三重四極桿質(zhì)譜測定乳制品中呋喃苯烯酸鈉殘留量

邱雄雄+詹松

呋喃苯烯酸鈉屬于硝基呋喃類藥物，是人工合成的一種廣譜抗菌藥物，對動物和魚類的細(xì)菌預(yù)防和治療有良好效果。但是，世界衛(wèi)生組織和聯(lián)合國糧農(nóng)組織聯(lián)合報道硝基呋喃類藥物具有潛在的致突變和致癌性。為保護(hù)消費者的健康，世界各國紛紛禁止硝基呋喃類藥物在食品動物上的使用。然而，這些藥物的違法使用現(xiàn)象仍然存在。

目前，國內(nèi)外色譜法對呋喃苯烯酸鈉殘留檢測主要采用HPLC-UV作為檢測手段，而HPLC法由于檢測靈敏度低、前處理操作繁瑣費時，不能滿足進(jìn)出口貿(mào)易中各國對呋喃苯烯酸鈉殘留限量要求。為保證我國有關(guān)食品的進(jìn)出口貿(mào)易，促進(jìn)呋喃苯烯酸鈉殘留監(jiān)控工作的順利開展，建立一種快速簡便、靈敏度高、準(zhǔn)確度好的檢測方法勢在必行。

本文使用島津LCMS-8040三重四極桿質(zhì)譜，參考《SN/T 2451-2010 動物源性食品中呋喃苯烯酸鈉殘留量檢測方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》，建立了UHPLC-MS/MS法檢測乳制品中呋喃苯烯酸鈉殘留。采用乙腈提取，正己烷萃取凈化，方法簡便、快速，可用于乳制品進(jìn)出口樣品的監(jiān)控和檢測。

實驗

儀器

實驗使用島津超高效液相色譜儀 LC-30A與三重四極桿質(zhì)譜儀LCMS-8 040聯(lián)用系統(tǒng)。具體配置為：LC-30AD×2輸液泵，DGU-20A5在線脫氣機(jī)，SIL-30AC自動進(jìn)樣器，CTO-30A柱溫箱，CBM-20A系統(tǒng)控制器，LCMS-8040三重四極桿質(zhì)譜儀，LabSolutions Ver.5.53色譜工作站。分析條件

液相色譜條件

分析儀器：LC-30A系統(tǒng)；

色譜柱：Shimadzu Shim-pack XRODSIII 2.0mmI.D.×50mmL，1.6μm；

流速：0.2mL/min；

進(jìn)樣體積：5μL；

柱溫：40℃；

流動相：A-0.1%甲酸水；B-乙腈；

洗脫方式：梯度洗脫，B相初始濃度45%，梯度洗脫見表1。

質(zhì)譜條件

分析儀器：LCMS-8040；

離子源：ESI，負(fù)離子掃描；

離子源接口電壓：4.5kV；

霧化氣：氮氣3.0L/min；

干燥氣：氮氣20L/min；

碰撞氣：氬氣；

脫溶劑管溫度：250℃；

加熱模塊溫度：450℃；

掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；

駐留時間：150ms；

延遲時間：3ms；

MRM參數(shù)見表2。

樣品制備

樣品前處理方法

參考《SN/T 2451-2010 動物源性食品中呋喃苯烯酸鈉殘留量檢測方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》前處理方法。

稱取約5g牛奶試樣，置于50mL聚丙烯具塞離心管中，加入5g無水硫酸鈉混勻后，加入25mL乙腈，渦旋混勻30s，超聲提取5min，于4000r/min離心5min。上清液轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中。殘渣依上述方法再提取一次，合并上清液，混勻后用乙腈定容至50mL。移取10mL提取液，于40℃氮氣吹至近干，加入1.0mL0.1%甲酸溶液+乙腈（4∶1）溶液渦旋30s溶解殘渣。向溶解液中加入3mL乙腈飽和正己烷，震蕩后靜置分層，取下層溶液于9500rpm離心5min，過濾上機(jī)測試。

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

用甲醇配制10mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，用乳制品空白基質(zhì)溶液稀釋成濃度為1、10、25、50、100μg/L標(biāo)準(zhǔn)工作液。

結(jié)果討論

呋喃苯烯酸鈉標(biāo)準(zhǔn)樣品一級質(zhì)譜圖和產(chǎn)物離子掃描質(zhì)譜圖及呋喃苯烯酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液MRM色譜圖見圖2、圖3。

線性關(guān)系

按以上分析條件進(jìn)行測定，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，以1、10、25、50、100μg/L標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度點，采用外標(biāo)法建立校準(zhǔn)曲線，如圖4所示，呋喃苯烯酸鈉在線性濃度范圍內(nèi)線性相關(guān)性良好，相關(guān)系數(shù)為0.9993。（校準(zhǔn)曲線參數(shù)見圖3）

檢出限和定量限

配制7份1μg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)樣分析，對上述測定結(jié)果剔除離群值后將各自的7次測定結(jié)果計算其標(biāo)準(zhǔn)偏差S，此時檢出限MDL=3.14×S，定量限LOQ=4×MDL。測定結(jié)果如表4所示。

精密度實驗

配制低中高濃度的混合標(biāo)樣依次平行測定6次，呋喃苯烯酸鈉的保留時間和峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別在0.07%～0.107%和0.98%～1.51%之間，結(jié)果表明系統(tǒng)具有良好的精密度。

實際樣品分析及回收率實驗

將所建立的分析方法用于實際樣品分析，檢測牛奶樣品，未檢測到呋喃苯烯酸鈉。圖5為牛奶樣品的MRM色譜圖。在牛奶樣品中添加濃度為1.0μg/kg的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，加標(biāo)樣品MRM色譜圖如圖6所示，加標(biāo)回收率結(jié)果見表6。

結(jié)論

本文建立了一種使用島津三重四極桿質(zhì)譜儀LCMS-8040測定乳制品中呋喃苯烯酸鈉殘留量的分析方法。呋喃苯烯酸鈉在1～100μg/L線性范圍內(nèi)線性良好，相關(guān)系數(shù)達(dá)到0.9999。對低中高不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行精密度實驗，連續(xù)6次進(jìn)樣保留時間和峰面積的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在0.07%～0.107%和0.98%～1.51%之間，儀器精密度良好?？疾炫Ｄ虡悠贩治黾凹訕?biāo)實驗，呋喃苯烯酸鈉的回收率范圍為86.4%，可以滿足乳制品中呋喃苯烯酸鈉殘留量的檢測需求。endprint