用于病毒研究的人源化小鼠研究進展

喬卿華，韓佩君 綜述；汪愛勤，尹文 審校

第四軍醫(yī)大學(xué) 基礎(chǔ)部微生物學(xué)教研室，陜西 西安 710032

人源化小鼠模型是指帶有功能性的人類基因、細胞或組織的小鼠模型。這種模型通常被用作人類疾病體內(nèi)（in vivo）研究的活體替代模型。人源化小鼠模型的應(yīng)用很廣泛，在艾滋病、癌癥、傳染病、人類退化性疾病、血液病等研究領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用。病原體感染人源化小鼠模型后，可以在小鼠體內(nèi)擴散到不同器官系統(tǒng)，并在細胞和整體水平引起相應(yīng)的反應(yīng)，使我們能夠研究對應(yīng)的人類免疫反應(yīng)和相關(guān)免疫病理機制[1-3]。過去的25年里，在創(chuàng)建和開發(fā)用于傳染性疾病研究的人源化小鼠領(lǐng)域已經(jīng)取得了很大進展[1-5]。人源化小鼠已被用于人類病原體如人免疫缺陷病毒（HIV）、Epstein-Barr病毒（EBV）、丙型肝炎病毒（HCV）和登革病毒（dengue virus，DENV）等的研究。我們介紹幾種有代表性的人源化小鼠模型及其在病毒研究中的應(yīng)用。

1 人源化小鼠模型概況

各種人體細胞和組織移植到不同品系的免疫缺陷小鼠體內(nèi)創(chuàng)建出不同類型的人源化小鼠模型，它們有各自的優(yōu)缺點，根據(jù)實驗需要選擇不同的模型。新型人源化小鼠模型與以往模型的一個主要的進步是它們能夠產(chǎn)生初次免疫應(yīng)答。表1總結(jié)描述了這些模型的特點和異同。

1.1 hu-PBL小鼠

hu-PBL（human peripheral blood lymphocytes）小鼠早期由人成熟外周單個核細胞經(jīng)腹腔注射入重度聯(lián)合免疫缺陷（severe combined immunodeficien?cy，SCID）小鼠構(gòu)建而成[4]。目前該小鼠模型常采用NSG（NOD SCID IL-2R γc-/-）或 RG（BALB/c Rag2-/-IL-2R γc-/-）小鼠，移植效果更好。人體免疫細胞在移植后可存活數(shù)個星期，并且能在一定程度上發(fā)揮效應(yīng)。它們可以被嗜血細胞病毒如HIV-1等有效感染。該小鼠模型受抗原刺激后人類記憶性B細胞仍能產(chǎn)生抗體，然而因不能重啟多向造血功能無法產(chǎn)生初次免疫應(yīng)答。另外，T細胞的注入可產(chǎn)生移植物抗宿主?。╣raft versus host dis?ease，GVHD），但適合研究異種移植的GVHD[6]。

1.2 hu-HSC小鼠

hu-HSC小鼠是通過不同路徑將造血干細胞（hematopoietic stem cells，HSC）移植入不同的免疫缺陷小鼠體內(nèi)構(gòu)建而成。多年來，hu-HSC小鼠模型已得到極大發(fā)展。目前常用的hu-HSC小鼠有2種，早期模型主要通過靜脈或股動脈注射方式將CD34+造血祖細胞植入合適的成熟NOD-SCID小鼠，可重建淋巴細胞增殖，但T細胞發(fā)育不良；新模型采用NSG、RG 或 NOG（NOD/Shi-SCID IL-2R γc-/-）小鼠，可使人體細胞更好地定植，能夠產(chǎn)生全系T細胞、B細胞、巨噬細胞、NK細胞和樹突狀細胞[2,6]。CD34+HSC可來源于臍血、骨髓、胎肝或經(jīng)外周血誘導(dǎo)，其中胎肝來源的HSC定植效率更高，持續(xù)時間更長，選用出生3 d的新生小鼠比成年小鼠移植效果更好。

表1 不同類型人源化小鼠模型比較

1.3 SCID-hu小鼠

SCID-hu小鼠是通過外科手術(shù)在SCID小鼠腎包膜下聯(lián)合植入人胚胎胸腺和肝臟（包含造血干細胞）組織片段，從而構(gòu)建具有人類胸腺（胸腺/肝臟樣細胞團）功能的小鼠[7]。這些有活性的胸腺組織可以產(chǎn)生人胸腺細胞和初始T細胞，成熟T細胞局限于胸腺/肝臟樣細胞團周圍使外周T細胞數(shù)量減少。該模型因免疫細胞缺陷而無法產(chǎn)生人類免疫反應(yīng)，但有助于研究HIV和人嗜T細胞病毒（HTLV）等病毒的關(guān)鍵發(fā)病機理，并為創(chuàng)建新的和持續(xù)改進現(xiàn)有的人源化小鼠模型奠定了基礎(chǔ)[5]。SCID-hu小鼠的缺點，一是需要外科手術(shù)，操作難度大，不易獲得；二是植入胚胎組織后，要經(jīng)過數(shù)月時間才能檢測到嵌合體的形成；三是人的胚胎組織獲取較困難，應(yīng)用中有倫理道德阻礙。

1.4 BLT小鼠

BLT（bone marrow-liver-thymus）小鼠是在輻照過的免疫缺陷小鼠腎包膜下聯(lián)合植入人類胎肝和胸腺組織，同時靜脈注射相同胎肝來源的造血干細胞構(gòu)建而成。早期BLT小鼠用NOD-SCID小鼠構(gòu)建，目前多采用NSG、NOG或RG小鼠[8]。BLT小鼠與SCID-hu小鼠模型的主要區(qū)別在于相同胎肝來源的造血干細胞的額外重建[9]，雖然只是對SCID-hu小鼠模型的輕微修改，卻有明顯改進，由于同源人類胸腺的存在，可產(chǎn)生T細胞、B細胞、巨噬細胞、NK細胞和樹突狀細胞及適當(dāng)?shù)娜祟怲細胞訓(xùn)育和限制性，可以針對病原體產(chǎn)生特異性體液免疫和細胞免疫反應(yīng)。BLT小鼠模型可以形成人類黏膜免疫系統(tǒng)，可用于研究HIV的黏膜感染機制。

2 人源化小鼠的免疫反應(yīng)

2.1 人源化小鼠的體液免疫反應(yīng)

hu-HSC小鼠能夠?qū)乖a(chǎn)生特異性人類IgM和IgG型免疫反應(yīng)，以IgM型抗體反應(yīng)為主，抗原特異性IgG反應(yīng)弱，提示免疫球蛋白類別轉(zhuǎn)換缺陷。Watanabe等[10]的研究認為免疫球蛋白類別轉(zhuǎn)換不足不是源于B細胞內(nèi)在缺陷，而是因為T細胞協(xié)同障礙。hu-HSC小鼠對于抗體產(chǎn)生和類別轉(zhuǎn)換上的巨大差異可歸因于諸多因素，包括缺乏適當(dāng)?shù)娜祟怲細胞限制性和輔助，以及實驗方案的不同，例如使用新生小鼠相對于成熟小鼠來進行HSC移植、使用不同來源的HSC（臍血或胎肝），因此hu-HSC小鼠也有必要進一步改進。傳統(tǒng)的SCID-hu小鼠被進一步改進成BLT小鼠，由此提供了一個對于人T細胞發(fā)育和改善T/B細胞協(xié)同作用更適合的胸腺微環(huán)境[9,11]，因此，除B細胞、巨噬細胞和樹突狀細胞增殖外，T細胞也能良好增殖發(fā)育。在T細胞成熟過程中陽性選擇和陰性選擇應(yīng)在其自體人源胸腺中發(fā)生，BLT小鼠體內(nèi)的T細胞可以產(chǎn)生MHCⅠ和Ⅱ類限制性免疫反應(yīng)并提供T細胞輔助抗原刺激B細胞[11-12]。許多早期研究表明，在BLT小鼠體內(nèi)同時有IgM和IgG型抗原特異性反應(yīng)，但強度不同[2,11]。隨后Rajesh等[13]研究表明，盡管反復(fù)增強免疫也不會發(fā)生抗原特異性IgG反應(yīng)，這是因為缺乏生發(fā)中心形成和免疫球蛋白類別轉(zhuǎn)換的最佳條件。Biswas等[14]關(guān)于BLT小鼠的深度研究發(fā)現(xiàn)了經(jīng)HIV-1和西尼羅病毒包膜抗原免疫后發(fā)生的特異性抗體反應(yīng)，但其B細胞組成和抗體反應(yīng)都同健康人有顯著區(qū)別，該IgG抗體的特點是即使反復(fù)增強免疫也不能產(chǎn)生再次應(yīng)答。

2.2 人源化小鼠的人類T細胞免疫反應(yīng)和HLA限制性

早期研究表明新型hu-HSC小鼠可以針對多種人類病原體產(chǎn)生抗原特異性T細胞反應(yīng)[2]。hu-HSC小鼠感染HIV-1或EBV后，CD8+T細胞消耗，使感染不能得到有效控制，同時也證明了T細胞在免疫保護中的作用[15]，但 Baenziger[16]和Watanabe等[10]的研究顯示，在hu-HSC小鼠體內(nèi)存在T細胞反應(yīng)缺陷。重新刺激HIV-1和EBV感染的小鼠細胞，采用體外細胞因子分泌實驗、細胞增殖實驗和細胞毒性實驗，均可檢測到特異性CD4和CD8反應(yīng)，但反應(yīng)強度很低。這可能由多個因素造成。首先，是由于此種小鼠全身T細胞水平較低，這種降低有可能是由于其他原因造成的潛在的淋巴細胞減少后所誘導(dǎo)的T細胞活化，而此途徑所誘導(dǎo)產(chǎn)生的T細胞數(shù)量較少[17]；第二，hu-HSC小鼠較低的人類T細胞水平可能是由于缺少人類T細胞的白細胞抗原（HLA）限制。這是因為T細胞的選擇是發(fā)生在異源小鼠胸腺環(huán)境中，用H-2限制代替了HLA限制，導(dǎo)致不能有效地進行陽性選擇，從而減少了人類的T細胞的產(chǎn)生數(shù)量；第三，小鼠抗原呈遞細胞（APC）和人類T細胞之間相互作用在小鼠胸腺和外周環(huán)境中的降低，將造成信號減弱，并將減少胸腺中T細胞的產(chǎn)出率和外周環(huán)境中人類T細胞的存活數(shù)量，這些最終使得初始T細胞的數(shù)量減少[17]。最近Danner等[18]指出，當(dāng)RG小鼠用匹配的HLA-DR4 CD34+臍血細胞進行HLADR4轉(zhuǎn)基因，其胸腺和外周T細胞急劇增多。Shultz等[19]創(chuàng)建了HLA-A2Ⅰ類轉(zhuǎn)基因小鼠，并使用匹配的HSC進行重建，這些小鼠被證明能夠?qū)BV產(chǎn)生HLA限制性細胞免疫反應(yīng)。BLT小鼠的T細胞反應(yīng)正常是因為使用同源人類胸腺和HSC重建，產(chǎn)生T細胞反應(yīng)的HLA限制性和更高效的T細胞和B細胞相互作用。Dudek等[20]的研究表明，HIV感染BLT小鼠催生Ⅰ類限制性抗原表位特異性抗病毒反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)了在特異性、動力學(xué)和免疫顯性方面與人體相似的抗原特異性CD8+T細胞反應(yīng)，同樣發(fā)現(xiàn)了小鼠表達的HLA類等位基因HLA-B57表現(xiàn)出對HIV-1感染的增強控制，該等位基因在人體內(nèi)承擔(dān)同樣作用。

3 人源化小鼠在病毒研究領(lǐng)域的應(yīng)用

人源化小鼠已被用于研究多種人類病原體，特別是病毒，其中在HIV-1、EBV、HCV和登革病毒研究中的應(yīng)用最為廣泛。

3.1 人免疫缺陷病毒

HIV-1是一種反轉(zhuǎn)錄病毒，能夠特異性感染人類免疫系統(tǒng)。體內(nèi)存在HIV-1易感細胞的人源化小鼠為HIV-1研究提供了一個很好的體內(nèi)實驗?zāi)Ｐ?。一些早期研究采用hu-PBL和SCID-hu小鼠模型，獲得了珍貴的數(shù)據(jù)資料[4-5]。但這些模型的主要缺點是人類免疫細胞譜系和免疫系統(tǒng)功能不全，因此限制了在疾病中起核心作用的免疫發(fā)病機理的研究。使用RG、NOG和NSG小鼠構(gòu)建的新型人源化小鼠在一定程度上糾正了這些缺陷[2-3,21]。嗜CCR5、嗜CX?CR4和雙嗜性病毒能夠穩(wěn)定感染小鼠模型，且有典型的輔助性CD4+T細胞消耗，這是HIV-1感染免疫抑制的標志。與在人體內(nèi)一樣，嗜CCR5病毒優(yōu)先消耗CD45 RA CD4+記憶性T細胞，而嗜CXCR4病毒則快速消耗CD45 RA+初始T細胞和CD45 RACD4+記憶性T細胞[2]。

除了CD4+T細胞消耗外，許多其他HIV發(fā)病機制也被提出[22-23]，包括腸道完整性破壞使微生物易位造成的慢性免疫功能激活、調(diào)節(jié)性T細胞（regulato?ry T cells，Treg）損失、漿細胞樣樹突狀細胞（plasma?cytoid dendritic cells，pDC）激活和Ⅰ型干擾素生成等。在HIV-1感染hu-HSC RG小鼠時pDC激活導(dǎo)致Ⅰ型干擾素和其他細胞因子生成已被證實。這也與免疫激活和輔助性CD4+T細胞消耗呈正相關(guān)。使用NSG-BLT小鼠的研究還顯示IFN-α濃度升高和免疫激活[24]。慢性HIV-1感染時，程序性死亡-1（programmed death-1，PD-1）上調(diào)使T細胞枯竭被認為在降低T細胞功能方面起重要作用。HIV-1感染人源化小鼠時PD-1的上調(diào)與感染人類時相似，因此使用該系統(tǒng)可以進行新的抑制性靶點的治療策略研究。Palmer等[25]對HIV-1慢性感染的hu-HSC RG小鼠給予PD-L1單克隆抗體和PD-1配體，可以抑制病毒復(fù)制，降低病毒載量并提高T細胞水平。

眾所周知，HIV-1感染有潛伏期，潛伏感染的細胞充當(dāng)了病毒貯存庫，甚至在進行高效抗反轉(zhuǎn)錄病毒 治 療 （highly active antiretroviral therapy，HAART）期間亦如此。被病毒潛伏感染的細胞無法被免疫系統(tǒng)識別，也不受HAART的影響。停止HAART導(dǎo)致病毒反彈。當(dāng)前的治療策略是旨在消除潛伏感染的細胞以達到完全治愈[26]，因此，一個能夠模擬HIV人體潛伏感染的體內(nèi)試驗系統(tǒng)的價值將是無法估量的。為此，已有3項研究利用人源化小鼠構(gòu)建了HIV-1潛伏感染模型[27-29]。利用RG小鼠模型，Choudhary等[27]發(fā)現(xiàn)HAART可以將HIV-1載量抑制至檢測不到的水平，但停止治療后病毒載量發(fā)生反彈。來自體內(nèi)的刺激后，在休眠的CD4+T細胞內(nèi)可發(fā)現(xiàn)潛伏感染的病毒。使用BLT小鼠進行的類似實驗也在休眠CD4+T細胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)了潛伏感染的病毒?？傊琀AART可以將病毒抑制至無法檢測的水平，雖然停止治療后病毒載量反彈，但能將潛伏感染病毒誘導(dǎo)至有效感染，該新型人源化小鼠模型提供了一個比較理想的體內(nèi)試驗系統(tǒng)，以能夠用來研究潛伏感染HIV的清除。

3.2 EB病毒

EBV是一種廣泛傳播并導(dǎo)致長期感染的皰疹病毒，全球超過90%的人口感染過EBV。人類是該病毒的主要自然宿主，初次感染后可潛伏終生。EBV可引起急性單核細胞增多癥、淋巴增生性疾?。╨ym?phoproliferative disease，LPD），以及多種惡性腫瘤如Burkitt淋巴瘤、鼻咽癌和霍奇金淋巴瘤等。大多數(shù)感染者的免疫系統(tǒng)通過效應(yīng)性T細胞控制感染，抑制惡性腫瘤的發(fā)生。病毒感染后，有超過80個病毒基因表達，但腫瘤細胞只表達8個潛伏相關(guān)病毒蛋白，即6個核抗原（EBNA）和2個膜蛋白（LMP1、LMP2）[30]。根據(jù)這些蛋白表達的不同，可將EBV感染分為幾類：①潛伏Ⅰ型，僅表達EBNA1，見于EBV陽性的Burkitt淋巴瘤；②潛伏Ⅱ型，表達EBNA1、LMP1和/或LMP2，見于EBV陽性的霍奇金淋巴瘤、鼻咽癌、周圍型NK/T細胞淋巴瘤和其他一些B細胞淋巴瘤；③潛伏Ⅲ型，可表達全部8種EBV潛伏蛋白，見于HIV或器官移植等免疫功能低下的患者發(fā)生癌癥時。不同個體的EBV感染類型不同，發(fā)病機理也比較復(fù)雜?？梢岳萌嗽椿∈髞碓u估EBV的感染和免疫反應(yīng)[30]。早期研究使用人HSC移植入NOD-SCID小鼠并注入EBV形成感染和LPD，表達潛伏蛋白，屬潛伏Ⅲ型。然而，該模型不能產(chǎn)生足夠數(shù)量的人類T細胞，無法研究細胞免疫應(yīng)答反應(yīng)。具有較好的人體細胞定植和T細胞生成的hu-HSC RG小鼠能夠更好地形成EBV感染模型和更有效的免疫反應(yīng)。EBV感染后病毒擴增導(dǎo)致CD8+T細胞增殖，產(chǎn)生T細胞反應(yīng)[31]。感染小鼠體內(nèi)誘發(fā)生成的T細胞經(jīng)體外培養(yǎng)，在自體淋巴母細胞樣細胞系的刺激下產(chǎn)生IFN-γ，使用NSG和BLT小鼠也可得到相似結(jié)果。NSG小鼠的EBV感染遵循一個劑量依賴效應(yīng)[30]，低劑量感染可引發(fā)持續(xù)無癥狀感染和可檢測的T細胞反應(yīng)，而中高劑量的病毒感染則造成更強的T細胞增殖，更高劑量的病毒感染可導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。增殖的T細胞主要是具有保護作用的記憶性T細胞，因為感染前T細胞的消耗導(dǎo)致了更快速和廣泛的LPD?；谠撃Ｐ驮诟腥竞兔庖叻磻?yīng)方面的效用，利用NSG小鼠還進行了EBV突變體研究。EBNA3B基因敲除的突變EBV可形成更強的B細胞增殖，造成類似彌漫大B細胞淋巴瘤（diffuse large B cell lymphomas，DLBCL）的淋巴瘤[32]。

3.3 丙型肝炎病毒

HCV屬于黃病毒科肝炎病毒屬，是RNA病毒，約80%的感染者可形成慢性肝炎，部分病人可發(fā)展為肝纖維化、肝硬化甚至肝癌。慢性HCV感染與CD4+和CD8+T細胞功能受損有關(guān)。黑猩猩是公認的最好的HCV感染實驗動物，但其成本高昂，屬于瀕危動物，同時其慢性感染率低且不會發(fā)生肝纖維化。因此，一個成本低廉并能發(fā)生相應(yīng)免疫應(yīng)答的小動物模型對HCV的研究將大有幫助[33-34]。事實上，在過去的10年中已有多種人類肝細胞嵌合體小鼠模型被開發(fā)出來，包括可被人體肝細胞定植的Alb-uPA-SCID（Alb-urokinase plasminogen activa?tor-SCID）小鼠和Fah-RG（Fah-/-Rag2-/-IL-2R γc-/-）小鼠[35-36]。但這些模型缺少人類免疫系統(tǒng)功能，阻礙了免疫發(fā)病機理的研究。具有人類肝臟系統(tǒng)功能的免疫活性人源化小鼠克服了這一困難，該模型使用具有RG小鼠背景的AFC8轉(zhuǎn)基因小鼠構(gòu)建，AFC8小鼠表達細胞凋亡蛋白酶-8和FK506結(jié)合蛋白（FK506 binding protein，F(xiàn)KBP）活性。人類肝臟祖細胞和造血干細胞聯(lián)合植入AFC8轉(zhuǎn)基因小鼠肝臟中，再用二聚化因子誘導(dǎo)小鼠肝細胞凋亡，可選擇性地使人類肝細胞生長，人類造血干細胞定植可使人類免疫細胞群發(fā)育，形成AFC8-hu HSC/Hep小鼠（簡稱Hu-Liver-HSC小鼠）[34]，該模型中定植的人類肝細胞感染HCV并發(fā)生特異性T細胞反應(yīng)。HCV血癥可在uPA和Fah小鼠模型（支持＞50%肝細胞移植）中見到，但在AFC8-hu HSC/Hep小鼠模型中不能發(fā)現(xiàn)，這是因為其肝細胞定植水平較低（約15%），因此該模型仍須改進，盡管如此，這仍是HCV動物模型領(lǐng)域取得的重大進展。

3.4 登革病毒

DENV屬于黃病毒科RNA病毒，包括4種血清型，即DEN-1～DEN-4。所有血清型的DENV都可以感染人類，造成從亞臨床感染到急性發(fā)熱性登革熱的一系列嚴重疾病，甚至是致命的登革出血熱/登革休克綜合征（denguehemorrhagicfever/dengue shock syndrome，DHF/DSS）。目前，研究DENV發(fā)病機制及免疫機理的主要障礙是缺乏理想的動物模型。盡管靈長類動物可以感染DENV，但缺乏相應(yīng)的臨床表現(xiàn)。人臍血干細胞移植的NOD-SCID小鼠對DENV易感且具有發(fā)熱、血小板減少等典型癥狀。然而，這些人類細胞植入模型的一個主要不足是缺乏人類免疫反應(yīng)，阻礙了免疫機理和疫苗研究。Kuruvilla等[37]利用hu-HSC RG小鼠第一次完成了人類對DENV免疫反應(yīng)的全面評估。hu-HSC RG小鼠感染DENV后病毒血癥可持續(xù)21 d并產(chǎn)生IgM和IgG抗體。因抗體類別轉(zhuǎn)換效率低，所有的小鼠都能產(chǎn)生IgM，只有部分小鼠能產(chǎn)生IgG。這也是首次有研究證實人源化小鼠可產(chǎn)生針對人類病原體的中和抗體。Jaiswal等[38]隨后的研究將匹配的臍血植入NSG小鼠，感染小鼠體內(nèi)產(chǎn)生IgM抗體反應(yīng)，人類T細胞在DENV肽的刺激下產(chǎn)生了IFN-γ和TNF-α，表明同時發(fā)生了細胞和體液免疫反應(yīng)。該研究小組繼續(xù)使用BLT-NSG小鼠研究發(fā)現(xiàn)，除了產(chǎn)生HLAA2限制性T細胞反應(yīng)外，還發(fā)現(xiàn)了IgM型中和抗體。

4 結(jié)語

人源化小鼠從起初的人-鼠嵌合體模型到目前具有人體免疫活性的模型已走過了很長的路，但仍有一些局限性需要克服[6]。如免疫缺陷小鼠的殘余天然免疫需要輻照和預(yù)處理、T細胞增殖不良和B細胞成熟障礙、hu-HSC小鼠模型缺乏人類HLAⅠ和Ⅱ類限制性、BLT小鼠模型缺乏適當(dāng)水平的HLA抗原提呈細胞、T/B細胞協(xié)同不足導(dǎo)致低水平的抗體反應(yīng)和低效率的免疫球蛋白類別轉(zhuǎn)換、可交叉反應(yīng)的天然小鼠生長因子和細胞因子不足等。

隨著研究的不斷深入，這些不足正在被解決和糾正。除了T細胞、B細胞和NK細胞，小鼠巨噬細胞在人源化小鼠異種移植排斥反應(yīng)中也起作用，表達 信 號 調(diào) 節(jié) 蛋 白 α（signal regulatory protein α，SIRPα）的小鼠巨噬細胞能夠清除不表達其配體CD47的異種移植人類細胞[39]。Strowig等[40]的研究表明，人類SIRPα轉(zhuǎn)基因可以改善人類細胞在小鼠體內(nèi)重建，反之，通過慢病毒載體使人造血干細胞牢固結(jié)合小鼠CD47配體也可提高移植成活率[41]。人類HLA-DR4的轉(zhuǎn)基因表達也可以增加重建鼠T細胞數(shù)量，因此HLAⅠ和Ⅱ類基因在雙轉(zhuǎn)基因小鼠共同表達有望進一步提高人類T細胞重建、T/B細胞協(xié)同/輔助和調(diào)節(jié)HLA限制性免疫反應(yīng)[17]。很多小鼠細胞因子和生長因子如GM-CSF、IL-4、M-CSF、IL-7、IL-15和EPO等，很少與人體相對應(yīng)的因子發(fā)生交叉反應(yīng)，因此導(dǎo)致人類細胞增殖和維持不理想，在小鼠細胞因子基因座上敲入相對應(yīng)的人體基因，可以克服這些不足。例如，人類促血小板生成素的表達可提高人體細胞移植成活率和HSC生存率[42]，而人類 IL-3、GM-CSF[42]和 M-CSF[43]基因敲入能夠改善小鼠骨髓細胞的分化和功能。顯然，具有人類免疫活性的人源化小鼠模型在很多方面正不斷改進。然而，這些基于細胞因子、生長因子和HLA分子的策略需要聯(lián)合應(yīng)用方可達到預(yù)期效果。最近，隨著人類胚胎干細胞和誘導(dǎo)多能干細胞技術(shù)的建立，再生醫(yī)學(xué)的發(fā)展吸引了研究人員的注意，發(fā)展自胚胎干細胞和誘導(dǎo)多能干細胞的人工器官和HSC也將得到應(yīng)用。鑒于這些研究工作的加速進展，在不遠的將來，更加理想的人源化小鼠模型將有望成為現(xiàn)實。

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