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    兩種方法建立兔VX2肝癌模型的比較及影像學評估

    2014-11-01 06:23:40陳茂振尹化斌
    介入放射學雜志 2014年1期
    關鍵詞:供血開腹造影

    錢 亭, 陳茂振, 高 峰, 尹化斌

    VX2肝癌模型已廣泛應用于介入治療的實驗研究,其造模方法有多種,常用的有開腹包埋及穿刺種植兩種[1]。本實驗對兩種建模方法進行比較,篩選簡單、有效的模型制作方法,并探討其影像學表現(xiàn)。

    1 材料與方法

    1.1 實驗動物及分組

    新西蘭白兔40只,雌雄不限,體重2.0~3.0 kg,購自上海國睿生命科技有限公司。荷瘤兔由上海市第九人民醫(yī)院提供。將動物隨機分成A、B兩組,每組20只。A組采用開腹包埋植入VX2瘤塊,B組采用CT引導下穿刺種植VX2瘤塊。

    1.2 VX2瘤株的制備

    采用鹽酸氯胺酮 (福建古田藥業(yè)有限公司)∶陸眠寧Ⅱ(1.5 ml∶30 mg,吉林省華牧動物保健品有限公司)1∶1混合液(0.2~0.3 ml/kg)肌肉注射麻醉荷瘤兔,常規(guī)備皮、消毒、鋪洞巾,于兔后肢外側逐層分離至肌肉,完整剝離出腫瘤組織,放入盛有少量生理鹽水的換藥碗中。用生理鹽水沖洗瘤塊3~4次,剪去多余的筋膜、肌肉組織及瘤塊內壞死組織,隨后放入另一無菌換藥碗內,倒入少量生理鹽水,將瘤塊剪成1~2 mm3小塊備用。

    1.3 兔VX2肝癌模型的建立

    VX2肝癌模型制備前,所有實驗兔禁食12 h,鹽酸氯胺酮:陸眠寧Ⅱ1∶1混合液 (0.2~0.3 ml/kg)肌肉注射麻醉。

    1.3.1 開腹包埋植入VX2瘤塊 A組兔取仰臥位,四肢固定于手術臺上。上腹部常規(guī)備皮、消毒、鋪巾,于劍突下偏左2 cm處沿肋間隙開腹2~3 cm,暴露肝左葉,在較厚處用穿刺針尖沿肝門方向插入肝實質內做成深約1 cm切口,取2塊組織塊植入,壓迫止血,確認無活動性出血后逐層縫合。術后肌內注射青霉素40萬u,連續(xù)3 d。

    1.3.2 CT引導下穿刺種植VX2瘤塊 B組兔仰臥位固定于CT檢查床上(自制相關簡易工具),根據(jù)CT平掃確定進針位置及深度,明確接種位置 (均選用肝左葉)。接種時,用細針尖(5 ml注射器針尖折斷制成)在皮膚上定位,再用18 G穿刺針(NIPRO)經皮肋間穿刺至肝左外葉,深度約10 mm,拔出針芯,注意有無出血,用眼科剪夾取2塊瘤組織塞入鞘內,再用穿刺針將瘤塊推入肝實質內,需多次重復推注針芯,確定所取瘤塊均接種于肝左葉,見圖1。

    圖1 CT引導下經皮穿刺瘤塊植入

    1.4 影像學檢查

    1.4.1 CT檢查 兩組實驗兔均于術后2周行16排螺旋 CT 檢查(LightSpeed,GE),掃描前禁食 12 h,全麻后將實驗兔固定于自制檢查板上。仰臥位,頭先進。平掃的掃描參數(shù)為:120 kV,200 mA,F(xiàn)OV 20,Pitch 1.375,層厚 5 mm,1.25 薄層重建;增強掃描:采用耳緣靜脈高壓團注方式,對比劑為碘佛醇注射液(加拿大),劑量為2 ml/kg,注入速度為1 ml/s,分別于注入對比劑后12、25、50及150 s時行動脈早期、動脈晚期、門脈期及延遲期掃描。

    1.4.2 DSA血管造影 實驗兔全麻,備皮,仰臥位固定,腹股溝區(qū)常規(guī)消毒、鋪巾,觸摸右側股動脈搏動最強處,經右側腹股溝下方沿股動脈搏動處做與股動脈走行一致的長約4 cm的手術切口,分離和暴露股動脈約2 cm。在已分離的股動脈遠端和近端分別放置2條3.0絲線,先把動脈遠端用絲線結扎,然后提起近端絲線使兩絲線間的股動脈充盈,用20 G穿刺針穿刺股動脈,利用微導絲引導微導管插管[2],在透視情況下將微導管選擇性插入腹腔干,推注碘化油注射液(法國加柏公司)約1 ml造影,然后超選擇性插入肝左動脈,再次推注對比劑造影,以確定微導管的位置及腫瘤血供情況。術后拔除導管,同時結扎股動脈近端,縫合包扎切口。

    1.5 觀察指標

    記錄兩組實驗兔種植所需時間、術后感染及死亡情況,2周后根據(jù)CT和DSA圖像記錄兩組肝內、外成瘤情況、腫瘤體積(CT增強分別測得腫瘤的最大層面長徑L,與L垂直的最寬徑W,用公式:V=L × W2/2)[3],觀察有無腹腔種植性轉移及腹腔積液,并比較術前、術后實驗兔體重變化情況。觀察腫瘤在不同影像學檢查中的表現(xiàn)。

    1.6 統(tǒng)計學分析

    應用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學分析。計量資料采用獨立樣本t檢驗,計數(shù)資料采用Fisher檢驗,P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結果

    2.1 模型制備情況

    A組中4只于術后3 d死亡,2只經CT檢查均未見肝內、肝外成瘤,10只肝內成瘤,2只腹壁浸潤,2只腹腔種植性轉移并見腹腔積液(圖2a)。B組2周內未見死亡,2只經CT檢查均未見肝內、肝外成瘤,17只肝內成瘤,1只腹壁浸潤(圖 2b),未見腹腔種植性轉移。

    圖2 增強CT所見肝外成瘤

    種植操作時間A組為(32±5)min,B組為(8±2)min,組間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。術后實驗兔體重 A組為 (2.37±0.25)kg,B組為 (2.26±0.34)kg,組間差異無統(tǒng)計學意義(P > 0.05)。 肝內腫瘤體積 A組為 (4 739.29±530.2)mm3,B組為(4 789 ± 626.27)mm3,組間差異無統(tǒng)計學意義(P >0.05)。 死亡率 A 組為 20%(4/20),B 組為 0(0/20),組間差異有統(tǒng)計學意義(P=0.037)。肝內成瘤率A組為 50%(10/20),B 組為 85%(17/20),組間差異有統(tǒng)計學意義(P=0.02)。

    2.2 CT 表現(xiàn)

    兩組建模成功,實驗兔在CT上均表現(xiàn)為局灶孤立結節(jié),CT平掃為低密度結節(jié)影,A組平掃CT值約為(42.3 ± 5.4)Hu,B 組為(45.6 ± 3.7)Hu。 增強掃描腫瘤周邊環(huán)形強化,動脈早期、動脈晚期、門脈期及延遲期掃描A組CT值分別為 (89.6±7.2)、(111.3 ± 6.4)、(108 ± 6.7)和(92.5 ± 9.3)Hu,B 組分別為(83.5 ± 4.7)、(120.7 ± 6.3)、(113.2 ± 3.7)和(93.2±5.8)Hu,腫瘤于增強動脈早期即出現(xiàn)強化,動脈晚期進一步強化,門脈期與肝實質強化水平一致,到延遲期對比劑部分退出,見圖3。兩組平掃及增強各期比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

    圖3 B組各期CT增強掃描所見

    2.3 血管造影表現(xiàn)

    兩組模型兔肝動脈造影均可見腫瘤供血動脈增粗,分支被腫瘤推壓形成“抱球征”,腫瘤呈環(huán)形染色(圖4)。兩組模型兔腹腔干動脈均自T12~L1水平由腹主動脈前壁稍偏右側發(fā)出。腹腔干造影尋找肝總動脈,可見肝總動脈向右水平發(fā)出胃十二指腸動脈,向上發(fā)出肝固有動脈。肝固有動脈發(fā)出肝左、右葉動脈。供血的肝動脈增粗,顯影較濃,向腫瘤中心發(fā)出腫瘤血管,形成抱球狀腫瘤染色。其中2只實驗兔插管造影未成功。

    3 討論

    3.1 兔VX2肝癌模型制備

    VX2瘤株是由Shope病毒誘發(fā)的兔乳頭狀瘤衍生的鱗狀細胞癌經70次傳代而建立的腫瘤細胞株,具有很強的侵襲轉移性[4]。接種2周后行相關檢查,原因為此階段腫瘤生長最旺盛,體積迅速增大,切面多呈實質性,轉移及壞死較少。此階段為腫瘤血管形成期,毛細血管大量形成,易實施介入手術。

    圖4 兔肝固有動脈動脈造影,可見腫瘤供血豐富,瘤區(qū)呈環(huán)形染色

    本實驗中,B組操作過程簡單,操作時間明顯短于A組,成瘤率高于A組,部分原因為縮短了瘤塊離體的時間,減少了瘤塊缺血再灌注損傷,同時降低了瘤塊感染性。A組術后4只死亡,由于手術對實驗動物創(chuàng)傷大,術中麻醉要求高,腫瘤可沿手術切口向腹腔蔓延,且實驗兔術后免疫力下降,易發(fā)生腹腔種植性轉移。本實驗A組中有2只發(fā)生腹腔轉移,而B組未見轉移。實驗中共有4只接種2周后未見肝內及肝外腫瘤生長,考慮與瘤塊取材有關,因此取材時應盡可能選取腫瘤邊緣生長旺盛的魚肉樣組織,盡量去除壞死及結締組織,以提高接種成功率。另一方面原因可能與實驗兔免疫防御機制有關。

    兩組實驗兔術后體重及腫瘤體積未見明顯差別,表明兩種種植方式對實驗兔的體重及腫瘤體積無顯著影響。

    CT引導下經皮穿刺較開腹種植簡單、實用,但對操作者要求高,進針要快且不易太淺(1.0~1.5 cm),否則組織塊易沿竇道流出或由于供血不足而生長緩慢。腫瘤組織塊注入針芯后,需多次重復推注,確定瘤塊接種于肝左葉。拔出針芯后按壓穿刺點30 s,防止瘤塊溢出。

    3.2 CT表現(xiàn)

    兩組兔VX2肝癌模型CT表現(xiàn)一致,平掃上均表現(xiàn)為低密度。增強檢查掃描4期,可使動脈血管清晰顯示,利于指導血管造影檢查。增強檢查發(fā)現(xiàn)不同于人類肝細胞性肝癌“快進快出”的強化特點[5],表現(xiàn)為動脈早期環(huán)形強化,動脈晚期進一步強化,到延遲期部分退出。

    3.3 血管造影表現(xiàn)及技術要點

    兩組實驗兔血管造影均顯示腫瘤供血動脈增粗,分支被腫瘤推壓形成“抱球征”,腫瘤環(huán)形染色。其中,腹腔干動脈多開口于T12~L1水平,應先行腹主動脈造影明確腹腔干動脈開口,之后直接用導管頭端指向腹側稍偏右于T12~L1水平反復探尋腹腔干動脈,可縮短手術時間及減少對比劑的用量,進而減輕對實驗兔腎功能的影響。行腹腔干動脈造影時,可將球管向右側傾斜10°~15°,能較好的辨認肝固有動脈,肝固有動脈迂曲纖細,微導管在微導絲配合下可進入肝固有動脈,但如果進一步超選擇肝左右動脈則較困難。如進行血管內介入治療,導管頭位于肝固有動脈,由于腫瘤供血動脈較正常肝動脈增粗且血流較快,緩慢注藥可優(yōu)先進入腫瘤供血動脈。因此,介入治療時,如超選肝左動脈困難,不可強行進入,否則易引起血管痙攣、損傷,導致實驗失敗。實驗中2只血管造影未成功,原因可能為肝固有動脈起源異常。其中1只實驗兔腫瘤較小,直徑約1.2 mm,供瘤血管少而細小也是實驗失敗的原因之一。

    本實驗通過比較開腹及穿刺植入瘤塊法,證實開腹包埋法制作動物模型創(chuàng)傷大,動物死亡率高,易發(fā)生腹腔種植性轉移,對手術者手術技巧要求高,同時手術切口不利于后續(xù)觀察與研究。CT引導下經皮穿刺VX2瘤塊植入操作簡單,創(chuàng)傷小,成瘤率高,可重復性強,優(yōu)于開腹包埋法。VX2肝癌模型血供豐富,類似人類肝轉移癌模型,在肝癌介入治療研究中將得到越來越廣泛的應用。

    [1] Lee KH,Liapi E,Buijs M,et al.Percutaneous US-guided implantation of VX-2 carcinoma into rabbit liver:a comparison with open surgical method[J].J Surg Res, 2009, 155: 94-99.

    [2] 江雄鷹,羅榮光,黃金華,等.兔VX2肝癌模型建立與經兔股動脈微導管超選擇性肝左動脈插管技術的探討[J].介入放射學雜志,2011,20:214-217.

    [3] Watanabe D, Ueo H, Inoue H, et al.Antitumor effects of intraarterial infusion of tumor necrosis factor/lipiodol emulsion on hepatic tumor in rabbits[J].Oncology, 1995, 52: 76-81.

    [4] Swistel AJ, Bading JR, Raaf JH.Intraarterial versus intravenous adriamycin in the rabbit VX-2 tumor system [J].Cancer,1984,53:1397-1404.

    [5] 史東宏,曹建民,許 健,等.CT引導下兔VX2肝癌模型的制作及綜合評估[J].介入放射學雜志,2008,17:725-728.

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