樟樹(shù)子水提液對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用研究

周細(xì)根，梁生林，胡存華，顏峰光，李慶耀，羅 婷，占豐春

樟樹(shù)子水提液對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用研究

*周細(xì)根，梁生林，胡存華，顏峰光，李慶耀，羅 婷，占豐春

（井岡山大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江西，吉安 343009）

探究樟樹(shù)子水提液對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用。采用熱板致痛法，觀(guān)察高、中、低劑量樟樹(shù)子水提液的鎮(zhèn)痛作用。樟樹(shù)子高劑量組（1 g生藥/mL）在給藥后30、60 min與生理鹽水對(duì)照組痛閾值有顯著性差異（< 0.05），而在90 min與生理鹽水對(duì)照組痛閾值無(wú)顯著性差異（> 0.05）；中劑量組（0.75 g生藥/mL）和低劑量組（0.5 g生藥/mL）在給藥后30、60 、90 min與生理鹽水對(duì)照組痛閾值無(wú)顯著差異（> 0.05）。樟樹(shù)子高劑量（1 g生藥/mL）對(duì)小鼠有鎮(zhèn)痛作用。

樟樹(shù)子；水提液；熱板法；鎮(zhèn)痛作用

樟樹(shù)(Camphor)[1]是中國(guó)一種常見(jiàn)的經(jīng)濟(jì)樹(shù)種，其來(lái)源廣泛，性溫，味辛；能通竅辟穢、溫中止痛、利濕殺蟲(chóng)；用于寒濕吐瀉、胃腹疼痛；外用治疥、癬、齲齒作痛。國(guó)外的研究有抗炎[2]、抑菌[3]的功效，而國(guó)內(nèi)主要側(cè)重于抑菌和抗癌的功效的研究。樟樹(shù)作為一種典型的亞熱帶樹(shù)種，廣泛分布于中國(guó)的中南地區(qū)，是森林生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分，通過(guò)光合作用吸收空氣中的二氧化碳并釋放氧氣，把大氣中的二氧化碳以生物能量的形式固定貯存下來(lái)，對(duì)生態(tài)和水文環(huán)境、局部小氣候有著重要影響，同時(shí)樟樹(shù)也是優(yōu)良的城市綠化樹(shù)種。目前樟樹(shù)子除極少量被采摘入藥外，大部分自生自滅，沒(méi)有被很好的利用[4]。樟樹(shù)富含芳香油、碳含量高及數(shù)量多，隨著世界化石能源逐漸枯竭，環(huán)境危機(jī)逐步加深，可再生能源受到越來(lái)越多國(guó)家的青睞，樟樹(shù)作為可再生能源具有極其重要的研究?jī)r(jià)值和應(yīng)用前景[5]。李林松[6]等采用GC/MS/DS聯(lián)用技術(shù)，對(duì)樟樹(shù)果實(shí)的揮發(fā)油成分進(jìn)行了分析研究，分離鑒定了43種化學(xué)成分，主要成分是：樟腦(26.11%)，1，8-桉葉素(19.91%)，芳樟醇(9.15%)，α一松油醇(7.22%)和檸檬烯(5.28%)，國(guó)內(nèi)有許多文章是關(guān)于樟樹(shù)揮發(fā)油作用的研究，然而對(duì)樟樹(shù)子水提液的藥理作用研究甚少。為了探究樟樹(shù)更多的藥理作用，本實(shí)驗(yàn)對(duì)樟樹(shù)子水提液的鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行研究。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康雌性小白鼠50只(由井岡山大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室提供)，體質(zhì)量18~22 g。

1.2 藥品與試劑

新鮮樟樹(shù)子（采自井岡山大學(xué)校園內(nèi)的樟樹(shù)的成熟種子），0.25％哌替啶溶液、生理鹽水。

1.3 主要儀器

HSS-1B型恒溫浴槽（成都儀器廠(chǎng)），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（成都儀器廠(chǎng)），電磁爐一臺(tái)，索式回流提取器。

2 方法

2.1 藥物配制

2.1.1 樟樹(shù)子水提液的制備

將新鮮樟樹(shù)子放在恒溫干燥箱60 ℃、24 h烘干，準(zhǔn)確稱(chēng)取干燥的樟樹(shù)子40 g放入索式回流提取器中并加入蒸餾水300 mL，用電磁爐加熱3~4 h，放冷后過(guò)濾，濾液存留，濾渣中加入蒸餾水100 mL，繼續(xù)用電磁爐加熱2~3 h，放冷后過(guò)濾，合并兩次濾液80℃水浴真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)至40 mL，所得提取液濃度為1 g生藥/mL（高劑量組），分別稀釋得到0.75 g生藥/mL（中劑量組和0.5 g生藥/mL（低劑量組）[7-8]。

2.2 樟樹(shù)子水提液對(duì)小鼠熱板法痛閾值的影響

2.2.1篩選實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和正常痛閾值測(cè)定

將HSS-1B型恒溫浴槽中的水槽蓋取掉，往水槽中加水至以放入鎮(zhèn)痛槽后水不溢出為準(zhǔn)；鎮(zhèn)痛槽放入恒溫浴槽后用支承板上左右兩側(cè)的螺套和壓緊板壓住鎮(zhèn)痛槽；將水槽的出水及回水口用一根橡膠管連通；開(kāi)啟電源開(kāi)關(guān)；在電源接通的狀態(tài)下，將設(shè)定鈕子開(kāi)關(guān)置于“設(shè)定”后，調(diào)節(jié)溫度調(diào)節(jié)旋鈕，直到顯示器顯示出所需要的55 ℃，設(shè)定完成后將設(shè)定鈕子開(kāi)關(guān)置于“液溫”，儀器顯示溫度逐漸達(dá)到設(shè)定值，直至穩(wěn)定顯示槽內(nèi)實(shí)際液溫(55 ± 0.1) ℃。將小鼠置于鎮(zhèn)痛槽內(nèi)，密切觀(guān)察小鼠的活動(dòng)，以舔后爪出現(xiàn)時(shí)間作為痛閾的指標(biāo)，當(dāng)出現(xiàn)舔后爪時(shí)，立即記錄時(shí)間(即痛閾值)，然后取出小鼠，用此法篩選出痛閾值在10~30 s的小鼠50只供實(shí)驗(yàn)用[9-10]。

2.2.2動(dòng)物分組

將篩選好的痛閾值在10~30 s的雌性小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，即陰性對(duì)照組（生理鹽水組），陽(yáng)性對(duì)照組（0.25%哌替啶組），實(shí)驗(yàn)組（高、中、低劑量樟樹(shù)子水提取液組）。

2.2.3 給藥

每只小鼠灌胃給藥(0.1 mL/10 g)，連續(xù)灌胃5d，每天1次。末次給藥后30、60、90 min分別測(cè)小鼠痛閾值。如60 s仍無(wú)反應(yīng)，將小鼠取出，以免燙傷，其痛閾值以60 s計(jì)算。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

3 結(jié)果

與生理鹽水組比較，給藥前各組痛閾值比較差異無(wú)顯著性(> 0.05)，給藥后哌替啶組比較差異有顯著性（< 0.05），給藥后30、60 min高劑量組比較有顯著性差異（< 0.05），給藥后90 min高劑量組和給藥后30、60、90 min中劑量組及低劑量組比較無(wú)顯著性差異 (> 0.05)。

與自身給藥前比較，生理鹽水組給藥后30、60 、90 min無(wú)顯著性差異 (> 0.05)，哌替啶組給藥后30、60、90 min和高劑量組給藥后30、60 min差異有顯著性(< 0.05)，中劑量組和低劑量組給藥后30、60、90 min無(wú)顯著性差異 (> 0.05)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 樟樹(shù)子水提液對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用 (, n=10)

注：與生理鹽水對(duì)照組比較，a< 0.05；與自身給藥前痛閾值比較，b< 0.05

4 討論

周富成等[11]采用熱板法、扭體法、濃氨水致咳法，磷酸組胺致喘法研究沉香與樟樹(shù)莖醇提物的鎮(zhèn)痛、止咳與平喘作用，研究結(jié)果表明，樟樹(shù)莖與沉香的醇提物的鎮(zhèn)痛、止咳和平喘作用相似。樟樹(shù)是一種常綠喬木，樟樹(shù)莖和樟樹(shù)葉的采收和利用都會(huì)對(duì)樟樹(shù)造成損害，而樟樹(shù)子成熟后會(huì)自行脫落，所以成熟樟樹(shù)子的采收和利用不會(huì)對(duì)樟樹(shù)造成任何損害，對(duì)樟樹(shù)這種中國(guó)南特有的經(jīng)濟(jì)樹(shù)種的保護(hù)有重要意義。目前樟樹(shù)子除極少量被采摘入藥外，大部分自生自滅，沒(méi)有被很好的利用。樟樹(shù)在我國(guó)南方種植廣泛，會(huì)產(chǎn)生大量的樟樹(shù)子，因此企待樟樹(shù)子的應(yīng)用開(kāi)發(fā)應(yīng)該深入。目前的研究主要集中在樟樹(shù)子油、樟樹(shù)子殼色素的提取方法和應(yīng)用、主要成分的分析和結(jié)構(gòu)研究。作為藥物或者食品添加物,樟樹(shù)子蛋白都具有一定的研究意義[12]。

為探討樟樹(shù)子是否具有鎮(zhèn)痛作用，本實(shí)驗(yàn)采用熱板法致痛模型對(duì)樟樹(shù)子水提液進(jìn)行了鎮(zhèn)痛作用的初步研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，給藥后30、60 min高劑量(1 g/ mL)樟樹(shù)子提高小鼠的痛閾值，與生理鹽水對(duì)照組比較和自身給藥前比較差異有顯著性(< 0.05)，給藥后90 min高劑量樟樹(shù)子提高小鼠的痛閾值與生理鹽水對(duì)照組和自身給藥前比較差異無(wú)顯著性，中劑量組給藥后提高小鼠的痛閾值與生理鹽水對(duì)照組和自身給藥前比較差異無(wú)顯著性（> 0.05），低劑量組沒(méi)有提高小鼠痛閾值，0.25 %哌替啶陽(yáng)性對(duì)照組給藥后30、60、90 min均提高小鼠的痛閾值與生理鹽水對(duì)照組和給藥前比較差異有顯著性(< 0.05)，而且高劑量樟樹(shù)子組給藥后60 min提高小鼠的痛閾值達(dá)最大值和0.25 %哌替啶陽(yáng)性對(duì)照組給藥后60 min提高小鼠的痛閾值的水平相當(dāng)，表明樟樹(shù)子只有在劑量較大時(shí)才具有一定的鎮(zhèn)痛作用，鎮(zhèn)痛作用在給藥后60 min達(dá)到最大強(qiáng)度，給藥后90 min鎮(zhèn)痛作用消失，其鎮(zhèn)痛作用的有效成份及作用機(jī)制有待于進(jìn)步研究。

本實(shí)驗(yàn)采用熱板法研究樟樹(shù)子對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用，以小鼠出現(xiàn)舔后爪的時(shí)間作為痛閾值的觀(guān)察指標(biāo)，更加客觀(guān)具體，容易判斷。研究藥物鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)方法也有化學(xué)致痛法（如用醋酸給小鼠腹腔注射產(chǎn)生疼痛），以小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時(shí)間作為痛閾值的觀(guān)察指標(biāo)，熱板法研究的目標(biāo)是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠的軀體疼痛，而扭體法研究的目標(biāo)是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠的內(nèi)臟疼痛，兩種疼痛的傳導(dǎo)神經(jīng)不一樣，兩種疼痛的性質(zhì)和特點(diǎn)也不同，本實(shí)驗(yàn)只采用了熱板法來(lái)觀(guān)察樟樹(shù)子水提液對(duì)小鼠的鎮(zhèn)痛作用，樟樹(shù)子水提液對(duì)小鼠的內(nèi)臟痛有沒(méi)有鎮(zhèn)痛效果有待于進(jìn)一步的藥理研究。

[1] 肖姍美,羅小會(huì),楊曉東.樟樹(shù)葉揮發(fā)油B-環(huán)糊精包合物的制備研究[J].光譜實(shí)驗(yàn)室,2008,25(4):735-737.

[2] Li H, Huang L, Zhou A, et al. Study on antiinflammatory effect of different chemotype of Cinnamomum camphora on rat arthritis model induced by Freund's adjuvant[J]. China journal of Chinese Materia Medica, 2009, 34(24): 3251-3254.

[3] Yeh R Y, Shiu Y L, Shei S C, et al. Evaluation of the antibacterial activity of leaf and twig extracts of stout camphor tree, Cinnamomum kanehirae, and the effects on im munity and disease resistance of white shrimp, Litopenaeus vannamei [J]. Fish & shellfish immunology, 2009, 27(1): 26-32.

[4] 張賜成,張猛.樟樹(shù)光合作用“午休”現(xiàn)象初步探討[J].科技世界,2014,4(4):125-126．

[5] 蔡建軍,王清成,劉濤,等. 單元體電阻爐樟樹(shù)樹(shù)枝、樹(shù)葉與稻殼對(duì)比燃燒及特性研究[J].工業(yè)加熱,2014,43(1): 17-19．

[6] 李林松,羅永明．井岡山地區(qū)樟樹(shù)果揮發(fā)性成分的分析[J].江西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2005,27(3):36-37．

[7] 周兵,閆小紅,肖宜安,等. 播種深度對(duì)入侵植物三葉鬼針草種子出苗和幼苗生長(zhǎng)的影響[J].井岡山大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2012, 33(6):103-108.

[8] 謝春香,張忠鎮(zhèn),彭向永,等. 30種植物提取物對(duì)大腸桿菌和枯草芽孢桿菌抑制作用的研究[J]. 井岡山大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版,2011,32(5):62-66.

[9] 王衛(wèi)華,董曉輝,劉衛(wèi)東,等. 熱板法觀(guān)察度冷丁與羅通定的鎮(zhèn)痛作用[J].荷澤醫(yī)學(xué)專(zhuān)科學(xué)校學(xué)報(bào),2011,33(1): 23-24.

[10] 李京才,鐘成. 柘木鎮(zhèn)痛消炎作用實(shí)驗(yàn)研究[J].河北中醫(yī),2012,33(5):109-112.

[11] 周富強(qiáng),田索英,潘建龍,等. 樟樹(shù)莖與沉香醇提物的藥理作用對(duì)比研究[J].中醫(yī)學(xué)報(bào),2013,28(12):1840-1850.

[12] 李衛(wèi)東. 樟樹(shù)籽中生物活性物質(zhì)的研究進(jìn)展[J].武夷學(xué)院學(xué)報(bào),2012,31(2):40-43.

ANALGESIC EFFECTS OF CAMPHOR SEED AQUEOUS EXTRACT ON MICE

*ZHOU Xi-gen, LIANG Sheng-lin, HU Chunhua, YAN Feng-gang, LI Qing-yao, LUO Ting, ZHAN Feng-chun

(School of Medicine, Jinggangshan University, Ji′an, Jiangxi 343009, China)

: To observe the analgesic effects of camphor seed aqueous extract on mice.: Using hot plate method to observe the analgesic effects of camphor aqueous extract of different dosages.: The pain threshold values of the treatment of high dosage (1 g crude drug / mL) are significantly different with that of the normal saline control treatment at 30 minutes, 60 minutes after dosing (< 0.05), but not at 90 minutes which is the same as the treatments of middle and low dosage at 30 minutes, 60 minutes and 90 minutes after dosing (> 0.05).: Camphor aqueous extract of high dosage has analgesic effects on mice.

camphor seed; aqueous extract; hot plate method; analgesic effect

R965.2

A

10.3969/j.issn.1674-8085.2014.04.021

1674-8085(2014)04-0096-03

2014-04-09；

2014-05-19

*周細(xì)根(1972-)，男，江西吉水人，副教授，碩士，主要從事藥理學(xué)教學(xué)與科研(E-mail:xgzhou1972@163.com)；

梁生林(1962-)，男，江西吉安縣人，教授，主要從事藥理學(xué)教學(xué)與科研(E-mail:slliang1962@163.com)；

胡存華(1972-)，女，江西萬(wàn)安人，副教授，碩士，主要從事藥理學(xué)教學(xué)與科研(E-mail:Huchunhau@126.com)；

顏峰光(1970-)，女，江西吉安人，實(shí)驗(yàn)師，主要從事藥理教學(xué)與科研(E-mail:Yanfengguang70@163.com)；

李慶耀(1967-)，男，江西吉安縣人，講師，碩士，主要從事藥理學(xué)教學(xué)與教研(E-mail:Liqingyao1967@163.com)；

羅 婷(1982-)，女，江西吉安人，講師，碩士，主要從事藥理學(xué)教學(xué)與科研(E-mail:Luoting82@163.com)；

占豐春(1990-)，男，江西永豐人，井岡山大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)專(zhuān)業(yè)2009級(jí)本科生(E-mail:zhenfch1990@qq.com).