綜合評(píng)分法優(yōu)選番瀉葉的初加工方式△

肖娟，劉嬋，萬丹，張水寒*，黃惠勇*

(1.湖南省中醫(yī)藥研究院，湖南 長(zhǎng)沙 410013;2.楊永華全國(guó)名老中醫(yī)專家傳承工作室，湖南 長(zhǎng)沙 410013)

湖南省科技廳重點(diǎn)項(xiàng)目(2012TF1005)

*

張水寒，研究員，研究方向：中藥制劑及分析研究；E-mail：zhangshuihan0220@126.com

黃惠勇，教授，研究方向：中醫(yī)外科研究；E-mail：hntcmakj@163.com

綜合評(píng)分法優(yōu)選番瀉葉的初加工方式△

肖娟1,2，劉嬋1，萬丹1,2，張水寒1,2*，黃惠勇1*

(1.湖南省中醫(yī)藥研究院，湖南 長(zhǎng)沙 410013;2.楊永華全國(guó)名老中醫(yī)專家傳承工作室，湖南 長(zhǎng)沙 410013)

目的選出番瀉葉鮮品的最佳初加工方式。方法以番瀉苷A、B，異鼠李素-3-O-β-2-龍膽二糖苷及外觀為評(píng)價(jià)指標(biāo)，考察曬制、陰干、微波制、炒制等6種初加工方式，采用綜合評(píng)分法從中選出番瀉葉最優(yōu)的初加工方式。結(jié)果最佳初加工方式為微波制、中火力微波制2 min。結(jié)論優(yōu)選的番瀉葉初加工方式合理可行、操作簡(jiǎn)便，可對(duì)番瀉葉的初加工起到規(guī)范和指導(dǎo)作用。

番瀉葉；初加工；綜合評(píng)分

番瀉葉為豆科植物狹葉番瀉CassiaangustifoliaVahl.或尖葉番瀉CassiaacutifoliaDelile的干燥小葉，具有瀉熱導(dǎo)滯，通便利水的功效[1]，臨床用于熱結(jié)積滯，便秘腹痛，水腫脹滿，導(dǎo)瀉成分主要為番瀉苷A、B、C、D[2]。由于番瀉葉具有顯著瀉下作用，不僅用作藥用，在保健品中也被廣泛利用。番瀉葉于生長(zhǎng)盛期葉片采摘以后，應(yīng)及時(shí)加工處理，以免其質(zhì)量受到影響，發(fā)生葉片變黃等情況。長(zhǎng)期以來，如何對(duì)番瀉葉鮮品進(jìn)行初加工沒有具體的工藝可參考。本文通過實(shí)驗(yàn)研究，優(yōu)選出最適宜初加工方式，為番瀉葉的初加工提供具體可參考工藝。

1 儀器與材料

LC-20A高效液相色譜儀(日本島津公司)；T-214型電子分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；101-1型電熱鼓風(fēng)恒溫干燥箱(上海天緣實(shí)驗(yàn)儀器廠)；微波爐(格蘭仕集團(tuán))；電磁爐(美的集團(tuán))。

甲醇、乙腈和冰醋酸為色譜純，其他試劑均為分析醇，水為重蒸餾水。番瀉苷A(批號(hào)：A0182)、番瀉苷B(批號(hào)：A0183)購于中國(guó)食品藥品檢定研究院，異鼠李素-3-O-β-2-龍膽二糖苷由中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所王祝舉教授提供。番瀉葉鮮葉采購于云南，經(jīng)湖南省中醫(yī)藥研究院中藥所生藥鑒定室鑒定為豆科植物狹葉番瀉CassiaangustifoliaVahl.的葉子。

2 方法與結(jié)果

2.1 不同初加工方式處理番瀉葉

2.1.1曬干 稱取番瀉葉鮮葉60 g，均勻平鋪于竹篩網(wǎng)內(nèi)于日光下曝曬，曬干保存于干燥箱內(nèi)備用。

2.1.2陰干 稱取番瀉葉鮮葉60 g，均勻平鋪于竹篩網(wǎng)內(nèi)于陰涼通風(fēng)處，自然陰干，陰干保存于干燥箱內(nèi)，備用。

2.1.3微波制 取番瀉葉鮮葉9份，每份60 g，均勻平鋪于微波爐盤內(nèi)，分別于微火力、中火力、高火力檔微波2、3、4 min，保存于干燥箱內(nèi)，備用。

2.1.4烘制 取番瀉葉鮮葉9份，每份60 g，分別于恒溫干燥箱中40 ℃、60 ℃、 90 ℃烘制30、45、60 min，保存于干燥箱內(nèi)，備用。

2.1.5炒制 取番瀉葉鮮葉4份，每份60 g，分別于鐵鍋中100 ℃炒制2、3 min；110 ℃、120 ℃分別炒制2 min，保存于干燥箱內(nèi)，備用。

2.1.6蒸制 取番瀉葉鮮葉3份，每份60 g，分別于蒸屜中100 ℃蒸制3、5、8 min，置于陰涼通風(fēng)處，陰干，保存于干燥箱內(nèi)，備用。

將以上處理樣品編號(hào)，見表1。

表1 不同處理方式的番瀉葉樣品

2.2 番瀉葉中番瀉苷B、番瀉苷A及異鼠李素-3-O-β-2-龍膽二糖苷的測(cè)定[3]

2.2.1 色譜適用性條件 色譜柱為依利特Hypersil ODS2柱(4.6 mm×250 mm，5 um)，流動(dòng)相為乙腈(A)-1%冰醋酸溶液(B)，檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm，流速為1 mL/min，柱溫為40℃，進(jìn)樣量為10μl。梯度洗脫洗脫程序：0→5 min，5→10%A；5→25 min，10→15%A；25→30 min，15%A；30→40 min，15→19%A；40→45 min，19→25%A；45→55 min，25→5%A。對(duì)照品及樣品的HPLC色譜見圖1。

A.混合對(duì)照品 B供試品1.異鼠李素-3-O-β-2-龍膽二糖苷 2.番瀉苷B 3.番瀉苷A圖1 對(duì)照品及樣品的HPLC色譜

2.2.2對(duì)照品溶液的制備 精密稱取對(duì)照品番瀉苷A 8.8 mg，番瀉苷B 7.1 mg，異鼠李素-3-O-β-2-龍膽二糖苷6.3 mg用50%甲醇溶液溶解并定容至100 mL量瓶中配制成混合對(duì)照品溶液。

2.2.3供試品溶液的制備 稱取番瀉葉細(xì)粉0.05 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密移取25 mL 50%甲醇，稱重，超聲提取15 min，冷卻至室溫，補(bǔ)重，過濾，取續(xù)濾液過0.45 μm微孔濾膜，得供試品溶液，備用。

2.2.4線性考察 精密量取配制好的番瀉苷A、B和異鼠李素-3-O-β-2-龍膽二糖苷混合對(duì)照品溶液1、2、4、6、8、10、20 μL，進(jìn)樣測(cè)定，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，得到回歸方程：番瀉苷A為Y=1 826.4X+3 917.1(r=0.999 3)，線性范圍0.071～1.42 μg；番瀉苷B為Y=1 987.6X+3 187.9(r=0.999 4)，線性范圍0.088～1.76μg；異鼠李素-3-O-β-2-龍膽二糖苷為Y=1 327.3X-987.52(r=0.999 3)，線性范圍0.063～1.26 μg。

2.2.5精密度試驗(yàn) 取番瀉葉鮮品適量，稱取1份，按2.2.1項(xiàng)下方法測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣5次，結(jié)果為番瀉苷A的RSD=1.08%，番瀉苷B的RSD=1.08%，說明精密度良好。

2.2.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 取番瀉葉鮮品適量，稱取1份，按2.2.1項(xiàng)下方法制備，分別在制備后0、2、4、6、8、12 h精密吸取10 μL，注人液相色譜儀，測(cè)得峰面積，結(jié)果為番瀉苷A的RSD=1.12%，番瀉苷B的RSD=1.07%，說明樣品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.7重復(fù)性試驗(yàn) 取番瀉葉鮮品適量，稱取5份，按2.2.1項(xiàng)下方法測(cè)定，結(jié)果為番瀉苷A RSD=1.67%，番瀉苷B的RSD=1.83%，說明重復(fù)性良好。

2.2.8回收率測(cè)定 稱取已知異鼠李素-3-O-β-2-龍膽二糖苷和番瀉苷A、B含量的番瀉葉鮮品6份，每份0.05 g，精密稱定，平行6份，置25 mL容量瓶中，分別加入0.052 mg·mL-1濃度的番瀉苷A，0.051 mg·mL-1濃度的番瀉苷B，0.054 mg·mL-1濃度的異鼠李素-3-O-β-2-龍膽二糖苷10 mL。按2.2.3項(xiàng)下供試品溶液制備方法處理，制得加樣回收供試品溶液，注入高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算番瀉苷A、B和異鼠李素-3-O-β-2-龍膽二糖苷的加樣回收率，結(jié)果見表2(A為番瀉苷A，B為番瀉苷B，C為異鼠李素-3-O-β-2-龍膽二糖苷)。

2.2.9樣品測(cè)定 精密稱取樣品粉末約0.05 g，按2.2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定。

表2 4種對(duì)照品回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.2.10 對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行綜合評(píng)分

對(duì)表1中加工方式所得樣品外觀進(jìn)行評(píng)分：樣品顏色鮮艷，葉片外形完整，計(jì)10分；樣品顏色暗淡稍許變黃，葉片外形完整，計(jì)9分；樣品顏色變黃，葉片外形完整，計(jì)8分；樣品顏色焦黃，葉片外形不完整，計(jì)7分。

用多指標(biāo)的評(píng)分公式，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析。根據(jù)所測(cè)成分在番瀉葉中的重要性，考慮番瀉苷A、B占30%，異鼠李素-3-O-β-2-龍膽二糖苷占20%，，外觀占20%。參照2.2.1項(xiàng)下，制備15份樣品，并按2.2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別精密吸取番瀉苷A、B和異鼠李素-3-O-β-2-龍膽二糖苷混合對(duì)照品溶液10 μL，供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見表3。分別計(jì)算各樣品綜合評(píng)分[2]，綜和評(píng)分=(M1/M1max)×0.3+(M2/M2max)×0.3+(M3/M3max)×0.2+(M4/M4max)×0.2，其中M1、M2分別為番瀉苷A、B的量，M3為異鼠李素-3-O-β-2-龍膽二糖苷的量，M4為外觀值，總分計(jì)為1分，分析結(jié)果見表3。

表3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及其綜合評(píng)分

由表3實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，微波制法綜合評(píng)分高于其他初處理方法，其次是蒸制法和陰干，曝曬、烘制法和炒制法綜合評(píng)分較低。其中中火力微波2 min番瀉苷A、B含量最高，外觀也最佳。

3 討論

曝曬與陰干制法相比，番瀉苷A、B含量較低，但番瀉葉外觀較好；微波制得到的番瀉葉不僅指標(biāo)成分含量較高，且葉片外觀好，但隨著火力加大，到高火力時(shí)，指標(biāo)成分含量下降；烘制法中溫度變高到100 ℃時(shí)，番瀉苷A、B含量明顯較低，且炒制法中在溫度為110 ℃以上時(shí)，也出現(xiàn)同樣實(shí)驗(yàn)結(jié)果，這可能是由于番瀉苷A[3]、B在高溫下不穩(wěn)定引起的，所以初加工時(shí)溫度不宜過高，應(yīng)選擇合適的初加工方式。

番瀉葉鮮品采摘后，不及時(shí)進(jìn)行初加工處理和處理方法不當(dāng)，將會(huì)造成番瀉葉質(zhì)量下降葉片發(fā)黃生斑，貯存時(shí)易發(fā)霉、生蟲。本實(shí)驗(yàn)優(yōu)選出的初加工方式為微波處理，中火力微波2 min，得到的樣品不僅主要有效成分含量高，葉片顏色呈原綠色，葉片形狀整齊完好，散發(fā)清香味。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典[S].一部.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2] LemLi，S Toppet，J Cuvcele，et al.Naphthalene glycosides inCassiasennaandCassiaangustigolia[J].J pharmacol，1998，36(suppl1)：326.

[3] 邵 怡，張水寒，蔡光先.番瀉葉超微粉體HPLC指紋圖譜的研究[J].中草藥，2012，34(3)：397-400.

[4] 馬春娟，孫俠.利用HPLC法測(cè)定番瀉葉中番瀉苷A的含量[J].通化師范學(xué)院學(xué)報(bào).2010，31(2)：37-38.

OptimizationofOriginalProcessingTechnologyforSenneaFoliumbyComprehensiveScoreMethod

XIAOJuan1,2，LIUChan1，WANDan1,2，ZHANGShuihan1,2*，HUANGHuiyong1,2*

(1.HunanAcademyofChineseMedicine，Changsha410013，China；2.YangYong-huaNameofOldChineseMedicineExpertsHeritageStudio,Changsha410013，China；)

Objective：To choose the optimal processing technology for sennea folium.MethodsTaking the contents of iso rhamnetin-3-O-β-gentiobioside，sennoside B，C-sennoside A and sennea folium appearance as indicators，comprehensive score were used to optimize the best original processing technology for sennea folium.Through inspecting drying in the sunshine，shade，microwave drying and frying.ResultsThe optimal original processing technology was microwave drying to deal with sample at medium fire in 2 minutes.ConclusionThe optimal original processing technology is reasonable and feasible，and could be used as a standard and guidance.

Sennea folium；Original processing technology；Comprehensive score

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.06.010

2013-12-17)