PI—103對(duì)人黑色素瘤A375細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響及其機(jī)制研究

陸茂等

[摘要] 目的 觀察PI-103在體外對(duì)人黑色素瘤A375細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響，并探討可能的作用機(jī)制。 方法 應(yīng)用MTT法檢測(cè)不同濃度PI-103對(duì)A375細(xì)胞增殖的影響，Transwell小室實(shí)驗(yàn)檢測(cè)0.1、0.2 μmol/L PI-103對(duì)A375細(xì)胞遷移能力和侵襲能力的影響，Western Blot法測(cè)定細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-2、MMP-9的表達(dá)。 結(jié)果 0.1、0.2 μmol/L PI-103對(duì)A375細(xì)胞增殖的抑制作用不明顯（P > 0.05）；在濃度高于0.4 μmol/L時(shí)，PI-103能夠明顯抑制A375細(xì)胞的增殖（P < 0.05）。0.1 μmol/L PI-103作用后，遷移實(shí)驗(yàn)和運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)穿膜細(xì)胞數(shù)分別為（91.73±13.80）、（63.67±8.54），與對(duì)照組比較明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；0.2 μmol/L PI-103作用后，遷移實(shí)驗(yàn)和運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)穿膜細(xì)胞數(shù)分別為（64.07±9.22）、（34.80±7.89），與對(duì)照組比較明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。0.1、0.2 μmol/L PI-103作用后，A375細(xì)胞MMP-2、MMP-9蛋白表達(dá)明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。 結(jié)論 PI-103可通過(guò)下調(diào)MMP-2、MMP-9的表達(dá)抑制A375細(xì)胞遷移和侵襲，為其應(yīng)用于抗惡性黑素瘤轉(zhuǎn)移治療提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[關(guān)鍵詞] PI-103；黑色素瘤；遷移；侵襲

[中圖分類號(hào)] R739.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2014）09（a）-0014-04

[Abstract] Objective To investigate the effects of PI-103 on the migratory and invasive abilities of human melanoma A375 cells in vitro and its mechanism. Methods The effects of PI-103 with different concentration on the proliferation of A375 cells were detected by MTT assay. The effects of PI-103 at 0.1， 0.2 μmol/L concentration on the migratory and invasive abilities of A375 cells were detected by transwell chamber assay. The expressions of MMP-2 and MMP-9 in A375 cells were determined by Western Blot. Results The inhibition effects on the proliferation of A375 cells treated with PI-103 at 0.1， 0.2 μmol/L concentration were not significant （P > 0.05）. The proliferation of A375 cells treated with PI-103 at the concentration higher than 0.4 μmol/L was significantly inhibited （P < 0.05）. The numbers of transmembrane cells in the migration and invasion experiment treated with PI-103 at 0.1 μmol/L concentration were （91.73±13.80）， （63.67±8.54） respectively， which were significantly decreased compared with control group （P < 0.05）. The numbers of transmembrane cells in the migration and invasion experiment treated with PI-103 at 0.2 μmol/L concentration were （64.07±9.22）， （34.80±7.89） respectively， which were significantly decreased compared with control group （P < 0.05）. The expressions of MMP-2 and MMP-9 in A375 cells treated with PI-103 at 0.1， 0.2 μmol/L concentration were significantly decreased compared with control group （P < 0.05）. Conclusion PI-103 can inhibit the migration and invasion of A375 cells by down-regulation of the expressions of MMP-2 and MMP-9， which provide the experimental basis for the prevention of melanoma metastasis.

[Key words] PI-103； Melanoma； Migration； Invasion

惡性黑素瘤是一種起源于黑色素細(xì)胞的高度惡性腫瘤，易轉(zhuǎn)移是其死亡率高的主要原因。黑色素瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的異常激活密切相關(guān)，在有關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制劑中，篩選出高效、低毒的抗黑色素瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移藥物已成為其研究重要的發(fā)展趨勢(shì)。哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin，mTOR）是一種非典型的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，與其上游的磷脂酰肌醇3-激酶（phosphoinositide 3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（PKB，又稱Akt）構(gòu)成了PI3K/Akt/mTOR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。筆者前期及既往其他研究結(jié)果顯示，PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路與黑素細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[1-2]。PI-103是PI3K和mTOR的雙重抑制劑，已有研究報(bào)道，PI-103在較低濃度下就能導(dǎo)致黑色素瘤細(xì)胞周期阻滯，從而抑制其增殖并誘導(dǎo)凋亡[3]，但有關(guān)PI-103對(duì)黑色素瘤細(xì)胞遷移和侵襲的影響國(guó)內(nèi)外鮮見(jiàn)報(bào)道。本研究旨在觀察PI-103在體外對(duì)人黑色素瘤A375細(xì)胞遷移和侵襲能力的影響，并探討可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

PI-103（純度99.59%）購(gòu)自美國(guó)MCE公司；人黑色素瘤A375細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞生物研究所；RPMI1640培養(yǎng)液購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；四甲基偶氮唑鹽（MTT）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；胎牛血清（FBS）購(gòu)自杭州四季青生物工程材料有限公司；Millicell懸掛式Transwell小室（孔徑8 μm）購(gòu)自美國(guó)Millipore公司；Matrigel購(gòu)自美國(guó)BD公司；鼠抗人基質(zhì)金屬蛋白酶-2（matrix metalloproteinases-2，MMP-2）、MMP-9單抗、堿性磷酸酶標(biāo)記羊抗鼠IgG購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 將A375細(xì)胞置于37℃、5%CO2的孵箱中常規(guī)培養(yǎng)，培養(yǎng)液為含10%FBS的RPMI1640。每隔48 h換液1次，以1∶3的比例傳代。

1.2.2 MTT法檢測(cè)PI-103對(duì)A375細(xì)胞增殖的影響 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期A375細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度為1×105/mL，接種于48孔板，200 μL/孔。培養(yǎng)24 h后吸除培養(yǎng)液，每孔分別加入200 μL不同濃度的PI-103（0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 μmol/L），每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)空白對(duì)照組，對(duì)照組加入等量不含PI-103的培養(yǎng)液。24 h后加入20 μL MTT（5 mg/mL），37℃作用4 h后加150 μL DMSO，振蕩10 min，酶標(biāo)儀測(cè)490 nm處吸光度（OD）值，計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率。細(xì)胞增殖抑制率=（1-實(shí)驗(yàn)組OD/對(duì)照組OD）×100%。

1.2.3 Transwell遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PI-103對(duì)A375細(xì)胞遷移力的影響 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期A375細(xì)胞以1×105/mL細(xì)胞懸液接種于24孔板，24 h后加入不同濃度的PI-103（終濃度0.1、0.2 μmol/L），設(shè)空白對(duì)照組，對(duì)照組加入等量不含PI-103的培養(yǎng)液，48 h后收集細(xì)胞。各組細(xì)胞消化、離心后用無(wú)血清RPMI1640培養(yǎng)液重懸，調(diào)整細(xì)胞密度至1×106/mL。將Transwell小室置入24孔板，上室加入200 μL無(wú)血清RPMI1640培養(yǎng)液，37℃放置1 h，吸除小室內(nèi)培養(yǎng)液，上室加入200 μL各組細(xì)胞重懸液，下室加500 μL含10%FBS的RPMI1640培養(yǎng)液，37℃、5%CO2孵育24 h后取出小室，棉簽擦去濾膜上層細(xì)胞，PBS清洗濾膜，4%的多聚甲醛固定15 min，0.1%結(jié)晶紫染色15 min。400倍顯微鏡下隨機(jī)計(jì)數(shù)不重疊5個(gè)視野的穿膜細(xì)胞數(shù)，計(jì)算平均值。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。

1.2.4 Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)PI-103對(duì)A375細(xì)胞侵襲力的影響 4℃溶解Matrigel過(guò)夜，用預(yù)冷的無(wú)血清培養(yǎng)液以1∶8稀釋Matrigel，取50 μL均勻涂于Transwell小室上室的聚碳酸酯膜上，37℃放置30 min，使Matrigel聚合成凝膠，后續(xù)同遷移實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞接種密度為2×105/mL。

1.2.5 Western Blot法測(cè)定PI-103對(duì)A375細(xì)胞MMP-2、MMP-9表達(dá)的影響 同“1.2.3”項(xiàng)下操作收集細(xì)胞，加入細(xì)胞裂解液，離心提取蛋白質(zhì)定量，進(jìn)行SDS-PAGE電泳分離，電轉(zhuǎn)至PVDF膜上，5%的脫脂奶粉封閉，加入鼠抗人MMP-2、MMP-9單抗作一抗，4℃過(guò)夜，TBST洗膜，用堿性磷酸酶標(biāo)記羊抗鼠IgG作為二抗，37℃孵育2 h，TBST洗膜，加入ECL進(jìn)行曝光，洗片后用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行吸光度掃描，以GAPDH作為內(nèi)參，用各蛋白吸光度值/內(nèi)參吸光度值進(jìn)行比較。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路在多種惡性腫瘤中高度激活，調(diào)控腫瘤細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移等過(guò)程，已成為腫瘤治療的一個(gè)重要靶點(diǎn)[4]。有研究表明，單純阻斷PI3K/Akt通路，并不能有效抑制下游mTOR通路，因?yàn)閙TOR信號(hào)通路的激活除了來(lái)自PI3K/Akt途徑，還可來(lái)自其他信號(hào)通路，而單純抑制mTOR通路，卻可能通過(guò)負(fù)反饋活化PI3K激酶。所以，同時(shí)使用PI3K和mTOR的雙重抑制劑更能有效抑制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[5]。PI-103是人工合成的脂質(zhì)激酶家族中的一種小分子藥物，能同時(shí)抑制PI3K和mTOR，尤其是PI3Kα、mTORC1和mTORC2，而且PI-103有良好的藥物穩(wěn)定性，毒副作用小[6-7]。已有研究發(fā)現(xiàn)，PI-103可抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞[7]、乳腺癌細(xì)胞[8]、神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞[9]、肝星狀細(xì)胞細(xì)胞[10]、腎癌細(xì)胞[11]的增殖，還可抑制結(jié)直腸癌細(xì)胞[12]、神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞[13]的轉(zhuǎn)移，同時(shí)可增強(qiáng)順鉑[6]、厄洛替尼[14]等化療藥物抗腫瘤效果。

Transwell小室能夠較為理想地模擬和反映腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲能力，是檢測(cè)腫瘤細(xì)胞體外遷移力和侵襲力最經(jīng)典的實(shí)驗(yàn)方法。本實(shí)驗(yàn)旨在研究PI-103對(duì)A375細(xì)胞遷移和侵襲的影響，若出現(xiàn)細(xì)胞活力下降則影響結(jié)果的判斷，因此本研究選擇了PI-103對(duì)A375細(xì)胞活力影響小的濃度（低于0.4 μmol/L）來(lái)進(jìn)行Transwell體外遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)。結(jié)果顯示，經(jīng)0.1、0.2 μmol/L PI-103作用后穿過(guò)小室的A375細(xì)胞數(shù)量減少，提示PI-103可以降低A375細(xì)胞的遷移力和侵襲力。

腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲是一個(gè)多步驟、多階段的復(fù)雜過(guò)程，細(xì)胞基底膜及細(xì)胞外基質(zhì)的降解突破是其中重要的環(huán)節(jié)之一。MMPs是基底膜及細(xì)胞外基質(zhì)降解的主要蛋白水解酶，其中MMP-2、MMP-9是MMPs家族中的重要成員，能有效降解基底膜的主要成分Ⅳ型膠原和層粘連蛋白，其表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[15]。有研究表明，PI3K可通過(guò)活化Akt激活黑色素瘤細(xì)胞磷脂蛋白2，進(jìn)而促進(jìn)MMP-2的表達(dá)[16]。大量研究證實(shí)，黑色素瘤細(xì)胞MMP-2、MMP-9的表達(dá)水平與其侵襲力呈正相關(guān)，抑制MMP-2、MMP-9的表達(dá)能抑制黑素瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[17-18]。本研究顯示，PI-103在體外可抑制A375細(xì)胞MMP-2、MMP-9的表達(dá)，由此推測(cè)PI-103可能是通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性抑制黑色素瘤細(xì)胞PI3K/mTOR，阻斷Pl3K/Akt/mTOR信號(hào)通路，下調(diào)MMP-2、MMP-9的表達(dá)，進(jìn)而抑制其遷移和侵襲。

綜上所述，PI3K/mTOR雙重抑制劑PI-103在體外可抑制A375細(xì)胞遷移和侵襲，其機(jī)制可能與下調(diào)MMP-2、MMP-9的表達(dá)有關(guān)，這顯示了它在惡性黑素瘤治療中的潛在應(yīng)用價(jià)值，為其應(yīng)用于抗惡性黑素瘤轉(zhuǎn)移治療提供了初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 陸茂，葉俊儒，樊元春，等.磷酸化mTOR在惡性黑素瘤中的表達(dá)及與CyclinD1的關(guān)系[J].四川醫(yī)學(xué)，2010，31（2）：163-165.

[2] Uzdensky AB，Demyanenko SV，Bibov MY. Signal transduction in human cutaneous melanoma and target drugs [J]. Curr Cancer Drug Targets，2013，13（8）：843-866.

[3] Lopez-Fauqued M，Gil R，Grueso J，et al. The dual PI3K/mTOR inhibitor PI-103 promotes immunosuppression， in vivo tumor growth and increases survival of sorafenib-treated melanoma cells [J]. Int J Cancer，2010，126（7）：1549-1561.

[4] Wu P，Hu YZ. PI3K/Akt/mTOR pathway inhibitors in cancer： a perspective on clinical progress [J]. Curr Med Chem，2010，17（35）：4326-4321.

[5] Mazzoletti M，Bortolin F，Brunelli L，et al. Combination of PI3K/mTOR inhibitors： antitumor activity and molecular correlates [J]. Cancer Res，2011，71（13）：4573-4584.

[6] 劉俊，蔡云朗，任慕蘭，等.PI-103對(duì)人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3/DDP順鉑化療效果的影響[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2013，32（5）：574-579.

[7] Saturno G，Valenti M，De Haven Brandon A，et al. Combining trail with PI3 kinase or HSP90 inhibitors enhances apoptosis in colorectal cancer cells via suppression of survival signaling [J]. Oncotarget，2013，4（8）：1185-1198.

[8] Yi YW，Hong W，Kang HJ，et al. Inhibition of the PI3K/AKT pathway potentiates cytotoxicity of EGFR kinase inhibitors in triple-negative breast cancer cells [J]. J Cell Mol Med，2013，17（5）：648-656.

[9] Santo EE，Stroeken P，Sluis PV，et al. FOXO3a is a major target of inactivation by PI3K/AKT signaling in aggressive neuroblastoma [J]. Cancer Res，2013，73（7）：2189-2198.

[10] 李娜，祝聰聰，肖永紅，等.PI3K抑制劑對(duì)四氯化碳刺激的肝星狀細(xì)胞增殖和Ⅰ型膠原表達(dá)的影響[J].西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2013，34（2）：164-167.

[11] 邢建武，于碩鵬.抑制劑PI-103對(duì)786-O細(xì)胞株P(guān)I3K/Akt/mTOR信號(hào)通路的影響[J].河南醫(yī)學(xué)研究，2013，22（5）：649-651.

[12] Hsu RY，Chan CH，Spicer JD，et al. LPS-Induced TLR4 Signaling in Human Colorectal Cancer Cells Increases {beta}1 Integrin-Mediated Cell Adhesion and Liver Metastasis [J]. Cancer Res，2011，71（5）：1989-1998.

[13] Bagci-Onder T，Wakimoto H，Anderegg M，et al. A dual PI3K/mTOR inhibitor， PI-103， cooperates with stem cell-delivered TRAIL in experimental glioma models [J]. Cancer Res，2011，71（1）：154-163.

[14] Toulany M，Minjgee M，Saki M，et al. ERK2-dependent reactivation of Akt mediates the limited response of tumor cells with constitutive K-RAS activity to PI3K inhibition [J]. Cancer Biol Ther，2014，15（3）：317-328.

[15] Zhang XX，F(xiàn)u Z，Zhang Z，et al. Miemeystin-LR promotes melanoma cell invasion and enhances matrix metallopmteinase-2/-9 expression mediated by NF-KB activation [J]. Environ Sci Technol，2012，46（20）：11319-11326.

[16] Sonoda Y，Warita M，Suzuki T，et al. Proteolipid protein 2 is associated with melanoma metastasis [J]. Oncol Rep，2010，23（2）：371-376.

[17] Shi H，Liu L，Liu L，et al. β-Elemene inhibits the metastasis of B16F10 melanoma cells by downregulation of the expression of uPA，uPAR，MMP-2，and MMP-9 [J]. Mela noma Res，2014，24（2）：99-107.

[18] Rey MC，Bonamigo RR，Cartell A，et al. MMP-2 and TIMP-2 in cutaneous melanoma： association with prognostic factors and description in cutaneous metastases [J]. Am J Dermatopathol，2011，33（4）：413-414.

（收稿日期：2014-05-23 本文編輯：程 銘）

綜上所述，PI3K/mTOR雙重抑制劑PI-103在體外可抑制A375細(xì)胞遷移和侵襲，其機(jī)制可能與下調(diào)MMP-2、MMP-9的表達(dá)有關(guān)，這顯示了它在惡性黑素瘤治療中的潛在應(yīng)用價(jià)值，為其應(yīng)用于抗惡性黑素瘤轉(zhuǎn)移治療提供了初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 陸茂，葉俊儒，樊元春，等.磷酸化mTOR在惡性黑素瘤中的表達(dá)及與CyclinD1的關(guān)系[J].四川醫(yī)學(xué)，2010，31（2）：163-165.

[2] Uzdensky AB，Demyanenko SV，Bibov MY. Signal transduction in human cutaneous melanoma and target drugs [J]. Curr Cancer Drug Targets，2013，13（8）：843-866.

[3] Lopez-Fauqued M，Gil R，Grueso J，et al. The dual PI3K/mTOR inhibitor PI-103 promotes immunosuppression， in vivo tumor growth and increases survival of sorafenib-treated melanoma cells [J]. Int J Cancer，2010，126（7）：1549-1561.

[4] Wu P，Hu YZ. PI3K/Akt/mTOR pathway inhibitors in cancer： a perspective on clinical progress [J]. Curr Med Chem，2010，17（35）：4326-4321.

[5] Mazzoletti M，Bortolin F，Brunelli L，et al. Combination of PI3K/mTOR inhibitors： antitumor activity and molecular correlates [J]. Cancer Res，2011，71（13）：4573-4584.

[6] 劉俊，蔡云朗，任慕蘭，等.PI-103對(duì)人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3/DDP順鉑化療效果的影響[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2013，32（5）：574-579.

[7] Saturno G，Valenti M，De Haven Brandon A，et al. Combining trail with PI3 kinase or HSP90 inhibitors enhances apoptosis in colorectal cancer cells via suppression of survival signaling [J]. Oncotarget，2013，4（8）：1185-1198.

[8] Yi YW，Hong W，Kang HJ，et al. Inhibition of the PI3K/AKT pathway potentiates cytotoxicity of EGFR kinase inhibitors in triple-negative breast cancer cells [J]. J Cell Mol Med，2013，17（5）：648-656.

[9] Santo EE，Stroeken P，Sluis PV，et al. FOXO3a is a major target of inactivation by PI3K/AKT signaling in aggressive neuroblastoma [J]. Cancer Res，2013，73（7）：2189-2198.

[10] 李娜，祝聰聰，肖永紅，等.PI3K抑制劑對(duì)四氯化碳刺激的肝星狀細(xì)胞增殖和Ⅰ型膠原表達(dá)的影響[J].西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2013，34（2）：164-167.

[11] 邢建武，于碩鵬.抑制劑PI-103對(duì)786-O細(xì)胞株P(guān)I3K/Akt/mTOR信號(hào)通路的影響[J].河南醫(yī)學(xué)研究，2013，22（5）：649-651.

[12] Hsu RY，Chan CH，Spicer JD，et al. LPS-Induced TLR4 Signaling in Human Colorectal Cancer Cells Increases {beta}1 Integrin-Mediated Cell Adhesion and Liver Metastasis [J]. Cancer Res，2011，71（5）：1989-1998.

[13] Bagci-Onder T，Wakimoto H，Anderegg M，et al. A dual PI3K/mTOR inhibitor， PI-103， cooperates with stem cell-delivered TRAIL in experimental glioma models [J]. Cancer Res，2011，71（1）：154-163.

[14] Toulany M，Minjgee M，Saki M，et al. ERK2-dependent reactivation of Akt mediates the limited response of tumor cells with constitutive K-RAS activity to PI3K inhibition [J]. Cancer Biol Ther，2014，15（3）：317-328.

[15] Zhang XX，F(xiàn)u Z，Zhang Z，et al. Miemeystin-LR promotes melanoma cell invasion and enhances matrix metallopmteinase-2/-9 expression mediated by NF-KB activation [J]. Environ Sci Technol，2012，46（20）：11319-11326.

[16] Sonoda Y，Warita M，Suzuki T，et al. Proteolipid protein 2 is associated with melanoma metastasis [J]. Oncol Rep，2010，23（2）：371-376.

[17] Shi H，Liu L，Liu L，et al. β-Elemene inhibits the metastasis of B16F10 melanoma cells by downregulation of the expression of uPA，uPAR，MMP-2，and MMP-9 [J]. Mela noma Res，2014，24（2）：99-107.

[18] Rey MC，Bonamigo RR，Cartell A，et al. MMP-2 and TIMP-2 in cutaneous melanoma： association with prognostic factors and description in cutaneous metastases [J]. Am J Dermatopathol，2011，33（4）：413-414.

（收稿日期：2014-05-23 本文編輯：程 銘）

綜上所述，PI3K/mTOR雙重抑制劑PI-103在體外可抑制A375細(xì)胞遷移和侵襲，其機(jī)制可能與下調(diào)MMP-2、MMP-9的表達(dá)有關(guān)，這顯示了它在惡性黑素瘤治療中的潛在應(yīng)用價(jià)值，為其應(yīng)用于抗惡性黑素瘤轉(zhuǎn)移治療提供了初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 陸茂，葉俊儒，樊元春，等.磷酸化mTOR在惡性黑素瘤中的表達(dá)及與CyclinD1的關(guān)系[J].四川醫(yī)學(xué)，2010，31（2）：163-165.

[2] Uzdensky AB，Demyanenko SV，Bibov MY. Signal transduction in human cutaneous melanoma and target drugs [J]. Curr Cancer Drug Targets，2013，13（8）：843-866.

[3] Lopez-Fauqued M，Gil R，Grueso J，et al. The dual PI3K/mTOR inhibitor PI-103 promotes immunosuppression， in vivo tumor growth and increases survival of sorafenib-treated melanoma cells [J]. Int J Cancer，2010，126（7）：1549-1561.

[4] Wu P，Hu YZ. PI3K/Akt/mTOR pathway inhibitors in cancer： a perspective on clinical progress [J]. Curr Med Chem，2010，17（35）：4326-4321.

[5] Mazzoletti M，Bortolin F，Brunelli L，et al. Combination of PI3K/mTOR inhibitors： antitumor activity and molecular correlates [J]. Cancer Res，2011，71（13）：4573-4584.

[6] 劉俊，蔡云朗，任慕蘭，等.PI-103對(duì)人卵巢癌細(xì)胞株SKOV3/DDP順鉑化療效果的影響[J].東南大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2013，32（5）：574-579.

[7] Saturno G，Valenti M，De Haven Brandon A，et al. Combining trail with PI3 kinase or HSP90 inhibitors enhances apoptosis in colorectal cancer cells via suppression of survival signaling [J]. Oncotarget，2013，4（8）：1185-1198.

[8] Yi YW，Hong W，Kang HJ，et al. Inhibition of the PI3K/AKT pathway potentiates cytotoxicity of EGFR kinase inhibitors in triple-negative breast cancer cells [J]. J Cell Mol Med，2013，17（5）：648-656.

[9] Santo EE，Stroeken P，Sluis PV，et al. FOXO3a is a major target of inactivation by PI3K/AKT signaling in aggressive neuroblastoma [J]. Cancer Res，2013，73（7）：2189-2198.

[10] 李娜，祝聰聰，肖永紅，等.PI3K抑制劑對(duì)四氯化碳刺激的肝星狀細(xì)胞增殖和Ⅰ型膠原表達(dá)的影響[J].西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2013，34（2）：164-167.

[11] 邢建武，于碩鵬.抑制劑PI-103對(duì)786-O細(xì)胞株P(guān)I3K/Akt/mTOR信號(hào)通路的影響[J].河南醫(yī)學(xué)研究，2013，22（5）：649-651.

[12] Hsu RY，Chan CH，Spicer JD，et al. LPS-Induced TLR4 Signaling in Human Colorectal Cancer Cells Increases {beta}1 Integrin-Mediated Cell Adhesion and Liver Metastasis [J]. Cancer Res，2011，71（5）：1989-1998.

[13] Bagci-Onder T，Wakimoto H，Anderegg M，et al. A dual PI3K/mTOR inhibitor， PI-103， cooperates with stem cell-delivered TRAIL in experimental glioma models [J]. Cancer Res，2011，71（1）：154-163.

[14] Toulany M，Minjgee M，Saki M，et al. ERK2-dependent reactivation of Akt mediates the limited response of tumor cells with constitutive K-RAS activity to PI3K inhibition [J]. Cancer Biol Ther，2014，15（3）：317-328.

[15] Zhang XX，F(xiàn)u Z，Zhang Z，et al. Miemeystin-LR promotes melanoma cell invasion and enhances matrix metallopmteinase-2/-9 expression mediated by NF-KB activation [J]. Environ Sci Technol，2012，46（20）：11319-11326.

[16] Sonoda Y，Warita M，Suzuki T，et al. Proteolipid protein 2 is associated with melanoma metastasis [J]. Oncol Rep，2010，23（2）：371-376.

[17] Shi H，Liu L，Liu L，et al. β-Elemene inhibits the metastasis of B16F10 melanoma cells by downregulation of the expression of uPA，uPAR，MMP-2，and MMP-9 [J]. Mela noma Res，2014，24（2）：99-107.

[18] Rey MC，Bonamigo RR，Cartell A，et al. MMP-2 and TIMP-2 in cutaneous melanoma： association with prognostic factors and description in cutaneous metastases [J]. Am J Dermatopathol，2011，33（4）：413-414.

（收稿日期：2014-05-23 本文編輯：程 銘）