皮膚鱗狀細(xì)胞癌組織中人乳頭瘤病毒型別的檢測(cè)

王 震，羅 芳

皮膚鱗狀細(xì)胞癌（skin squamous cell carcinoma，SSCC）是起源于表皮或附屬器角質(zhì)形成細(xì)胞的一種惡性腫瘤，常發(fā)生于某些皮膚病或癌前疾病的基礎(chǔ)上，或者由各種癌前疾病發(fā)展而來(lái)，少數(shù)為原發(fā)性[1]。發(fā)病率在非黑素瘤皮膚癌（non melanoma skin cancer，NMSC）中僅次于基底細(xì)胞癌（basal cell carcinoma，BCC）。近年來(lái)SSCC的發(fā)病率在世界范圍內(nèi)呈上升趨勢(shì)[2]。SSCC由于容易出現(xiàn)區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，它的危險(xiǎn)性比BCC高的多[3]。SSCC原因不明，隨著人乳頭瘤病毒(HPV)在SSCC中不斷被檢出，HPV與SSCC發(fā)生發(fā)展的相關(guān)性越來(lái)越受到重視。筆者對(duì)300例SSCC患者皮損組織中HPV型別進(jìn)行檢測(cè)，初步分析SSCC組織HPV的感染狀況和型別分布規(guī)律，探討SSCC的病因和發(fā)病機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 病例資料

2001年1月～2011年1月在湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院門診和住院的300例患者，其病灶經(jīng)臨床和組織病理學(xué)檢查均診斷為SSCC，收集其組織標(biāo)本共300份。所有患者均未接受過(guò)放療和化療。SSCC按統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行診斷，由臨床醫(yī)師使用統(tǒng)一的登記表格進(jìn)行填寫、匯總、統(tǒng)計(jì)和分析。

1.2 研究方法和儀器

統(tǒng)計(jì)分析入選患者的SSCC確診例數(shù)、性別、職業(yè)、皮損部位和確診年齡分布、組織病理診斷和組織病理分級(jí)分布特征，以及實(shí)驗(yàn)室HPV-DNA檢測(cè)結(jié)果。采用多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)進(jìn)行型別分析，主要檢測(cè)型別為低危型HPV6、11和高危型HPV16、18、31、33。應(yīng)用PCT-200型基因擴(kuò)增儀進(jìn)行檢測(cè)。引物設(shè)計(jì)見表1。

表1 HPV引物設(shè)計(jì)

1.3 SSCC診斷標(biāo)準(zhǔn)

SSCC診斷主要根據(jù)其病史、臨床癥狀與體征，以及實(shí)驗(yàn)室檢查。實(shí)驗(yàn)室檢查包括PCR檢測(cè)HPV-DNA以及型別和皮膚組織病理檢查等。SCC按Broders分級(jí)，Ⅰ級(jí)：分化良好的鱗狀細(xì)胞＞75%；Ⅱ級(jí)：分化良好的鱗狀細(xì)胞＞50%；Ⅲ級(jí)：分化良好的鱗狀細(xì)胞＞25%；Ⅳ級(jí)：分化良好的鱗狀細(xì)胞＜25%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，樣本之間差異性比較用χ2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料

300例SSCC患者中男196例，女104例，男女之比為1.88:1。發(fā)病年齡：平均年齡 (51.82±16.12)歲（15～87歲），其中＞50歲170例（56.67%），51～70歲SSCC的發(fā)病率最高（118例，占39.33%），31～50歲100例（33.33%）。發(fā)病部位：頭面部131例（43.67%），頸部76例（25.33%），四肢30例（10.00%），軀干25例（8.33%），生殖器和腹股溝部位38例（12.67%）。組織病理分級(jí)：Ⅰ級(jí)165例（55.00%），Ⅱ級(jí)59例（19.67%），Ⅲ級(jí)58例（19.33%），Ⅳ級(jí)18例（6.00%）。

2.2 HPV感染及分布

300例SSCC患者中，HPV檢出188例，HPV感染率為62.67%，有122例未檢出HPV，占40.67%。男性HPV檢出130例，HPV感染率為66.33%(130/196) ；女性HPV檢出58例，HPV感染率為55.78%(58/104)，其中Ⅰ級(jí)、Ⅱ級(jí)、Ⅲ級(jí)和Ⅳ級(jí)HPV感染率分別為72.12%、55.93%、44.83%和55.56%。300例SSCC患者中高分化（Ⅰ～Ⅱ級(jí)）224例（74.67%），低分化（Ⅲ～Ⅳ級(jí)）76例（25.33%）。SSCC HPV感染率無(wú)性別差異（P＞0.05），見表2。頭面部、頸部、四肢、軀干以及生殖器和腹股溝部HPV感染率分別為70.23%、65.79%、43.33%、28.00%和68.42%。不同發(fā)病部位HPV感染率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表3。

表2 SSCC不同組織病理分級(jí)患者HPV感染比較[例(%)]

表3 188例HPV陽(yáng)性患者不同發(fā)病部位HPV型別分布情況（例）

2.3 SSCC不同組織病理分級(jí)患者HPV感染率及型別分布

188例HPV陽(yáng)性患者中共檢出高危型（HPV16、33）感染51例，低危型（HPV6）感染49例，均為單一型別感染。高分化（Ⅰ～Ⅱ級(jí)）組HPV感染率為67.86%，低分化（Ⅲ～ Ⅳ級(jí)）組HPV感染率為47.37%，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表1。高危型HPV在高分化組（Ⅰ～Ⅱ級(jí)）感染率為12.50%(28/224)，與低分化組（Ⅲ～ Ⅳ級(jí)）感染率30.26%(23/76)相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；低危型HPV在高分化組（Ⅰ～ Ⅱ級(jí)）感染率為12.50%，與低分化（Ⅲ～ Ⅳ級(jí)）感染率28.95%(22/76)相比, 兩組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見表4。

表4 188例不同組織病理分級(jí)HPV陽(yáng)性患者型別分布(例 )

2.4 不同發(fā)病部位HPV型別分布差異

低危型HPV在頭面部、頸部、四肢、軀干以及生殖器和腹股溝部的感染率分別為21.37%、13.16%、6.67%、4.00%和21.05%，低危型HPV感染率在不同發(fā)病部位間，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。高危型HPV在頭面部、頸部、四肢、軀干以及生殖器和腹股溝部的感染率分別為19.08%、19.74%、3.33%、4.00%和23.68%，高危型HPV感染率在不同發(fā)病部位間，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討論

病毒的致癌作用在惡性腫瘤研究中日益受到重視，HPV與宮頸癌的關(guān)系已經(jīng)日益明確，同時(shí)HPV與SSCC的關(guān)系也受到學(xué)者專家們的關(guān)注。根據(jù)致癌性大小，HPV感染分為低危型和高危型，低危型有HPV6、11、40、42、43等，與表皮瘤樣增生性疾病相關(guān)；高危型包括HPV16、18、31、33、35等，與上皮惡性腫瘤密切相關(guān)[5]。

本次研究結(jié)果顯示HPV在SSCC的感染率為62.67%，明顯高于健康女性宮頸感染率（13.7%）[6]，略低于尖銳濕疣患者（64.18%）[7]。男性HPV感染率為66.33%，女性HPV感染率為55.78%，無(wú)性別差異。國(guó)外一些研究者通過(guò)大樣本觀察研究顯示HPV感染患者SSCC的發(fā)病率明顯升高[8,9]。有作者報(bào)道HPV感染者發(fā)生SSCC的趨勢(shì)可能會(huì)隨著HPV感染率的增加而增加[10]。HPV感染很可能是誘發(fā)SSCC的一個(gè)重要原因，因此重視HPV檢測(cè)可能有利于該疾病的預(yù)防和治療。

高分化型（Ⅰ～Ⅱ級(jí)）共224例更為常見，分化程度越低患者越少。SSCC的惡性程度與HPV的感染率關(guān)系不大，高分化SSCC HPV的感染率反而高于低分化。惡性程度主要與感染HPV型別有關(guān)。高危型HPV在低分化(Ⅲ～Ⅳ級(jí))的SSCC患者中檢出率顯著高于高分化組，其主要型別是HPV16、33。有研究結(jié)果顯示高危型HPV- 16 或18 的E6、E7 蛋白協(xié)同作用可使細(xì)胞發(fā)生永生化和轉(zhuǎn)化[11,12]。鄧曼鈴等[13]研究結(jié)果顯示HPV16在宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN )Ⅱ～Ⅲ級(jí)及宮頸癌組織中的陽(yáng)性率最高。李穎等[14]研究發(fā)現(xiàn)HPVl6 E7是SSCC發(fā)生的一個(gè)獨(dú)立性因素，其存在具有增強(qiáng)SSCC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)性。Iftner等[15]研究顯示SSCC患者高危型HPV16陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組。所以HPV16在宮頸癌和SSCC的惡性發(fā)展過(guò)程中可能發(fā)揮著重要的作用，應(yīng)重視對(duì)此型別的檢測(cè)。惡性程度較低的SSCC患者主要感染低危型HPV6，提示預(yù)后較好。因此，HPV-DNA分型檢測(cè)對(duì)SSCC高危人群的篩查、臨床診斷、預(yù)后判斷及疫苗的研制提供了重要的理論依據(jù)。

HPV感染率在不同發(fā)病部位存在顯著性差異，頭頸部與生殖器和腹股溝部位的感染率顯著高于軀干與四肢，與孫瑩等[16]研究結(jié)果一致。高危型和低危型HPV感染在不同部位差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但不同型別在不同部位是否存在特異性感染還有待今后進(jìn)一步的研究。Gregoire等[17]檢測(cè)117例陰莖SSCC患者皮損HPV感染型別，其中88.5%為HPV16。本次研究結(jié)果顯示高危型HPV感染在生殖器和腹股溝部位主要型別亦為HPV16。由于HPV型別多，任何一種方法均無(wú)法檢測(cè)出所有類型，目前的研究主要集中在HPV- DNA及其抗體水平的檢測(cè)。然而由于選擇的檢測(cè)方法不同，其敏感性及檢測(cè)結(jié)果均存在很大的差異[2]。SSCC的病因包括紫外線、電離輻射、化學(xué)制劑、器官移植、皮膚慢性病和HPV感染[18]，而HPV不同型別感染與這些因素是否存在協(xié)同或者相加作用，還有待進(jìn)一步的研究。

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