生存素在慢性肝病患者外周血中的表達

申建剛，王紅芳，張 平，張定國

1.深圳市龍華新區(qū)人民醫(yī)院消化內科，廣東 深圳 518000;2.深圳市南山區(qū)西麗人民醫(yī)院內科;3.深圳市人民醫(yī)院消化內科

作為凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins，IAPs)家族的新成員，生存素(survivin)是迄今為止發(fā)現(xiàn)的作用最強的凋亡抑制蛋白之一，在細胞增殖、凋亡的平衡中起到重要的調控作用。研究發(fā)現(xiàn)，多種相關基因、蛋白、生長因子等通過促進肝星狀細胞(hepatic stellate cell，HSC)增殖可引起或加重肝纖維化的發(fā)生，在活化的HSC中生存素表達明顯增高。通過檢測生存素在慢性肝病中的表達，對發(fā)現(xiàn)肝硬化、肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)，了解肝炎、肝纖維化程度，判斷病情、預測預后等可能具有重要臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取深圳市南山區(qū)西麗人民醫(yī)院健康體檢的人群30名，作為對正常對照組，既往體健。病例資料來自深圳市人民醫(yī)院、深圳市南山區(qū)西麗人民醫(yī)院2010年9月－2012年10月住院患者83例，其中慢性乙型病毒性肝炎30例，男19例，女11例，平均年齡(33.7±4.3)歲;乙肝肝硬化患者30例，均為失代償期，男21 例，女9 例，平均年齡(41.5 ±4.1)歲;原發(fā)性肝癌患者23例，男13例，女10例，平均年齡(46.2±3.8)歲。83例患者均根據(jù)病史、癥狀和體征、生化學、影像學及組織學等確診且診斷符合2000年第10次全國傳染病與寄生蟲病學和肝病學術會議修訂標準、2009年PLC規(guī)范化診治的專家共識，排除其他系統(tǒng)原發(fā)惡性腫瘤和其他系統(tǒng)重大疾病。

1.2 研究方法

1.2.1 標本采集與保存:留取晨起空腹外周血標本3 ml，離心后血清送－80℃儲存。

1.2.2 檢測方法:人生存素試劑盒為博世德生物科技有限公司產品，采用ELISA檢查方法，具體操作按照說明書。每份標本重復檢測2次，取平均值。

1.3 統(tǒng)計學處理 應用SPSS 19.0軟件包處理數(shù)據(jù)。計量資料以表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用q檢驗;建立ROC曲線分析外周血生存素對原發(fā)性肝癌的診斷價值。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 血清生存素檢測結果 結果顯示，乙肝肝硬化組、慢性乙型肝炎組和正常對照組外周血生存素濃度分別為(70.58 ± 9.78)ng/L、(67.90 ± 9.14)ng/L、(65.07 ± 7.58)ng/L，原發(fā)性肝癌組為(83.70 ±14.45)ng/L。慢性乙型肝炎組與正常對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，乙肝肝硬化組與正常對照組比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，乙肝肝硬化組與慢性乙型肝炎組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，原發(fā)性肝癌組外周血生存素濃度明顯高于乙肝肝硬化組、慢性乙型肝炎組和正常對照組，差異有顯著統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。

2.2 ROC曲線 根據(jù)正常對照組、慢性乙型肝炎組、乙肝肝硬化組及原發(fā)性肝癌組外周血生存素濃度繪制ROC曲線，結果顯示生存素在原發(fā)性肝癌組ROC曲線下面積為0.82(P＜0.01，見圖1);生存素在乙肝肝硬化組ROC曲線下面積為0.62(P＜0.01)，生存素在慢性乙型肝炎組ROC曲線下面積小于0.5。在ROC曲線下原發(fā)性肝癌的臨床診斷臨界點是77.29 ng/L，在23例原發(fā)性肝癌患者中，超過該臨界點的患者為16例，陽性率69.57%，而乙肝肝硬化組超過該臨界點的患者7例，陽性率為23.33%(見圖1～2)。

圖1 外周血生存素濃度診斷原發(fā)性肝癌的ROC曲線;圖2 外周血生存素濃度診斷乙肝肝硬化的ROC曲線Fig1 The ROC curve for surviving to diagnose PLC;Fig2 The ROC curve for surviving to diagnose hepatitis B associated liver cirrhosis

3 討論

近年來，生存素在腫瘤領域的研究一直是熱點。生存素幾乎在所有常見惡性腫瘤組織中高表達，如肝細胞癌、乳腺癌、前列腺癌、霍奇金病等，所以有望成為預測腫瘤發(fā)生、發(fā)展的一個新的腫瘤標志物[1];生存素具有調節(jié)細胞增殖分裂和強大的抗凋亡功能，成為抗腫瘤治療的一個新的理想靶點[2]。但生存素不是一種腫瘤特異性分子，它也表達于正常人體組織，調節(jié)正常細胞的功能，特別是血液和免疫系統(tǒng)，比如在肝臟缺血時生存素表達下降，在肝臟再生時生存素表達增強[3]。

研究發(fā)現(xiàn)生存素可在人正常肝組織和肝硬化組織中表達[4]，生存素在肝硬化組織中的表達與肝病的嚴重程度可能相關。關于生存素在肝硬化組織中的陽性率，研究結果相差巨大[5]，高者達 85.1%，低者僅為7.9%，其準確陽性率有待進一步研究。由于生存素在原發(fā)性肝癌組織中的陽性率較高，有人建議把生存素作為原發(fā)性肝癌的一個腫瘤標志物用于臨床診斷。但在慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化患者外周血中生存素的表達尚無研究，且在原發(fā)性肝癌外周血中檢測生存素表達的研究也較少。

本研究顯示，生存素可在正常人、慢性乙型肝炎患者、乙肝肝硬化患者外周血中表達，正常對照組與慢性乙型肝炎組間差異無統(tǒng)計學意義，慢性乙型肝炎組與乙肝肝硬化組比較差異無統(tǒng)計學意義，但乙肝肝硬化組生存素濃度略高于慢性乙型肝炎組和正常對照組。生存素在原發(fā)性肝癌外周血中濃度較其他3組明顯升高，結合ROC曲線，考慮生存素在診斷原發(fā)性肝癌中有一定的臨床價值，但在慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化的診斷中臨床價值較低，對病情的判斷有一定價值。

Stefano等[6]研究發(fā)現(xiàn)，在非酒精性脂肪性肝病中，生存素局限表達于細胞質中，而且隨著肝病逐漸向肝硬化、肝癌進展，其表達逐漸減弱，這與其他原因引起的肝硬化、肝癌中生存素表達明顯增高是不同的[5]。本研究證實，生存素在正常人、慢性乙型肝炎、乙肝肝硬化及原發(fā)性肝癌患者外周血中表達，隨著肝病嚴重程度的發(fā)展，生存素表達逐漸升高，原發(fā)性肝癌患者中最高，與非酒精性脂肪性肝病發(fā)展中生存素的表達趨勢不同。

國內徐鋒等[7]檢測80例肝癌患者血清生存素濃度，有50例(62.5%)呈陽性，而正常組均為陰性，58例肝癌患者血清AFP陽性，陽性率為72.5%，兩者聯(lián)合可使原發(fā)性肝癌患者的檢出率達到90.0%，從而使AFP陰性的肝細胞癌檢出率增加。本研究發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝癌中血清生存素陽性率為69.57%，繪制ROC曲線，曲線下面積為0.82，診斷準確性為中等，提示外周血生存素濃度對于原發(fā)性肝癌診斷具有一定價值，此與李劍鋒等[8]研究一致。由于外周血標本較組織標本更易獲得，因此以外周血作為檢測標本更加方便快捷，成本較低，若能聯(lián)合甲胎蛋白等腫瘤標志物，臨床意義更為明顯。

總之，乙肝肝硬化、原發(fā)性肝癌患者中外周血生存素水平升高，其可能在慢性肝病發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，聯(lián)合甲胎蛋白等腫瘤標志物可能對指導臨床早期診斷及治療原發(fā)性肝癌具有重要價值。

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