秦運(yùn)海 金艷梅 范瑩瑩 李 兵
(湖州師范學(xué)院工學(xué)院,浙江 湖州313000)
細(xì)胞顯微注射,即利用微注射針穿刺細(xì)胞膜后將外源基因物質(zhì)注入細(xì)胞內(nèi)指定注射位置,并培育出具有外源基因特征個(gè)體的過程,是生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的主要手段[1]。細(xì)胞注射是生命科學(xué)和生物工程的重要研究方法,顯微注射是細(xì)胞注射的核心步驟,是實(shí)現(xiàn)外源物質(zhì)導(dǎo)入細(xì)胞的關(guān)鍵技術(shù),而微位移工作臺(tái)是微注射的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。顯微注射以活體細(xì)胞為操作對(duì)象,包括哺乳動(dòng)物體細(xì)胞、生殖細(xì)胞等,尺寸常處于1~100μm范圍。
傳統(tǒng)的顯微注射系統(tǒng)中,培訓(xùn)操作人員需投入大量時(shí)間和資金,試驗(yàn)過程受技能、精力和情緒等因素干擾顯著,且定位精度低,刺膜速度慢,易引起細(xì)胞大幅度變形或細(xì)胞膜大面積破碎,降低了細(xì)胞注射試驗(yàn)效率和注射后細(xì)胞存活率,制約著顯微注射法制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的成功率和生產(chǎn)率[2]?,F(xiàn)有顯微注射系統(tǒng)主要由Narishige、SuRer、Eppendorf等公司生產(chǎn)。利用硅加工工藝、壓電陶瓷伸縮變形與振動(dòng)等技術(shù),國(guó)外學(xué)者[3-5]研究的微進(jìn)給裝置具有刺膜速度快、控制精度高等優(yōu)點(diǎn),但成本很高。因此,提出一種精度較高、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、成本低的基于視覺運(yùn)動(dòng)控制的細(xì)胞注射系統(tǒng)(圖1),該系統(tǒng)采用一種X—Y—Z三坐標(biāo)微位移臺(tái),通過顯微鏡的CMOS攝像頭獲取顯微鏡下細(xì)胞所在位置,并通過計(jì)算將該坐標(biāo)發(fā)送給帶有微量注射器的X—Y—Z三坐標(biāo)微位移臺(tái),從而控制該位移臺(tái)快速、準(zhǔn)確地運(yùn)動(dòng)到該細(xì)胞所在位置,并使用注射器進(jìn)行刺膜和微量注射。
圖1 細(xì)胞注射系統(tǒng)
X—Y—Z三坐標(biāo)微位移臺(tái)主要由X、Y、Z三個(gè)軸微位移移動(dòng)臺(tái)組合而成,其使系統(tǒng)結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)模塊化,且每軸微位移移動(dòng)臺(tái)裝有限位開關(guān),保護(hù)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)的安全。
為了方便精密位移系統(tǒng)的設(shè)計(jì),X—Y—Z三坐標(biāo)微位移臺(tái)的結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)與驅(qū)動(dòng)方式如圖2所示。
圖2 微位移移動(dòng)臺(tái)
該平臺(tái)采用日本神津的XA07A系列,所用步進(jìn)電機(jī)為直流五相步進(jìn)電機(jī),其步距角為0.72°,直流步進(jìn)電機(jī)通過聯(lián)軸器與精密絲杠連接,絲杠導(dǎo)程為0.5mm,行程為20mm,精密絲杠與安裝在工作臺(tái)上的絲杠螺母配合使用,兩側(cè)通過精密導(dǎo)軌副與工作臺(tái)底座相連。限位開關(guān)安裝在工作臺(tái)底座旁邊。步進(jìn)電機(jī)驅(qū)動(dòng)器采用奧拓尼克斯生產(chǎn)的 MD5-HD14驅(qū)動(dòng)器,其細(xì)分精度最高達(dá)250??刂破鳛閲?guó)產(chǎn)普通三軸控制器,可實(shí)現(xiàn)三軸聯(lián)動(dòng)。
相關(guān)參數(shù):步進(jìn)電機(jī)步距角為0.72°,絲杠導(dǎo)程為0.5mm,驅(qū)動(dòng)器最高細(xì)分?jǐn)?shù)250,則細(xì)分后電機(jī)步進(jìn)角為:
即步進(jìn)電機(jī)每轉(zhuǎn)步數(shù):
則步進(jìn)精度(最小位移量):
該系統(tǒng)移動(dòng)平臺(tái)采用X—Y—Z三坐標(biāo)結(jié)構(gòu),其主要優(yōu)點(diǎn)在于結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、易操作、剛度好、不易產(chǎn)生振動(dòng)。系統(tǒng)的驅(qū)動(dòng)控制部分主要優(yōu)勢(shì)在于采用五相步進(jìn)電機(jī)與高細(xì)分器和性價(jià)比高的三軸控制器,實(shí)現(xiàn)了最小位移量小、運(yùn)動(dòng)精度高、控制簡(jiǎn)單的要求,且三軸聯(lián)動(dòng)的控制實(shí)現(xiàn)了斜線、圓弧線等曲線軌跡的運(yùn)動(dòng)。對(duì)于考核機(jī)器視覺測(cè)量系統(tǒng)的分辨率、運(yùn)動(dòng)形式和調(diào)試工作的精度已經(jīng)足夠,對(duì)于尺寸為1~100μm間的生殖細(xì)胞進(jìn)行微操作,已滿足所需精度。通過進(jìn)一步深入,可實(shí)現(xiàn)數(shù)字化控制。
(1)本文介紹了一種基于視覺運(yùn)動(dòng)控制的細(xì)胞注射系統(tǒng)及其工作原理。
(2)設(shè)計(jì)并搭建了一種可以滿足細(xì)胞注射等微操作的X—Y—Z三坐標(biāo)微位移臺(tái),分析了微位移臺(tái)的最小移動(dòng)量,滿足細(xì)胞注射等微操作所需的運(yùn)動(dòng)精度。
(3)與現(xiàn)有的細(xì)胞注射機(jī)構(gòu)相比,結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,成本低。
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