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    乳酸菌發(fā)酵生產(chǎn)干玉米秸稈青貯飼料條件優(yōu)化

    2014-10-25 05:42:44武安泉張永亮
    中國飼料 2014年3期
    關(guān)鍵詞:玉米粉乳酸菌乳酸

    武安泉,張永亮

    (周口師范學(xué)院生命科學(xué)與農(nóng)學(xué)學(xué)院,河南周口 466001)

    干玉米秸稈含有大量的纖維素,是優(yōu)良的反芻家畜飼料來源之一。但是干玉米秸稈也存在適口性差,動(dòng)物采食量低等缺點(diǎn)。為了有效利用干玉米秸稈生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)粗飼料,本試驗(yàn)以乳酸菌為發(fā)酵菌,設(shè)置不同發(fā)酵溫度、發(fā)酵時(shí)間、水分和淀粉添加量,以產(chǎn)乳酸量和蛋白質(zhì)含量為評(píng)價(jià)指標(biāo),確定最佳發(fā)酵條件,為生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)牛羊粗飼料提供技術(shù)參數(shù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料 干玉米秸稈:取自周口市郊區(qū),為農(nóng)田自然堆放風(fēng)干秸稈,顏色白中帶黃,無腐敗和霉變。秸稈切成長度1~2 cm的小段,將莖稈和葉子碎片混合均勻備用。

    乳酸菌:從市售酸奶中提取,經(jīng)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng),生化試驗(yàn)鑒定為德拉氏乳酸桿菌和保加利亞乳酸桿菌。經(jīng)分離、復(fù)壯后的菌株于液體培養(yǎng)基中保存,備用,菌落數(shù)不小于108cfu/mL。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì),將溫度(A)、發(fā)酵時(shí)間(B)、水分(C)、玉米粉添加量(D):作為試驗(yàn)因素,每因素設(shè)置3個(gè)水平,試驗(yàn)實(shí)施按照李春喜(2008)中的 L9(34)正交表進(jìn)行(表 1)。

    表1 正交試驗(yàn)因素與水平

    切碎的干玉米秸稈按照風(fēng)干樣品計(jì)量,在潔凈的白色搪瓷盤中,將水分別按照干秸稈重量的60%、70%和80%加入,攪拌均勻后,用塑料布將搪瓷盤中的濕秸稈封閉,讓干秸稈充分吸水,以瓷盤內(nèi)無明顯的水存在為止。然后將玉米粉按照干秸稈的0%、1.0%和2.0%加入,用手將潮濕秸稈和玉米粉充分?jǐn)嚢枞啻?,使玉米粉全部與秸稈黏合。最后以風(fēng)干樣計(jì)算,每千克干秸稈添加50 mL乳酸菌連同液體培養(yǎng)基的混合物,用手充分?jǐn)嚢枞啻杲斩?,使菌液和秸稈混合均勻。隨即裝入500 mL聚乙烯塑料廣口瓶中,壓實(shí),加內(nèi)蓋密閉后將蓋子擰緊,不漏氣。每個(gè)試驗(yàn)單元填裝2~3瓶,然后置于不同溫度恒溫培養(yǎng)箱中發(fā)酵,每天將試驗(yàn)瓶子在培養(yǎng)箱中上下調(diào)換位置,使其所處的溫度均勻。

    1.2.2 指標(biāo)測定

    1.2.2.1 蛋白質(zhì)含量測定 在每組合發(fā)酵結(jié)束后,選取成功發(fā)酵的樣品,每個(gè)樣品隨機(jī)抽取1瓶。測定其干物質(zhì)含量,并以此為基礎(chǔ)。然后在隨機(jī)取5~10 g鮮樣,采用楊勝(1993)凱氏定氮法測定蛋白質(zhì)含量。

    1.2.2.2 乳酸含量測定 乳酸含量采用氣相色譜法按照浙江農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院(1996)的方法進(jìn)行。

    1.2.2.3 感官評(píng)價(jià) 在發(fā)酵結(jié)束時(shí),將樣品倒入潔凈培養(yǎng)皿中,標(biāo)號(hào)。隨機(jī)選擇20人,通過看、嗅、手捻搓等方式按照表2所列標(biāo)準(zhǔn)對(duì)樣品進(jìn)行賦分,然后對(duì)各樣品得分進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

    表2 干玉米秸稈發(fā)酵后感官評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

    1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 感官評(píng)價(jià)得分以 “平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示,并采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS11.0進(jìn)行單因素方差分析;蛋白質(zhì)、乳酸含量數(shù)據(jù)采用Excel軟件中的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)方差分析工具進(jìn)行分析,并進(jìn)行F檢驗(yàn)。

    2 結(jié)果

    2.1 發(fā)酵后產(chǎn)物的感官評(píng)價(jià) 對(duì)9個(gè)試驗(yàn)單元的感官評(píng)價(jià)得分如表3所示。由表3可知,感官指標(biāo)得分均在4.5分以上,可見各個(gè)試驗(yàn)單元發(fā)酵情況均正常。試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)各試驗(yàn)樣品均為亮黃或者黃色,質(zhì)地松軟,散發(fā)出誘人的特有醇香味。

    2.2 以發(fā)酵后產(chǎn)物蛋白質(zhì)含量為評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)選擇最佳發(fā)酵條件 對(duì)發(fā)酵后秸稈蛋白質(zhì)含量進(jìn)行分析,結(jié)果見表4。由表4可知,影響蛋白質(zhì)含量的因素主次順序?yàn)椋核?、玉米粉含量、溫度、發(fā)酵時(shí)間。經(jīng)方差分析:水分、玉米粉含量兩因素顯著影響蛋白質(zhì)含量 (P<0.05)。最佳條件組合為C2D2A1B2,即水分含量70%,玉米粉添加量1%,發(fā)酵溫度20℃,發(fā)酵時(shí)間28 d。

    表3 各試驗(yàn)單元感官評(píng)價(jià)得分

    表4 以蛋白質(zhì)含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)正交試驗(yàn)分析結(jié)果

    2.3 以發(fā)酵后產(chǎn)物乳酸含量為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)選擇最佳發(fā)酵條件 對(duì)發(fā)酵后秸稈乳酸含量進(jìn)行分析,結(jié)果見表5。由表5可知,影響乳酸含量的因素主次順序?yàn)椋核?、玉米粉含量、溫度、發(fā)酵時(shí)間。經(jīng)方差分析水分、玉米粉含量以及發(fā)酵時(shí)環(huán)境溫度三因素顯著影響蛋白質(zhì)含量(P<0.05)。最佳條件組合為C2D2A1B2,即水分含量70%,玉米粉添加量1%,發(fā)酵溫度20℃,發(fā)酵時(shí)間28 d。

    3 討論

    3.1 干玉米秸稈發(fā)酵產(chǎn)物蛋白質(zhì)含量 彭健和陳喜斌(2008)測定干玉米秸稈的蛋白質(zhì)含量一般為3%~4%。發(fā)酵后秸稈蛋白質(zhì)含量提高到8.5%~17.5%,相當(dāng)于麩皮中的粗蛋白質(zhì)含量。劉圈煒等 (2013)在青貯玉米秸稈中添加復(fù)合乳酸菌制劑,試驗(yàn)組乳酸含量和蛋白質(zhì)含量均顯著提高。劉圈煒等(2011)在青貯玉米秸稈加乳酸菌和纖維素酶,結(jié)果顯示提高了蛋白質(zhì)含量。孫芹英等(2011)采用米曲霉和綠色木霉雙菌發(fā)酵玉米秸稈,結(jié)果顯示蛋白質(zhì)含量提高3~4個(gè)百分點(diǎn)。趙輝等(2010)采用明串珠球菌104cfu/g、植物乳桿菌104cfu/g和短乳桿菌106cfu/g混合發(fā)酵玉米秸稈,結(jié)果發(fā)現(xiàn),氨態(tài)氮與總氮比由 1∶7.5降低到 1∶14,即有利于蛋白質(zhì)積累。汪建中和柯麗霞(2011)研究發(fā)現(xiàn),干玉米秸稈經(jīng)平菇與產(chǎn)朊假絲酵母混菌固態(tài)發(fā)酵后,其基質(zhì)粗蛋白質(zhì)含量由8.13%提高到13.41%。本試驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)在玉米秸稈中加入1%~2%的玉米粉,發(fā)酵后粗蛋白質(zhì)含量在8.5%~17.5%,盡管添加玉米粉提高了試驗(yàn)前秸稈混合物的蛋白質(zhì)含量,但提高幅度極為有限,說明在發(fā)酵過程蛋白質(zhì)含量提高幅度較大,這可能是乳酸菌大量繁殖的結(jié)果。

    表5 以乳酸含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)正交試驗(yàn)分析結(jié)果

    3.2 干玉米秸稈發(fā)酵產(chǎn)物乳酸含量 乳酸可保持飼料低pH和產(chǎn)生醇香味,也是保證飼料抗腐敗的關(guān)鍵因素。王鏡巖等(2002)認(rèn)為乳酸菌攝取葡糖糖后經(jīng)糖酵解過程生成丙酮酸,在無氧條件下轉(zhuǎn)變?yōu)槿樗?。因此乳酸發(fā)酵需要一定量的糖類物質(zhì)。但是過多易分解的糖,可能會(huì)因?yàn)樘墙徒膺^程快速進(jìn)行產(chǎn)生大量的乳酸,pH快速下降導(dǎo)致乳酸菌生長受阻。微生物發(fā)酵是產(chǎn)熱過程,適宜溫度可促使發(fā)酵過程加快,但是過高的溫度可能抑制發(fā)酵過程。在本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)高溫環(huán)境乳酸產(chǎn)量相對(duì)較低。

    3.3 干玉米秸稈發(fā)酵后感官性狀 飼料的顏色和質(zhì)地(干濕、柔軟度)也是影響飼料適口性的重要因素。楊鳳(2004)認(rèn)為牛羊最喜食青綠飼料,其次是發(fā)酵飼料,對(duì)干粗飼料采食能力較差。在生產(chǎn)實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)適當(dāng)?shù)乃挚梢愿淖儼l(fā)酵粗飼料的質(zhì)地,有利于提高干物質(zhì)采食量。而水分含量過高的發(fā)酵粗飼料卻不利于采食量的提高。本試驗(yàn)中發(fā)酵產(chǎn)物顏色呈現(xiàn)柔和的黃色,潮濕松軟,散發(fā)出誘人的酒香味,與青貯玉米秸稈的氣味一致,可對(duì)牛羊采食量的提高有一定促進(jìn)作用。

    4 小結(jié)

    在本試驗(yàn)條件下,以發(fā)酵產(chǎn)物蛋白質(zhì)含量和乳酸含量為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),乳酸菌發(fā)酵生產(chǎn)干玉米秸稈青貯飼料的最優(yōu)條件為溫度20℃,濕度70%,玉米粉添加量1%。

    [1]李春喜.生物統(tǒng)計(jì)學(xué)[M].北京:科學(xué)出版社,2008.251.

    [2]劉圈煒,鄭心力,王峰,等.復(fù)合酶制劑對(duì)玉米秸稈青貯發(fā)酵品質(zhì)的影響[J].中國飼料,2011,1:39 ~ 41.

    [3]劉圈煒,鄭心力,王峰,等.復(fù)合乳酸菌制劑對(duì)玉米秸稈青貯飼料品質(zhì)的影響[J].飼料研究,2013,1:41 ~ 43.

    [4]彭健,陳喜斌.飼料學(xué)(第二版)[M].北京:科學(xué)出版社,2008.185~186.

    [5]孫芹英,葛春梅,張杰,等.微生物轉(zhuǎn)化玉米秸稈用于飼料生產(chǎn)的研究[J].河南農(nóng)業(yè)科學(xué),2011,40(6):149 ~ 152.

    [6]汪建中,柯麗霞.混菌發(fā)酵玉米秸稈基質(zhì)蛋白質(zhì)含量及木質(zhì)素酶活性的研究[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2011,37(5):45 ~ 49.

    [7]王鏡巖,朱圣庚,徐長法.生物化學(xué)(第三版)[M].北京:高等教育出版社,2002.495.

    [8]楊鳳.動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)(第2版)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2004.203.

    [9]楊勝.飼料分析及飼料質(zhì)量檢測技術(shù)(第二版)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,1993.78~92.

    [10]趙輝,易茂華,王海吉,等.混合乳酸菌發(fā)酵生產(chǎn)玉米秸稈青貯飼料的研究[J].糧食與飼料工業(yè),2010,11:52~ 54.

    [11]浙江農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院.青貯飼料質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(試行)[J].中國飼料,1996,21:50 ~ 52.■

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