文∕劉 琴 成玉梅 周亞平 張利坤 李 春 施開平
(1云南省昆明市動物衛(wèi)生監(jiān)督所;2云南省昆明市奶業(yè)協(xié)會)
近年來,我國奶牛生產(chǎn)性能(DHI)測定工作不斷深入,參測牛只數(shù)量每年呈上升的趨勢,這一方面是由于國家對該項工作的重視,不斷加大投入;另一方面是奶牛場(奶農(nóng))對DHI測定工作的重要性認(rèn)識不斷加強(qiáng),自覺參加測定。DHI測定工作的意義不僅體現(xiàn)在全國層面上種公牛的選育上,而且體現(xiàn)在為奶牛場奶牛飼養(yǎng)管理提供理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支撐,因此數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性意義重大。云南省昆明市自2009年開展DHI測定工作以來,參測奶牛累計達(dá)到3 萬余頭,成效顯著。但是由于奶牛場分布較廣,送樣時間較長,數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性會受到樣品保存條件(溫度)和時間的影響。為探討生鮮乳樣品保存條件對DHI測定結(jié)果的影響,為DHI采樣工作提供依據(jù),昆明市動物衛(wèi)生監(jiān)督所與昆明市奶業(yè)協(xié)會通過對樣品在常溫和冷藏條件下連續(xù)測定,研究了不同保存條件和時間對DHI測定結(jié)果的影響。具體結(jié)果如下。
CombiFoss? FT+牛奶體細(xì)胞成分聯(lián)機(jī)分析儀(FOSS中國),水浴鍋(北京中興)。
在昆明市晉寧縣6 個奶牛場共采集6 份樣品,每份樣品1 000 mL,加入防腐劑(每50 mL加入1 粒專用防腐劑,其主要成分為溴硝基丙二醇)。樣品采集后分成2 份,1 份存于4 ℃,1 份存于常溫。測定前水浴至42 ℃,分別檢測脂肪含量、蛋白質(zhì)含量、乳糖含量、體細(xì)胞數(shù)、尿素氮值,連續(xù)測定7或8 天。
脂肪含量、蛋白質(zhì)含量、乳糖含量采用全國畜牧總站DHI標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備實驗室提供的標(biāo)準(zhǔn)品定標(biāo),每月1 次,每次檢測前清洗調(diào)零,并用校核樣檢測;體細(xì)胞數(shù)用FOSS中國的FMA校核;尿素氮自校準(zhǔn)。
樣品42 ℃水浴加熱25~30 min,測定脂肪含量、蛋白質(zhì)含量、乳糖含量、體細(xì)胞數(shù)、尿素氮值5 個指標(biāo)。常溫保存的樣品連續(xù)測定7 天,冷藏保存的樣品連續(xù)測定8 天。
用EXCEL 2007 進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,用SPSS 16.0 進(jìn)行配對T檢驗,以0.05為顯著性判定標(biāo)準(zhǔn)。
不同保存條件對脂肪含量的影響均不明顯。6 個樣品連續(xù)測定7 天脂肪含量情況見表1、表2,連續(xù)測定值與第1天測定結(jié)果的T值見表3。從表3可以看出,2 種保存條件連續(xù)測定結(jié)果與第1天的T值均大于0.05,表明差異不顯著。常溫條件下,脂肪含量的變化幅度較大,6 個樣品7 天的測定值,與第一天的絕對差均值為-0.03~0.06;而冷藏條件下,連續(xù)測定8 天,絕對差均值為-0.01~0.02,差異很小。
不同保存條件下蛋白質(zhì)含量的情況見表4、表5,T值見表6。可以看出,常溫保存條件下,T值均大于0.05,但檢測值絕對差較大,如1號樣品第7天與第1天的差值達(dá)到0.09 個百分點,4號樣品第6天與第1天的差值較大,達(dá)到0.23 個百分點。而在冷藏條件下,第4天、第6天的結(jié)果與第1天有顯著差異,T值分別為0.025和0.01,而其它日期的T值均大于0.05,但絕對差值較小,均在-0.01~0.03 個百分點以內(nèi)。常溫保存條件下,在4 天之內(nèi),6 個樣品的絕對差均值在0.03 個百分點以內(nèi),而第5天之后,樣品的絕對差均值都超過了0.04 個百分點。
表1 常溫條件下連續(xù)7 天測定的脂肪含量 單位:%
表2 4 ℃冷藏條件下連續(xù)8 天測定的脂肪含量 單位:%
表3 保存條件對脂肪含量的影響(T值)
表4 常溫條件下連續(xù)7 天測定的蛋白質(zhì)含量 單位:%
表5 4 ℃冷藏條件下連續(xù)8 天測定的蛋白質(zhì)含量 單位:%
表6 保存條件對蛋白質(zhì)含量的影響(T值)
不同保存條件下乳糖含量的情況見表7、表8,T值見表9。常溫保存條件下,T值均大于0.05,差異不顯著,但從數(shù)值上來看,乳糖含量差異較大,且呈降低的趨勢。如1號樣品第1天與第3天相差0.06 個百分點,與第7天相差0.14 個百分點;而4號樣品第1天與第2天相差達(dá)到0.1 個百分點,與第6天相差0.45 個百分點,這可能與樣品本身有關(guān)。在冷藏條件下,乳糖含量值變化較小,6 個樣品連續(xù)測定8 天,檢測值與第1天的絕對差均值在-0.01~0.02 個百分點。上述數(shù)據(jù)說明,冷藏條件下,乳糖含量值較穩(wěn)定。
保存條件對體細(xì)胞數(shù)的影響較大,結(jié)果見表10、表11,T值見表12。常溫條件下,在前3 天之內(nèi),6 個樣品體細(xì)胞數(shù)絕對差均值在10 萬個/mL以內(nèi);第4天以后,絕對差均值則超過了10 萬個/mL;第5天后,體細(xì)胞數(shù)與第1天的結(jié)果差異極顯著(T值小于0.05),體細(xì)胞數(shù)隨保存時間的延長持續(xù)下降,在第7天時下降幅度接近50%。而在冷藏條件下,體細(xì)胞數(shù)相對穩(wěn)定,在試驗期內(nèi)T值均大于0.05,表明差異不顯著;連續(xù)測定8 天,6 個樣品絕對差值都在15 萬個/mL以內(nèi),而絕對差均值在4 萬個/mL以內(nèi)。
表7 常溫條件下連續(xù)7 天測定的乳糖含量 單位:%
表8 冷藏條件下連續(xù)8 天測定的乳糖含量
表9 保存條件對乳糖含量的影響(T值)
表10 常溫條件下連續(xù)7 天測定的體細(xì)胞數(shù) 單位:萬個/mL
表11 冷藏條件下連續(xù)8 天測定的體細(xì)胞數(shù) 單位:萬個/mL
表12 保存條件對體細(xì)胞數(shù)的影響(T值)
保存條件對尿素氮的影響見表13、表14,T值見表15。常溫條件下,T值均大于0.05,表明差異不顯著,但是尿素氮值忽高忽低,差異較大(1號和5號樣品第1天和第3天差異達(dá)到1.4 mg/100 mL,6號樣品第1天和第3天的差異達(dá)到2.5 mg/100 mL)。而冷藏條件下,第1天和第4天,第1天和第7天尿素氮測定值的T值均小于0.05,表明差異顯著,但規(guī)律性不強(qiáng)。總體上來說,不論是常溫或是冷藏條件,尿素氮指標(biāo)值均不穩(wěn)定,采樣后要及時檢測。
常溫保存時,樣品脂肪含量在第2天升高,6 個樣品絕對差均值最高達(dá)到0.06 個百分點,然后脂肪含量檢測值逐漸下降,但規(guī)律性不強(qiáng),差異不顯著,可能是樣品本身的問題所致。冷藏保存對樣品脂肪含量的影響不大,7 天之內(nèi)對檢測結(jié)果的影響在0.02 個百分點之內(nèi)。
常溫保存情況下,連續(xù)測定7 天,樣品的蛋白質(zhì)含量與第1天的T值都在0.05以上;第5天時,6 個樣品的絕對差均值為0.06 個百分點,說明保存期超過5 天時,差異較大。而冷藏保存條件下,第4天、第6天的結(jié)果與第1天有顯著差異,T值分別為0.025和0.01,但由于第5天、第7天和第8天的差異不顯著,連續(xù)測定8天,絕對差均值都在0.03 個百分點以內(nèi),說明差異可以忽略不計。
表13 常溫條件下連續(xù)7 天測定的尿素氮值 單位:mg/100 mL
表14 冷藏條件下連續(xù)測定8 天的尿素氮值 單位:mg/100 mL
表15 保存條件對尿素氮的影響(T值)
常溫保存時,連續(xù)測定7 天乳糖含量T值都在0.05以上,但是第5天之后6 個樣品的絕對差均值達(dá)到0.05 個百分點。而冷藏保存條件下,雖然在第3天時差異極顯著(T值為0.01),但隨后的幾天內(nèi),T值均大于0.05,連續(xù)測定8 天,6 個樣品絕對差均值都在0.02 個百分點以內(nèi),說明差異主要來自樣品本身。
常溫保存時,在第2天和第3天,測定的體細(xì)胞數(shù)的絕對差均值在10 萬個/mL以內(nèi),第4 天后,6 個樣品的絕對差均值都在10 萬個/mL以上,且在第5天后檢測值的T值都小于0.05,說明體細(xì)胞數(shù)變化顯著。而冷藏條件下,連續(xù)測定8 天,6 個樣品的絕對差均值都在5 萬個/mL以內(nèi),說明冷藏條件下樣品可以保存7天以上。
不論是常溫或冷藏保存,尿素氮測定值均不穩(wěn)定,規(guī)律性不強(qiáng),忽高忽低,原因尚不明確。常溫條件下,保存至第7天,尿素氮測定值的絕對差均值超過了2.0 mg/mL;冷藏條件下,保存至第8天,尿素氮測定值的絕對差均值也達(dá)到了2.0 mg/mL。
5.1 常溫保存條件下,樣品穩(wěn)定性不如冷藏條件保存,因此樣品采集后應(yīng)盡量冷藏保存。檢測脂肪含量、蛋白質(zhì)含量、乳糖含量時,如果常溫保存,最好在4 天之內(nèi)測定完畢,如果需要長途運(yùn)輸,要有冷鏈措施;如果冷藏保存,至少可以保存8 天以上。
5.2 保存條件對體細(xì)胞數(shù)的影響較大。常溫條件下,隨時間的延長,體細(xì)胞數(shù)下降,冷藏條件下也如此,但下降幅度較小。檢測體細(xì)胞數(shù)時,常溫保存樣品要在3天之內(nèi)檢測,冷藏條件下可以保存至少7 天。
5.3 測定尿素氮時,由于其很不穩(wěn)定,樣品采集以后最好能在2 天內(nèi)測定完畢;超過3 天,尿素氮指標(biāo)變化可能會較大,導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。C