血清TK1對肺癌患者的診斷和復(fù)發(fā)評(píng)估價(jià)值的研究

朱 明 韓衛(wèi)衛(wèi) 齊秋鋒 包燕青 張亞平 劉永萍

蘇州大學(xué)附屬常州市腫瘤醫(yī)院 1 腫瘤科 2 胸外科，江蘇省常州市 213002

細(xì)胞質(zhì)胸苷激酶1（TK1）是一種嘧啶補(bǔ)救途徑的激酶，與DNA的合成和細(xì)胞周期密切相關(guān)，而癌癥正是由于正常細(xì)胞中某些基因突變而造成與細(xì)胞生長相關(guān)的酶和蛋白質(zhì)調(diào)節(jié)失控，從而導(dǎo)致細(xì)胞無限增殖的一種惡性腫瘤。因此，健康人血清TK1含量極微或檢測不到，但惡性腫瘤患者血清TK1水平伴隨著細(xì)胞的急劇增殖而升高。近年來，血清TK1作為一種新的腫瘤標(biāo)志物，在腫瘤的早期篩查、治療監(jiān)控以及預(yù)后與復(fù)發(fā)評(píng)估中顯示著越來越重要的作用［1～3］。為探討血清TK1在肺癌診斷、術(shù)后監(jiān)測及預(yù)后評(píng)估中的作用，本文采用免疫印跡增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法檢測了28例肺癌患者手術(shù)前、后血清TK1水平的變化情況，現(xiàn)分析報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集2011年5月－2012年5月份在常州市第四人民醫(yī)院行肺葉切除術(shù)的非小細(xì)胞肺癌患者28例（所有患者術(shù)前未經(jīng)放化療，術(shù)后1個(gè)月開始行輔助性化療），其中男16例，女12例，年齡48～77歲，中位年齡66歲。所有患者均收集術(shù)前、術(shù)后1周、術(shù)后1個(gè)月各3份血清，共計(jì)114份血清樣本，進(jìn)行血清TK1含量測定。同時(shí)選取30例本院體檢健康者（無心、肝、肺、腎等重要臟器疾患，無腫瘤家族史）的血清作為正常對照。上述標(biāo)本收集均經(jīng)醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)同意。

1.2 血清TK－1檢測 于清晨空腹采集靜脈血2ml，3h內(nèi)以4 000rpm／min離心8～10min分離血清，分裝于2個(gè)Eppendorf管（1管用于檢測、另1管用于復(fù)檢）中，－80℃冰箱保存，備用。標(biāo)本收集完成后進(jìn)行血清TK1值測定。TK1細(xì)胞周期檢測試劑盒和CIS－1型化學(xué)發(fā)光數(shù)字成像分析儀由深圳市華瑞同康生物技術(shù)有限公司提供。全過程實(shí)行嚴(yán)格的雙盲法操作，測定步驟參照試劑盒說明書。檢測結(jié)果以TK1測定值2.0pM／L為標(biāo)準(zhǔn)域值，＞2.0pM／L為異常。

1.3 血清TK1的臨床評(píng)估標(biāo)準(zhǔn) 參考文獻(xiàn)［4］，當(dāng)血清TK1值達(dá)到以下標(biāo)準(zhǔn)，評(píng)估為治療有效或部分緩解（PR）：（1）術(shù)后1個(gè)月，TK1水平下降為術(shù)前水平的50%；（2）術(shù)前及術(shù)后1個(gè)月均維持在正常水平（＜2.0pM）。穩(wěn)定（SD）：治療后 TK1水平下降不足50%。進(jìn)展（PD）：血清TK1水平升高。

2 結(jié)果

2.1 肺癌組患者與正常對照組血清TK1濃度比較

28例肺癌患者中有21例（75%）血清TK1高于參考值（2.0pM），平均濃度為（2.916±0.192）pM，顯著高于正常對照組（1.063±0.163）pM（P＜0.001），詳見表1。

表1 肺癌組、正常對照組血清TK1濃度比較（±s）

表1 肺癌組、正常對照組血清TK1濃度比較（±s）

組別 例數(shù) TK1濃度（pM）P值肺癌組 28 2.954±0.176 ＜1.063±0.163 0.001正常對照組 30

2.2 肺癌患者手術(shù)前、后血清TK1水平比較 肺癌患者術(shù)后1周復(fù)查血清TK1水平較術(shù)前有所上升（3.588±0.341 7）pM，但差異不顯著，而術(shù)后1個(gè)月的TK1濃度較術(shù)前顯著下降（1.801±0.176）pM（P＜0.001），詳見圖1。

圖1 肺癌患者手術(shù)前、后血清TK1水平變化

2.3 血清TK1水平變化與患者預(yù)后的關(guān)系 Kaplan－Meier生存分析顯示，血清TK1水平的動(dòng)態(tài)變化與患者的無復(fù)發(fā)生存率顯著相關(guān)，且術(shù)后TK1水平評(píng)估為PR組的患者中位無復(fù)發(fā)生存率（RFS）為16個(gè)月，而SD＋PD組為8個(gè)月，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖2，P＜0.05）。

圖2 TK1水平與肺癌患者無復(fù)發(fā)生存率（RFS）的關(guān)系

3 討論

肺癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，28個(gè)發(fā)達(dá)國家公布的調(diào)查統(tǒng)計(jì)資料顯示肺癌已成為惡性腫瘤中最常見的死亡原因。在我國，肺癌粗死亡率為40.98%，在城市腫瘤死因順位中排第1位，占城市全部惡性腫瘤死亡的27.29%，并呈逐年上升的趨勢［5］。目前，雖然治療方案不斷改進(jìn)，但療效仍不甚理想。合理使用腫瘤標(biāo)記物在肺癌的早期診斷、早期治療、預(yù)后和轉(zhuǎn)歸及治療療效的監(jiān)測等方面具有重要的臨床意義。

TK1是DNA合成的關(guān)鍵酶，與細(xì)胞的增殖分裂密切相關(guān)。伴隨惡性腫瘤的細(xì)胞異常增殖，細(xì)胞內(nèi)TK1合成顯著增加，并隨著腫瘤的快速生長、壞死，TK1可釋放至外周血。因此腫瘤組織中或患者外周血中TK1濃度與腫瘤的生長、增殖程度密切相關(guān)［6］。本研究對28例非小細(xì)胞肺癌患者、30例健康體檢者的血清測定發(fā)現(xiàn)，21例（75%）患者的血清TK1水平呈陽性，顯著高于正常對照組（P＜0.001）。提示TK1可作為肺癌早期診斷的一項(xiàng)新的生物指標(biāo)。有文獻(xiàn)報(bào)道［7］，TK1水平與炎癥呈正相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，肺癌患者術(shù)后1周復(fù)查血清TK1水平較術(shù)前有所上升，而術(shù)后1個(gè)月TK1濃度顯著下降（P＜0.001），這可能由于術(shù)后1周手術(shù)并發(fā)感染未完全恢復(fù)所致，提示選擇術(shù)后1個(gè)月TK1值作為復(fù)查指標(biāo)更為合理。大量文獻(xiàn)指出［8，9］，TK1水平的高低可作為預(yù)測腫瘤患者預(yù)后的一項(xiàng)重要指標(biāo)。本研究生存分析顯示，術(shù)后TK1水平與患者的無復(fù)發(fā)生存率（RFS）顯著相關(guān)，且評(píng)估為PR組的患者無復(fù)發(fā)生存率明顯高于SD＋PD組（P＜0.05），證實(shí)了TK1還可作為復(fù)發(fā)評(píng)估的一項(xiàng)新的生物指標(biāo)。

綜上所述，TK1作為一項(xiàng)新的生物學(xué)檢測指標(biāo)，在腫瘤的早期診斷、療效評(píng)價(jià)以及復(fù)發(fā)評(píng)估中有著潛在的應(yīng)用價(jià)值。

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