尿液內(nèi)毒素定量檢測對泌尿系統(tǒng)革蘭陰性菌感染的診斷價值研究＊

周洪興，趙文杰，張 平，孫穎昕，白 陽，陳 磊，王 碩，周 韓，徐 哲（南京醫(yī)科大學附屬常州市第二人民醫(yī)院檢驗科，江蘇常州 213003）

隨著各種介入性診療手段的應(yīng)用以及大量廣譜抗菌藥物的使用，臨床條件致病菌的感染率逐年增加。在各種條件致病菌所致感染性疾病中，泌尿系統(tǒng)感染占有重要地位［1］，且以革蘭陰性菌感染為主［2－4］。筆者對臨床藥敏試驗檢測結(jié)果進行了分析，發(fā)現(xiàn)多藥耐藥革蘭陰性菌在臨床常見致病菌中的所占比例較大。因此，及時監(jiān)測革蘭陰性菌感染并在感染初期采取措施以控制感染顯得非常重要。常規(guī)尿液病原菌培養(yǎng)檢測耗時長，且操作繁瑣，靈敏度也較低，無法用于易感患者的篩查。為此筆者根據(jù)革蘭陰性菌的特點，采用尿液內(nèi)毒素定量檢測的方法對易感患者進行革蘭陰性菌感染的篩查，旨在探討尿液內(nèi)毒素定量檢測在革蘭陰性菌感染診斷中的應(yīng)用價值，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1．1 一般資料 本院2012年各病區(qū)送檢的尿液培養(yǎng)標本100份，其中重癥監(jiān)護病房（ICU）標本18份、腫瘤科標本15份、呼吸科標本16份、泌尿科標本22份、婦科標本10份、燒傷科標本5份、其他病區(qū)標本14份。

1．2 儀器與試劑 PhoenixTM－100全自動細菌鑒定藥敏系統(tǒng)購自美國BD公司；BET－24A內(nèi)毒素檢測儀購自天津天大天發(fā)科技有限公司；鱟試劑動態(tài)濁度法內(nèi)毒素檢測試劑盒及配套質(zhì)控品、校準品購自湛江博康海洋生物公司。各批次質(zhì)控品檢測結(jié)果均在控制范圍內(nèi)。

1．3 方法

1．3．1 尿液細菌培養(yǎng) 采用無菌移液器吸取尿液標本20μL接種血平板，37℃培養(yǎng)18～24h，將可疑菌落接種至血平板進行純培養(yǎng)，之后挑取1～3個菌落至2mL無菌生理鹽水中，校正濁度至0．5麥氏比濁度，然后接種至鑒定藥敏板，上機進行細菌鑒定。以病原菌濃度不低于105CFU／mL作為尿液細菌培養(yǎng)陽性判斷標準。

1．3．2 內(nèi)毒素測定 按內(nèi)毒素檢測試劑盒說明書的要求處理標本后采用內(nèi)毒素檢測儀進行內(nèi)毒素水平檢測，操作嚴格按照儀器說明書進行。

1．4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS13．0軟件進行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學分析。計量資料以中位數(shù)（下四分位數(shù)，上四分位數(shù)），即M（P25，P75）表示，組間比較采用 Kruskall－Wallis H 檢驗，若比較差異有統(tǒng)計學意義，再采用Mann－Whitney U檢驗進行組間兩兩比較。內(nèi)毒素定量檢測對泌尿系統(tǒng)革蘭陰性菌感染的診斷效能分析采用受試者工作特征曲線（ROC曲線）。不同方法檢測結(jié)果的一致性分析采用Kappa檢驗。顯著性檢驗水準α＝0．05，P＜0．05為比較差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2．1 含有不同致病菌的尿標本內(nèi)毒素檢測結(jié)果比較 100份送檢尿標本中，細菌培養(yǎng)陽性36例，其中革蘭陰性菌陽性18例，占50．0%，革蘭陽性菌陽性13例，占36．1%，真菌陽性5例，占13．9%。含有不同致病菌的尿標本內(nèi)毒素檢測結(jié)果見表1。

表1 含有不同致病菌的尿標本內(nèi)毒素水平

2．2 內(nèi)毒素對泌尿系統(tǒng)革蘭陰性菌感染的診斷效能分析 經(jīng)ROC曲線分析可知，尿液內(nèi)毒素檢測診斷泌尿系統(tǒng)革蘭陰性菌感染的cut－off值為71．9EU／L時，其對革蘭陰性菌感染的診斷靈敏度為88．9%、特異度為85．4%、陽性預(yù)測值為57．1%、陰性預(yù)測值為97．2%。Kappa分析顯示，細菌培養(yǎng)結(jié)果與內(nèi)毒素檢測結(jié)果的Kappa值為0．61，可以認為兩種方法檢測結(jié)果的一致性好，見表2。

表2 內(nèi)毒素檢測結(jié)果與細菌培養(yǎng)結(jié)果一致性分析（n）

2．3 患者隨訪結(jié)果分析 尿液培養(yǎng)確診革蘭陰性菌感染患者18例，經(jīng)抗菌藥物治療1周后，有15例患者自覺癥狀顯著改善。尿液內(nèi)毒素定量檢測結(jié)果顯示，該15例患者尿液內(nèi)毒素水平均值為42．6EU／L，與治療前檢測結(jié)果比較差異有統(tǒng)計學意義（U＝77．0，P＜0．05）。

3 討 論

有調(diào)查研究顯示，泌尿系統(tǒng)感染約占感染性疾病的20%～30%［1－2］。目前，尿液細菌培養(yǎng)仍為診斷泌尿系統(tǒng)感染的金標準。然而，細菌培養(yǎng)檢測周期長，且在標本留取、轉(zhuǎn)運、接收等環(huán)節(jié)存在較多的不確定因素，易造成雜菌污染而對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響，導致尿液細菌培養(yǎng)檢測無法實現(xiàn)泌尿系統(tǒng)感染的早期診斷，不利于疾病的及時治療。內(nèi)毒素是革蘭陰性菌細胞壁的重要成分，當發(fā)生革蘭陰性菌感染時，患者血液內(nèi)毒素水平即可顯著升高［5－6］。目前國外已開展了尿液內(nèi)毒素定量檢測，且研究表明尿液內(nèi)毒素水平與泌尿系統(tǒng)革蘭陰性菌感染患者的病情存在一定的相關(guān)性［7－10］。

本研究對尿液細菌培養(yǎng)檢測結(jié)果與尿液內(nèi)毒素定量檢測結(jié)果進行了比較，結(jié)果顯示，泌尿系統(tǒng)革蘭陰性菌感染患者尿液內(nèi)毒素水平顯著高于革蘭陽性菌、真菌感染患者，且尿液內(nèi)毒素定量檢測對革蘭陰性菌感染的診斷靈敏度與特異度均符合臨床要求；一致性檢驗結(jié)果亦顯示，尿液內(nèi)毒素定量檢測結(jié)果與尿液培養(yǎng)檢測結(jié)果的一致性較好。由此可見，就泌尿系統(tǒng)革蘭陰性菌感染診斷而言，尿液內(nèi)毒素檢測可以部分代替尿液細菌培養(yǎng)。與尿液細菌培養(yǎng)檢測相比，尿液內(nèi)毒素檢測具有檢測速度更快、操作更簡便的優(yōu)勢，一般標本送檢數(shù)小時后即可獲得檢測結(jié)果，適用于易感患者的篩查。與此同時，本研究結(jié)果顯示，經(jīng)過治療后，泌尿系統(tǒng)革蘭陰性菌感染患者的尿液內(nèi)毒素水平較治療前顯著下降，且下降幅度與患者的臨床癥狀緩解程度相一致。因此，尿液內(nèi)毒素定量檢測還可用于泌尿系統(tǒng)革蘭陰性菌感染患者的療效評價。

另一方面，尿液內(nèi)毒素檢測對標本的要求也較嚴格，例如需要使用無熱源的留樣杯，在標本留取、運送、接收和檢測的各個環(huán)節(jié)均需嚴格進行無菌操作。因此，尿液內(nèi)毒素定量檢測需要使用專用的留樣杯，且需要對從事標本轉(zhuǎn)運、接收的操作員進行相關(guān)培訓。有理由相信，隨著檢測技術(shù)的不斷發(fā)展，尿液內(nèi)毒素定量檢測的臨床應(yīng)用將逐漸普及。

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