IL17在肝癌患者血清中表達增高對肝癌診斷的研究

范莎莎等

摘 要 為了早期發(fā)現(xiàn)并監(jiān)測肝癌，通過ELISA法檢測肝癌組與正常組血清IL17細胞因子水平，運用ROC統(tǒng)計學(xué)分析比較其與AFP診斷肝癌的診斷效能，logistic回歸獲得IL17和AFP兩者聯(lián)合診斷的模型預(yù)測肝癌.結(jié)果發(fā)現(xiàn)肝癌組的IL17質(zhì)量濃度（5.76±2.35 ng/L）較對照組（2.98±2.53 ng/L）明顯增高（P*<0.001），ROC分析IL17和AFP預(yù)測肝癌的曲線下面積（AUC）分別為0.820和0.884，兩者對診斷均有統(tǒng)計學(xué)意義.通過Logistic 逐步回歸得出的AFP和IL17回歸模型PRE，預(yù)測肝癌的ROC曲線下面積為0.963，診斷的敏感度（87.5%）、特異度（82.1%）較兩指標單獨診斷時明顯提高.因此本研究獲得的診斷模型可以用于臨床對肝癌的聯(lián)合診斷.

關(guān)鍵詞 肝癌；IL17；logistic 回歸；受試者診斷特征曲線；甲胎蛋白

中圖分類號 R7357文獻標識碼 A文章編號 10002537（2014）03001905

肝細胞癌（Hepatocellular Carcinoma， HCC）是最常見的肝原發(fā)惡性腫瘤， 因為發(fā)病率較高、發(fā)現(xiàn)困難、治療方法少等原因，在導(dǎo)致人類死亡的各種疾病中位居前列[1].目前，原發(fā)性肝細胞癌在全球范圍內(nèi)致死率位列第五位，而在一些非洲和亞洲國家，原發(fā)性肝細胞癌在腫瘤性死因中已經(jīng)位居首位[23].肝癌早期轉(zhuǎn)移和術(shù)后復(fù)發(fā)是肝癌患者生存率低的主要原因.目前有效的肝癌診斷標志物寥寥無幾，當前的檢測技術(shù)仍然不能及時發(fā)現(xiàn)和有效檢測早期階段的肝癌[45].

超聲和AFP檢測是最常用的篩查肝癌方法，然而超聲檢測依賴于醫(yī)師的專業(yè)知識和設(shè)備實際靈敏度，難以對腫塊的良惡性予以評估和診斷.AFP被認為是用于篩查和早期診斷肝癌最實用且可行的方法，40%～60%HCC患者的AFP值增高，然而還有很大一部分肝癌患者其AFP值沒有增高[67]，因此AFP用作唯一的工具來診斷肝癌仍然存在較大的漏診率[89].

IL17具有促腫瘤生長、轉(zhuǎn)移的作用.動物實驗研究表明IL17具有促進多種腫瘤生長的作用，這些腫瘤包括纖維肉瘤、結(jié)腸癌、皮膚癌、非小細胞肺癌等[1012].研究認為IL17能通過聚集血管內(nèi)皮細胞而促進腫瘤血管的形成，也能促進成纖維細胞產(chǎn)生血管內(nèi)皮生長因子、前列腺素、趨化因子、巨噬細胞炎性蛋白2，轉(zhuǎn)化生長因子的產(chǎn)生促進腫瘤細胞的粘附和運動，為腫瘤血管的形成和癌細胞播散提供條件[1213].

基于以上IL17與腫瘤和肝癌的各種相關(guān)報道，結(jié)合已有的AFP的臨床價值，檢測IL17在肝癌血清中的表達情況及評估與AFP的相關(guān)性顯得非常有意義，這樣更有利于系統(tǒng)地分析和檢驗二者的檢驗效能，以便更好地對其進行利用.

1 方法

1.1 實驗分組

篩選2013年9月和2013年12月在湖南省人民醫(yī)院就診的肝癌病人和健康體檢者，其中肝癌患者入組條件為：未經(jīng)過任何治療，經(jīng)病理或者臨床診斷為肝癌的患者.共有84名受試者參與，并分為以下兩組：健康對照組，包括32名，年齡范圍為21～72歲（平均年齡43±15歲）；肝癌組共52名，男45例，女7例，年齡范圍為27～80歲（平均年齡54±12歲），各組人員在入院后進行相應(yīng)治療之前，完成CT、超聲、血生化常規(guī)、血清AFP檢測，各組實驗對象資料見表1.

1.2 標本收集

用真空采血針取患者晨起空腹3 mL靜脈全血，4 ℃ 4 000 r/min離心10 min，提取離心后的血清.血清保存在-80 ℃，保存至同批測定.

1.3 酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）

酶聯(lián)免疫吸附實驗（Enzymelinked Immunosorbent Assay）檢測人血清IL17質(zhì)量濃度.使用人IL17酶聯(lián)免疫吸附試劑盒（ CSBE14917H， Cusabio Biotech），檢測濃度下限（LLD）為7.8 ng/L.批內(nèi)精密度（化驗內(nèi)精度）CV%<8%，批間精密度（檢測精度之間）CV%<10%.Biotech 酶標儀檢測各樣本孔吸光值.Curve Expert 1.4軟件計算和繪制ELISIA標準品曲線，并計算各孔的質(zhì)量濃度.

1.4 應(yīng)用Roche電化學(xué)發(fā)光法測定血清AFP質(zhì)量濃度

按試劑盒說明書處理樣本后，吸取10 μL標本與生物素化抗AFP單克隆抗體和釘標記的抗AFP抗體混勻，加入鏈霉親合素包被的微粒，反應(yīng)混合液吸到測量池中，微粒通過磁鐵吸附到電極上，電極加電壓后產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過光電倍增管進行測定.檢測結(jié)果由Elecsys軟件自動測出.

1.5 軟件分析

應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析.應(yīng)用受試者診斷特征曲線（receiver operator characteristic curve ROC）評估指標的預(yù)測效能，得到曲線下面積（Area Under the Curve， AUC）.最大約登指數(shù)計算臨界值（Cutoff points），約登指數(shù)（Youden index）=敏感度+特異度-1.各組均值比較，兩獨立樣本t檢驗.logistic逐步回歸分析.所有結(jié)果以雙尾檢驗P<0.05認為有統(tǒng)計學(xué)差異.Medcalc軟件繪制ROC曲線.

2 結(jié)果

2.1 正常組與肝癌組血清IL17的質(zhì)量濃度

圖1 正常組與肝癌組血清IL17質(zhì)量濃度

Fig.1 Serum levels of IL17 in HCC group and control group

結(jié)果顯示IL17在肝癌組中質(zhì)量濃度明顯高于正常組，分別為5.76±2.35 ng/L和2.98±2.53 ng/L（P*<0.001），差異有統(tǒng)計學(xué)意義.兩獨立樣本t檢驗.見圖1.

2.2 血清IL17診斷肝癌組與正常組的效能分析

以IL17的血清質(zhì)量濃度為變量做ROC曲線，檢測其作為肝癌血清診斷標志物的可能性，結(jié)果顯示IL17和AFP分別單獨作為標志物對肝癌與正常組進行區(qū)分時，其曲線下面積AUC分別為0820 （P<0.001）和0.884 （P<0.001），見圖2和表2，二者作為血清標志物均具有統(tǒng)計學(xué)意義.IL17診斷的特異度較AFP低，但敏感性較AFP增加.選擇截斷點IL17為2.455 ng/L時，敏感度為67.3%，特異度為87.5%.當AFP為32.4 μg/L截斷點時約登指數(shù)最大，其敏感度為61.5%，特異度為100%，如表3.若選擇以20 μg/L的診斷指標為截斷點，其敏感度為61.5%，特異度為90.6%.

3 討論

原發(fā)性肝癌的早期診斷對提高患者的5年生存率以及生存質(zhì)量十分重要.在中國，AFP目前仍然被作為篩查和早期診斷肝癌的主要指標，主要由于其應(yīng)用的方便和指標具備一定的特異性，肝癌患者約60%血清中的AFP較正常人增高[14]，但是AFP的敏感度和特異度對于臨床診斷來說還遠遠不夠，即使聯(lián)合已有的指標DCP或AFPL3時，診斷肝癌患者的敏感度也僅為78.3%[1415].因此，尋找更加敏感和特異的肝癌診斷指標有著非常重要的臨床意義，也是目前肝癌研究的重點方向.

本研究應(yīng)用了受試者診斷特征曲線分析，判斷指標的潛在診斷價值.在AUC>0.5的情況下，AUC越接近于1，說明診斷效果越好.通過ROC分析，結(jié)果顯示肝癌患者IL17血清質(zhì)量濃度為2.455 ng/L臨界點時，其曲線下面積（AUC=0.820）有統(tǒng)計學(xué)意義.目前關(guān)于IL17與肝癌轉(zhuǎn)移的報道在國內(nèi)外還非常少，僅有IL17增高與肝癌復(fù)發(fā)相關(guān)的類似研究，當IL17大于0.9 ng/L時，肝癌患者術(shù)后的復(fù)發(fā)概率增高，遠期生存質(zhì)量較差，預(yù)測肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)的敏感度為63.3%，特異度為91.1%[16].另外也有報道178例肝癌患者，腫瘤內(nèi)IL17質(zhì)量濃度與肝癌術(shù)后復(fù)發(fā)及生存相關(guān)，是預(yù)后的不良因素，認為IL17質(zhì)量濃度與腫瘤的微血管密度正相關(guān)，可能的機制為IL17能夠促進血管生成，導(dǎo)致腫瘤進展[17].

Logistic回歸分析是一類數(shù)據(jù)挖掘技術(shù)，可以從大量的醫(yī)學(xué)信息和臨床數(shù)據(jù)中提取有用的信息和知識，建立某種疾病的診斷或治療模型.臨床醫(yī)生進行診斷時如果利用計算機輔助診斷的logistic回歸模型，其準確率可得到提高.本研究構(gòu)建的IL17和AFP的logistic回歸模型其診斷肝癌的效能較IL17和AFP均增高，該模型在國內(nèi)外的文獻中還未見報道.

本研究發(fā)現(xiàn)在肝癌血清中IL17質(zhì)量濃度較正常組增高，因此IL17可作為診斷肝癌的標志物，其敏感度較AFP高.同時獲得了IL17和AFP兩指標聯(lián)合診斷的logistic回歸模型，其ROC的曲線下面積AUC（0964）較兩指標單獨診斷的曲線下面積均高，且敏感度和特異度都提高.本研究還有待于進一步擴大樣本，驗證其logistic回歸診斷模型的診斷效能.

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（編輯 王 ?。?