細(xì)野蕎水提液清除活性氧的效果

鄧琳瓊+趙菲菲+張以忠

摘要：用NBT光化還原法、Fenton反應(yīng)法、鉬酸銨顯色分光光度法對(duì)細(xì)野蕎莖、葉水提液清除羥基自由基（·OH）、超氧陰離子自由基（ O-2· ）、過(guò)氧化氫（H2O2）的能力進(jìn)行研究。結(jié)果表明：細(xì)野蕎莖、葉水提液對(duì)·OH的最高清除率分別為93.62%、76.63%，平均清除率分別68.38%、39.37%；細(xì)野蕎莖、葉水提液對(duì) O-2· 的最高清除率分別為98.45%、73.32%，平均清除率分別79.04%、48.25%；細(xì)野蕎莖、葉水提液對(duì)H2O2的清除作用相對(duì)較弱，最高清除率僅分別為31.44%、12.34%，平均清除率僅分別為20.19%、7.39%；且莖和葉對(duì)·OH、 O-2· 、H2O2的清除作用差異顯著。

關(guān)鍵詞：細(xì)野蕎；活性氧；·OH； O-2· ；H2O2

中圖分類號(hào)：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-1302（2014）08-0298-03

活性氧（reactive oxygen species，ROS）是指生物體內(nèi)有氧代謝過(guò)程中或在外界物理、化學(xué)因素誘導(dǎo)下產(chǎn)生的含有氧原子且氧化能力很強(qiáng)的多種物質(zhì)總稱^[1-3]，主要有超氧陰離子自由基（ O-2· ）、羥基自由基（·OH）、過(guò)氧化氫（H2O2）等。它們?cè)谏顒?dòng)的代謝過(guò)程中不斷產(chǎn)生，與生物體衰老及許多疾病發(fā)生都有重要關(guān)系^[4-9]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明，衰老、癌癥、炎癥等疾病與體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化和自由基有直接關(guān)系，因此應(yīng)用抗氧化物質(zhì)來(lái)保持人體健康和預(yù)防疾病的研究越來(lái)越受到科學(xué)家關(guān)注[4，7，10]。蕎麥屬于蓼科（Polygonaceae）蕎麥屬（Fagopyrum），種植適應(yīng)性強(qiáng)，屬于藥食兩用植物^[11-12]。因蕎麥含有黃酮、蛋白質(zhì)、原花青素、膳食纖維等功效分子，具有降糖、抗缺血、抗氧化、抗菌、抗癌、助睡眠等保健功能[11，13]。目前，對(duì)蕎麥清除活性氧的研究較少，且主要集中在甜蕎（F. esculentum Moench）和苦蕎[F. tataricum（L.）Gaertn.]2個(gè)栽培種上。姚亞平等研究發(fā)現(xiàn)，甜蕎和苦蕎的乙醇提取物對(duì)DPPH自由基和羥自由基均有顯著抗氧化作用，且呈劑量效應(yīng)關(guān)系^[14]。何永艷等研究發(fā)現(xiàn)，甜蕎和苦蕎的乙醇提取物均有較強(qiáng)的抗氧化活性和明顯的自由基清除效果^[15]。而對(duì)野生蕎麥清除活性氧的研究還未見(jiàn)報(bào)道。本研究考察了野生蕎麥細(xì)野蕎[F. gracilipes （Hemsl） Dammer ex Diels]的莖、葉水提液對(duì)·OH、 O-2· 、H2O2等活性氧的清除作用，以期為蕎麥?zhǔn)称?、保健品、化妝品的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試細(xì)野蕎于2012年7月采自貴州省畢節(jié)市七星關(guān)區(qū)鴨池鎮(zhèn)。

1.2 方法

1.2.1 樣品制備

取細(xì)野蕎植株的莖、葉，用蒸餾水洗凈，40 ℃ 下恒溫烘干至恒重，打粉，稱重。分別加干質(zhì)量40、45倍的蒸餾水，80 ℃、140 r/min振蕩1 h，過(guò)濾收集濾液，對(duì)殘?jiān)謩e再加25倍蒸餾水，80 ℃、140 r/min振蕩1 h，過(guò)濾收集濾液，合并2次濾液，即為細(xì)野蕎莖、葉的水提取液，莖、葉提取液濃度分別為80、61.5 g/L，將其儲(chǔ)存冰箱備用。

1.2.2 水提液對(duì)活性氧的清除試驗(yàn) 參照龔寧等的方法^[16-17]并稍加改動(dòng)，測(cè)定水提液對(duì)活性氧的清除效果。

1.2.2.1 細(xì)野蕎各器官水提液對(duì)·OH的清除試驗(yàn)

對(duì)樣品的莖、葉均設(shè)5個(gè)濃度梯度處理（0.094、0.188、0.282、0.376、0.470 g/L），分別測(cè)定各濃度梯度處理下的清除率。反應(yīng)體系總體積為3 mL，含pH值7.4的PBS 0.75 mL、2 mmol/L EDTA Na2-Fe（Ⅱ）1 mL、70 mg/L番紅花紅T 0.5 mL、不同濃度供試液0.25 mL、體積分?jǐn)?shù)0.33%的H2O2 0.5 mL。將其充分混勻，置于37 ℃恒溫水浴鍋中保溫 30 min，用723 N分光光度計(jì)于520 nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度（D），加不同濃度供試液的體系吸光度為D樣品，以提取介質(zhì)代替供試液的體系吸光度為D空白，兩者均以未加EDTA Na2-Fe（Ⅱ）（用蒸餾水代替）作對(duì)照，各自與其對(duì)照之差分別記為ΔD樣品、ΔD空白。供試液對(duì)·OH的清除能力以清除率（E）表示：

點(diǎn)^[15]。目前已在栽培蕎麥[12，14-15]、花葉開唇蘭^[17]、南瓜^[21]、少花龍葵^[22]、葡萄^[23]、拳參^[24]、荔枝^[25]等植物上進(jìn)行了相關(guān)研究，證明其提取物具有較強(qiáng)的清除活性氧作用，為尋找安全、清除活性氧的天然制劑提供了理論依據(jù)。

本研究首次對(duì)蕎麥屬野生蕎麥細(xì)野蕎不同器官清除活性氧（·OH、 O-2· 、H2O2）作用進(jìn)行研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，細(xì)野蕎莖、葉水提液對(duì)·OH、 O-2· 均具有較強(qiáng)的清除作用，最高清除率分別為93.62%、76.63%和73.32%、98.45%；而對(duì)H2O2的清除能力相對(duì)較低，最高清除率僅分別為31.44%、12.34%。另外，細(xì)野蕎不同器官水提液對(duì)自由基的清除能力不同。對(duì)于·OH和H2O2，細(xì)野蕎莖水提液的清除率均顯著高于葉；而對(duì)于 O-2· ，細(xì)野蕎葉水提液的清除率顯著高于莖。以往研究認(rèn)為，·OH、 O-2· 、H2O2等自由基中，·OH是對(duì)生物體毒性最強(qiáng)、危害最大的自由基，對(duì)·OH的清除率是反映藥物抗氧化作用的重要指標(biāo)[15，26]，因此常用清除·OH的能力來(lái)評(píng)價(jià)一種物質(zhì)對(duì)自由基的清除效果。本研究中細(xì)野蕎莖、葉水提液對(duì)H2O2具有一定的清除作用，而對(duì)·OH和 O-2· 均具有較強(qiáng)的清除能力，表明細(xì)野蕎莖、葉對(duì)自由基具有很好的清除效果。endprint

細(xì)野蕎是蕎麥屬中一個(gè)野生種，廣泛分布于我國(guó)，作為一種潛在的天然抗氧化制劑原料，具有很大的開發(fā)應(yīng)用價(jià)值。本研究結(jié)果對(duì)于細(xì)野蕎在保健品、化妝品及其深加工等方面均有一定的理論和實(shí)際意義。

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