本研究建立了一年蓬中焦袂康酸的HPLC測定方法，并對一年蓬藥材不同部位中焦袂康酸含量進行測定。

1 儀器與材料

1.1 儀器

AgiLent 1260系列高效液相色譜儀，Sartorius BSA124S-CW型電子天平，KQ-3200B型超聲波清洗器。

1.2 材料

一年蓬藥材采于吉林省蛟河市，經長春中醫(yī)藥大學張輝教授鑒定為菊科飛蓬屬一年蓬Erigeronannuus(L.)Pers.[AsterannuusL.]的全草。將該藥材分揀為花、葉、莖、根，晾干，粉碎，過三號篩，備用。

焦袂康酸對照品為本實驗室從一年蓬中分離得到，經波譜分析鑒定結構，HPLC面積歸一化法檢測純度>98.0%。甲醇、三氟乙酸為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其余試劑為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

Unitary C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動相：甲醇-1‰三氟乙酸水溶液(5∶95)，檢測波長：270 nm，柱溫：30 ℃，流速：1.0 mL·min-1，進樣量：10 μL。在上述色譜條件下對照品和樣品的色譜圖見圖1。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱定焦袂康酸對照品0.006 2 g，置100 mL量瓶中，甲醇溶解，定容，搖勻，配制成濃度為0.062 mg·mL-1的焦袂康酸對照品溶液，備用。

2.3 供試品溶液的制備

取一年蓬花、葉、莖、根粉末各約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz)1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失質量，搖勻，靜置，取上清液，0.45 μm濾膜濾過，即得供試品溶液。

1.焦袂康酸A.對照品 B.莖 C.花 D.根 E.葉圖1 焦袂康酸對照品及一年蓬不同部位HPLC圖

2.4 線性關系考察

精密吸取2.2項下對照品溶液0.04，1，4，8，10 mL，甲醇定溶于10 mL量瓶中，搖勻。分別吸取10 μL注入色譜儀，按上述色譜條件測定峰面積。以濃度為橫坐標(Χ)、峰面積為縱坐標(Y)進行線性回歸，所得焦袂康酸的回歸方程為Y=60.099Χ-14.549(r=0.999 3)。結果表明，焦袂康酸在0.25～62.0 μg·mL-1與峰面積呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

取2.2項下對照品溶液1 mL，甲醇定溶于10 mL量瓶中，搖勻，按2.1項下色譜條件連續(xù)進樣5次，測得焦袂康酸峰面積的RSD=0.16%，試驗表明儀器精密度良好。

2.6 重復性試驗

按2.3項下的供試品溶液的制備方法平行制備一年蓬花的供試品溶液5份，按2.1項下色譜條件進樣，測定焦袂康酸平均質量分數(shù)為2.56 mg·g-1，RSD=1.70%，表明此法重復性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

精密稱取2.3項下制備的一年蓬花供試品溶液，按2.1項下色譜條件每2 h進樣1次，進樣6次，計算得焦袂康酸峰面積的RSD=0.97%，結果表明供試品溶液在10 h內穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的一年蓬花細粉6份，分別精密加入2.2項下焦袂康酸對照品溶液10 mL，照2.3項下方法制成加樣回收供試液，按上述色譜條件依法進行測定，結果見表1。

表1 一年蓬花中焦袂康酸加樣回收率試驗

2.9 樣品含量測定

按2.3項下方法分別制備一年蓬花、葉、莖、根樣品溶液各3份，按2.1項下色譜條件進樣，測得峰面積，計算焦袂康酸的含量。測得一年蓬花、葉、莖中焦袂康酸的平均質量分數(shù)分別為2.56，0.40，0.08 mg·g-1，根中焦袂康酸質量分數(shù)低于0.012 mg·g-1。

3 討論

取甲醇溶解的焦袂康酸對照品溶液，以甲醇為空白，在200～400 nm進行光譜掃描，可見焦袂康酸在270 nm波長處有最大吸收，因此選擇270 nm作為檢測波長。焦袂康酸為3-羥基-4-吡喃酮，具有弱酸性，經嘗試最終選用使峰形較好的甲醇-1‰三氟乙酸水溶液(5∶95)作為流動相。

應用本法測定了一年蓬藥材不同部位中焦袂康酸的含量，結果顯示各部位焦袂康酸含量為花>葉>莖>根，且各部位含量差異較為明顯，其中根中幾乎不含焦袂康酸，而花中的焦袂康酸含量是葉的6倍左右、莖的30余倍，因此判定花為一年蓬中富含焦袂康酸的主要藥用部位。這提示我們在資源可持續(xù)利用的原則下，只采收一年蓬的地上部分就可獲得該植物中絕大多數(shù)的焦袂康酸。本研究建立的方法不僅能夠快速準確地測定一年蓬中焦袂康酸的含量，也為一年蓬藥材的合理采收和開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

[1] 南京中醫(yī)藥大學.中藥大辭典[M].第二版.上冊.上海：上海科學出版社，2006：3.

[2] 江蘇新醫(yī)學院.中藥大辭典[M].上冊.上海：上海科學技術出版社,1977：3.

[3] 《全國中草藥匯編》編寫組.全國中草藥匯編[M].上冊.北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：1.

[4] 李新，張慶康，高坤.一年蓬的化學成分研究[J].西北植物學報，2004，24(11)：2096-2099.

[5] Chikao Nishino，Ritsuko Kimura.Isolation of sex pheromone mimic of the American cockroach by monitoring with male/female ratio in electroantenn-ogram[J].Insect Physiol，1981，27(5)：305-311.

[6] Takeyoshi Iijima，Yasunori Yaoita，Masao Ki kuchi.Fivenew sesquiter penoids and a new diter penoid fromErigeronannuus(L.)Pers.，Erigeronphiladelph-icusL.andErigeronsumairensisRetz[J].Chem Pharm Bull，2003，51(5)：545-549.

[7] Hashitoko，Yasuyuki.Isolation of 5-hhyroxy-α-pyrone and itsβ-D-glucoside from Erigeron and their use as aging inhibitors for plants and glycosidase inhibitor：Jpn，04198177，A2[P].1992-07-17.

[8] V.P.Rudonko，S.M.Tymchuk，O.V.Medvedovskaya，et al.Fatty acid composition of Erigeron species[J].Khim Prir Soedin，1993，(2)：294.

[9] HyuncheolOh，Sunyoung Lee，Ho-Sub Lee，et al.Germi nation inhibitory constituents from Erigeron annuus[J].Phytochemistry，2002，61：175.

[10] 張人偉，楊生元，林詠月.燈盞花的化學成分研究——Ⅰ.焦?？邓峒耙环N新苷的分離、鑒定[J].藥學學報，1981，16(1)：68-69.

[11] 李鐵軍，芮耀誠，邱彥，等.燈盞花中焦袂康酸苷抗大鼠腦缺血再灌注損傷的研究[J].藥學服務與研究，2001，1(1)：28-30.

[12] 孫漢董，岳建明，陳玉磐，等.焦袂康酸及其葡萄糖苷(飛蓬苷)在制藥中的應用：中國，1136435A[P].1996.

[13] 沙靖全，于文錦，李錦州.乙基麥芽酚合成的進展[J].化學工程師，2001，87(6)：38-39.

DeterminationofPyromeconicacidinDifferentPartsofErigeronannus

SONGLi，ZHAOHaodong，DUYanjia，QUPeng，ZHANGHui*，SUNJiaming*

(ChangchunUniversityofChineseMedicine，Changchun130117，China)

Objective：To establish a method for the determination of pyromeconic acid inErigeronannusby HPLC，and determine the contents of pyromeconic acid in different parts ofE.annus.MethodsUnitary C18column(4.6 mm×250 mm，5 μm)was used with a mobile phase consisting of methanol-1‰ trifluoroacetic acid aqueous(5∶95).The detection wavelength was 270 nm.Column temperature was 30 ℃.The flow rate was 1.0 mL·min-1.ResultsThe linear range of pyromeconic acid was 0.25～62.0 μg·mL-1(r=0.999 3)and The mean recoveries rate was 98.4 %，RSD 1.2%(n=6).The contents of Pyromeconic acid in flower，leaf，stem were 2.56，0.40，0.08 mg·g-1，while root was lower than 0.012 mg·g-1.ConclusionThe method is simple，accurate，reproducible，and can be used as the determination method of pyromeconic acid inE.annus，and meanwhile，can provide reference basis for the rational use ofE.annus.

Erigeronannus；Pyromeconic acid；HPLC

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.06.006

2014-01-16)