心腦寧片對(duì)心肌缺血大鼠血清肌酸激酶、乳酸脫氫酶、丙二醛及超氧化物歧化酶水平的影響※

呂宏迪 郝少君 王希東 蘇 峰 李文俊 張正臣

(中國(guó)人民解放軍第三七一醫(yī)院心血管病科，河南 新鄉(xiāng) 453000)

1 中國(guó)人民解放軍第三七一醫(yī)院藥械科，河南 新鄉(xiāng) 453000

1 中國(guó)人民解放軍第三七一醫(yī)院醫(yī)務(wù)處，河南 新鄉(xiāng) 453000

心腦寧片是由人參、當(dāng)歸、川芎、黃芪等組成的中藥片劑，具有活血化瘀、益氣安神之功效，用于腦血栓形成、冠心病治療，亦可用于記憶力減退、衰老等治療。為進(jìn)一步探討心腦寧片的藥理作用，我們進(jìn)行了心腦寧片對(duì)心肌缺血大鼠血清肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)水平的影響的實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 Wistar雄性大鼠70只，清潔級(jí)，體質(zhì)量240～280 g，由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào):DK0505-0027。飼養(yǎng)環(huán)境為清潔級(jí)，溫度18～25℃，濕度45%～60%。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 心腦寧片(藥物組成:人參、當(dāng)歸、川芎、黃芪，由中國(guó)人民解放軍第三七一醫(yī)院研制開(kāi)發(fā));腦心通膠囊(陜西步長(zhǎng)制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20025001);硝苯地平片(常州四藥制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z20025001);垂體后葉素注射液(上海第一生化藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H31022754);羧甲基纖維素鈉(CMC)(天津市福晨化學(xué)試劑廠);CK試劑盒、LDH試劑盒、MDA試劑盒及SOD試劑盒均由南京建成生物工程研究所提供;水合氯醛(青島宇龍海藻藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H37022673)。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 JM 1000電子秤(余姚市紀(jì)銘稱重校驗(yàn)設(shè)備有限公司，型號(hào)JM-B10002);C型低速臺(tái)式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠，型號(hào)TDL-40B);奧豪斯電子分析天平(河南中良科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)JA1103N);UV-2000紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海精密儀器儀表有限公司)。

1.2 方 法

1.2.1 動(dòng)物選擇及分組 將心電圖采集與分析系統(tǒng)SP2006篩選出心電圖正常的Wistar雄性大鼠70只，隨機(jī)分為7組，即空白對(duì)照組、模型組、硝苯地平片組、腦心通膠囊組及心腦寧片大、中、小劑量組，每組各10只。

1.2.2 給藥方法 心腦寧片大、中、小劑量組大鼠分別灌服大、中、小劑量的心腦寧片混懸液 (1.5、0.75、0.375 g/kg，用 0.5%CMC 配成 75、37.5、18.8 mg/mL 的混懸液，2 mL/100 g);硝苯地平片組大鼠灌服硝苯地平片混懸液(30 mg/kg，用 0.5%CMC 配成1.5 mg/mL 的混懸液，2 mL/100 g);腦心通膠囊組大鼠灌服腦心通膠囊混懸液(0.8 g/kg，用 0.5%CMC 配成 40 mg/mL的混懸液，2 mL/100 g);空白對(duì)照組大鼠灌服等容積的0.5%CMC。每日給藥1次，連續(xù)給藥7 d。

1.2.3 模型制備 于最后1次給藥后1 h，每組大鼠用水合氯醛麻醉，自左側(cè)第3～4肋間開(kāi)胸，用開(kāi)胸器固定，暴露心臟，于肺動(dòng)脈圓錐及左心房找出冠狀動(dòng)脈左前降支(LAD)，在距起點(diǎn)2～3 mm處穿一“0”號(hào)線結(jié)扎，看到心臟顏色變?yōu)榛野咨暈榻Y(jié)扎成功，造成心肌缺血?？瞻讓?duì)照組不結(jié)扎。完成上述步驟后，將心臟送回胸腔，擠出胸腔內(nèi)血液和氣體，立即縫合胸壁，整個(gè)手術(shù)在1 min內(nèi)完成。

1.3 觀察指標(biāo)及方法 缺血2 h后，進(jìn)行腹主動(dòng)脈取血，3 000 r/min離心10 min，取血清，備用。

1.3.1 CK測(cè)定 按說(shuō)明書(shū)操作，計(jì)算公式:血清中CK活力(U/mL)=(測(cè)定管OD值-測(cè)定空白管OD值)/(標(biāo)準(zhǔn)管OD值-標(biāo)準(zhǔn)空白管OD值)×標(biāo)準(zhǔn)品活力(4×35 U/mL)

1.3.2 LDH測(cè)定 按說(shuō)明書(shū)操作，計(jì)算公式:血清中LDH活力(U/L)=(測(cè)定管OD值-測(cè)定空白管OD值)/(標(biāo)準(zhǔn)管 OD值 -標(biāo)準(zhǔn)空白管 OD值)×標(biāo)準(zhǔn)管濃度(2 μmol/mL)×1 000 mL×測(cè)試前樣品稀釋倍數(shù)。

1.3.3 MDA測(cè)定 按說(shuō)明書(shū)操作，計(jì)算公式:血清(漿)中MDA含量(nmol/mL)=(測(cè)定管吸光度-測(cè)定空白管吸光度)/(標(biāo)準(zhǔn)管吸光度-標(biāo)準(zhǔn)空白管吸光度)×標(biāo)準(zhǔn)品濃度(10 nmol/mL)×樣本測(cè)試前稀釋倍數(shù)

1.3.4 SOD測(cè)定 按說(shuō)明書(shū)操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠血清CK、LDH比較 見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠血清CK、LDH比較 ±s

表1 各組大鼠血清CK、LDH比較 ±s

與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05;與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01

組 別 n 劑量(g/kg) CK(U/mL) LDH(U/L)10 0.375 0.809 ±0.186 9 003 ±1 074 10 - 0.392 ±0.059 6 321 ±508模型組 10 - 0.900±0.295* 9 384 ±1 189*硝苯地平片組 10 0.03 0.420±0.150△△ 6 624±304△△腦心通膠囊組 10 0.8 0.471±0.096△△ 6 881±539△△心腦寧片大劑量組 10 1.5 0.451±0.101△△ 6 979±505△△心腦寧片中劑量組 10 0.75 0.512±0.131△△ 7 862±1 232△心腦寧片小劑量組空白對(duì)照組

由表1可見(jiàn)，模型組大鼠血清CK、LDH均較空白對(duì)照組升高(P＜0.05)，說(shuō)明造模成功。硝苯地平片組、腦心通膠囊組、心腦寧片大劑量組及心腦寧片中劑量組大鼠血清 CK、LDH 均較模型組降低(P ＜0.05，P ＜0.01)，硝苯地平片組、腦心通膠囊組、心腦寧片大劑量組及心腦寧片中劑量組組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.2 各組大鼠MDA、SOD比較 見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠MDA、SOD比較 ±s

表2 各組大鼠MDA、SOD比較 ±s

與空白對(duì)照組比較，*P＜0.05;與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01;與心腦寧片大劑量組比較，#P ＜0.05

組 別 n 劑量(g/kg)MDA(nmol/mL) SOD(U/mL)空白對(duì)照組10 - 7.098 ±1.892 183.8 ±5.9模型組 10 - 11.658 ±1.459* 155.8 ±7.1*硝苯地平片組 10 0.03 8.829 ±2.011△△# 171.3 ±9.0△△#腦心通膠囊組 10 0.8 8.220 ±2.762△△# 168.1 ±8.5△△#心腦寧片大劑量組 10 1.5 8.122 ±1.801△△ 180.2 ±8.8△△心腦寧片中劑量組 10 0.75 8.829 ±0.948△△# 178.8 ±9.8△△#心腦寧片小劑量組 10 0.375 9.908 ±0.879△△# 172.4 ±13.2△#

由表2可見(jiàn)，模型組大鼠MDA較空白對(duì)照組升高(P ＜0.05)，SOD 較空白對(duì)照組降低(P ＜0.05)，說(shuō)明造模成功。硝苯地平片組、腦心通膠囊組、心腦寧片組大鼠MDA均較模型組降低(P＜0.05)，SOD均較模型組升高(P＜0.05)。心腦寧片大劑量組降低MDA、升高SOD作用更明顯(P ＜0.05)。

3 討論

心腦寧片是根據(jù)中醫(yī)理論和現(xiàn)代藥理研究成果擬定的院內(nèi)協(xié)定處方。方中以人參為君藥，調(diào)中，止消渴，通血脈，破堅(jiān)疾，令人不忘，以其主補(bǔ)五臟，安精神，定魂魄;當(dāng)歸為臣藥，活血養(yǎng)血;川芎為佐藥，其性善降結(jié)氣，以走肝經(jīng)，氣中之血藥，通行十二經(jīng)，具有理氣活血化瘀的作用;黃芪為使藥，補(bǔ)中益氣。四藥合用，活血化瘀益氣，達(dá)到扶正祛邪之目的。本制劑還具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、改善心肌供血和心肌代謝及縮小梗死面積的作用，而且還具有增強(qiáng)心肌收縮力和改善微循環(huán)、產(chǎn)生抗血栓和溶血栓作用。

CK通常存在于動(dòng)物的心臟、肌肉及腦等組織的細(xì)胞漿和線粒體中，是一個(gè)與細(xì)胞內(nèi)能量運(yùn)轉(zhuǎn)、肌肉收縮、三磷酸腺苷(ATP)再生有直接關(guān)系的重要激酶，它可逆地催化肌酸與ATP之間的轉(zhuǎn)磷酰基反應(yīng)。心肌梗死發(fā)生時(shí)，CK水平迅速提高。LDH能催化丙酮酸與乳酸之間的氧化還原反應(yīng)，屬于氫轉(zhuǎn)移酶，LDH活性增強(qiáng)，有助于清除氧自由基，減少心肌組織的缺血缺氧損傷，用藥組LDH活性增強(qiáng)，說(shuō)明抗心肌缺血功能增強(qiáng)。MDA是膜脂過(guò)氧化的終產(chǎn)物之一，其含量高低可以作為考察細(xì)胞受到脅迫嚴(yán)重程度的指標(biāo)之一，它的主要傷害是導(dǎo)致膜脂過(guò)氧化，損傷生物膜結(jié)構(gòu)，主要是細(xì)胞質(zhì)膜，使得細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能上受到損傷，改變膜的通透性，從而影響一系列生理生化反應(yīng)的正常進(jìn)行，還會(huì)引起蛋白質(zhì)、核酸等生命大分子的交聯(lián)聚合，且具有細(xì)胞毒性。SOD具有特殊的生理活性，是生物體內(nèi)清除自由基的首要物質(zhì)?？蓪?duì)抗與阻斷因氧自由基對(duì)細(xì)胞造成的損害，并及時(shí)修復(fù)受損細(xì)胞，復(fù)原因自由基造成的對(duì)細(xì)胞傷害。測(cè)定CK、LDH、MDA、SOD可反映心肌缺血后機(jī)體清除自由基的能力和能量代謝情況。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果提示，心腦寧片有顯著改善心肌缺血的作用，為臨床應(yīng)用提供了依據(jù)。

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