樣品保存條件對DHI測定中乳成分、體細(xì)胞和尿素氮的影響

文∕劉 琴 成玉梅 周亞平 張利坤 李 春 施開平

（1云南省昆明市動物衛(wèi)生監(jiān)督所；2云南省昆明市奶業(yè)協(xié)會）

近年來，我國奶牛生產(chǎn)性能（DHI）測定工作不斷深入，參測牛只數(shù)量每年呈上升的趨勢，這一方面是由于國家對該項工作的重視，不斷加大投入；另一方面是奶牛場（奶農(nóng)）對DHI測定工作的重要性認(rèn)識不斷加強(qiáng)，自覺參加測定。DHI測定工作的意義不僅體現(xiàn)在全國層面上種公牛的選育上，而且體現(xiàn)在為奶牛場奶牛飼養(yǎng)管理提供理論依據(jù)和數(shù)據(jù)支撐，因此數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性意義重大。云南省昆明市自2009年開展DHI測定工作以來，參測奶牛累計達(dá)到3 萬余頭，成效顯著。但是由于奶牛場分布較廣，送樣時間較長，數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性會受到樣品保存條件（溫度）和時間的影響。為探討生鮮乳樣品保存條件對DHI測定結(jié)果的影響，為DHI采樣工作提供依據(jù)，昆明市動物衛(wèi)生監(jiān)督所與昆明市奶業(yè)協(xié)會通過對樣品在常溫和冷藏條件下連續(xù)測定，研究了不同保存條件和時間對DHI測定結(jié)果的影響。具體結(jié)果如下。

1 儀器和材料

1.1 儀器

CombiFoss? FT+牛奶體細(xì)胞成分聯(lián)機(jī)分析儀（FOSS中國），水浴鍋（北京中興）。

1.2 樣品采集與處理

在昆明市晉寧縣6 個奶牛場共采集6 份樣品，每份樣品1 000 mL，加入防腐劑（每50 mL加入1 粒專用防腐劑，其主要成分為溴硝基丙二醇）。樣品采集后分成2 份，1 份存于4 ℃，1 份存于常溫。測定前水浴至42 ℃，分別檢測脂肪含量、蛋白質(zhì)含量、乳糖含量、體細(xì)胞數(shù)、尿素氮值，連續(xù)測定7或8 天。

2 方法

2.1 儀器校準(zhǔn)

脂肪含量、蛋白質(zhì)含量、乳糖含量采用全國畜牧總站DHI標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)制備實驗室提供的標(biāo)準(zhǔn)品定標(biāo)，每月1 次，每次檢測前清洗調(diào)零，并用校核樣檢測；體細(xì)胞數(shù)用FOSS中國的FMA校核；尿素氮自校準(zhǔn)。

2.2 樣品測定

樣品42 ℃水浴加熱25～30 min，測定脂肪含量、蛋白質(zhì)含量、乳糖含量、體細(xì)胞數(shù)、尿素氮值5 個指標(biāo)。常溫保存的樣品連續(xù)測定7 天，冷藏保存的樣品連續(xù)測定8 天。

2.3 數(shù)據(jù)分析

用EXCEL 2007 進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，用SPSS 16.0 進(jìn)行配對T檢驗，以0.05為顯著性判定標(biāo)準(zhǔn)。

3 結(jié)果

3.1 保存條件對脂肪含量的影響

不同保存條件對脂肪含量的影響均不明顯。6 個樣品連續(xù)測定7 天脂肪含量情況見表1、表2，連續(xù)測定值與第1天測定結(jié)果的T值見表3。從表3可以看出，2 種保存條件連續(xù)測定結(jié)果與第1天的T值均大于0.05，表明差異不顯著。常溫條件下，脂肪含量的變化幅度較大，6 個樣品7 天的測定值，與第一天的絕對差均值為-0.03～0.06；而冷藏條件下，連續(xù)測定8 天，絕對差均值為-0.01～0.02，差異很小。

3.2 保存條件對蛋白質(zhì)含量的影響

不同保存條件下蛋白質(zhì)含量的情況見表4、表5，T值見表6。可以看出，常溫保存條件下，T值均大于0.05，但檢測值絕對差較大，如1號樣品第7天與第1天的差值達(dá)到0.09 個百分點，4號樣品第6天與第1天的差值較大，達(dá)到0.23 個百分點。而在冷藏條件下，第4天、第6天的結(jié)果與第1天有顯著差異，T值分別為0.025和0.01，而其它日期的T值均大于0.05，但絕對差值較小，均在-0.01～0.03 個百分點以內(nèi)。常溫保存條件下，在4 天之內(nèi)，6 個樣品的絕對差均值在0.03 個百分點以內(nèi)，而第5天之后，樣品的絕對差均值都超過了0.04 個百分點。

表1 常溫條件下連續(xù)7 天測定的脂肪含量 單位：%

表2 4 ℃冷藏條件下連續(xù)8 天測定的脂肪含量 單位：%

表3 保存條件對脂肪含量的影響（T值）

表4 常溫條件下連續(xù)7 天測定的蛋白質(zhì)含量 單位：%

表5 4 ℃冷藏條件下連續(xù)8 天測定的蛋白質(zhì)含量 單位：%

表6 保存條件對蛋白質(zhì)含量的影響（T值）

3.3 保存條件對乳糖含量的影響

不同保存條件下乳糖含量的情況見表7、表8，T值見表9。常溫保存條件下，T值均大于0.05，差異不顯著，但從數(shù)值上來看，乳糖含量差異較大，且呈降低的趨勢。如1號樣品第1天與第3天相差0.06 個百分點，與第7天相差0.14 個百分點；而4號樣品第1天與第2天相差達(dá)到0.1 個百分點，與第6天相差0.45 個百分點，這可能與樣品本身有關(guān)。在冷藏條件下，乳糖含量值變化較小，6 個樣品連續(xù)測定8 天，檢測值與第1天的絕對差均值在-0.01～0.02 個百分點。上述數(shù)據(jù)說明，冷藏條件下，乳糖含量值較穩(wěn)定。

3.4 保存條件對體細(xì)胞數(shù)的影響

保存條件對體細(xì)胞數(shù)的影響較大，結(jié)果見表10、表11，T值見表12。常溫條件下，在前3 天之內(nèi)，6 個樣品體細(xì)胞數(shù)絕對差均值在10 萬個/mL以內(nèi)；第4天以后，絕對差均值則超過了10 萬個/mL；第5天后，體細(xì)胞數(shù)與第1天的結(jié)果差異極顯著（T值小于0.05），體細(xì)胞數(shù)隨保存時間的延長持續(xù)下降，在第7天時下降幅度接近50%。而在冷藏條件下，體細(xì)胞數(shù)相對穩(wěn)定，在試驗期內(nèi)T值均大于0.05，表明差異不顯著；連續(xù)測定8 天，6 個樣品絕對差值都在15 萬個/mL以內(nèi)，而絕對差均值在4 萬個/mL以內(nèi)。

表7 常溫條件下連續(xù)7 天測定的乳糖含量 單位：%

表8 冷藏條件下連續(xù)8 天測定的乳糖含量

表9 保存條件對乳糖含量的影響（T值）

表10 常溫條件下連續(xù)7 天測定的體細(xì)胞數(shù) 單位：萬個/mL

表11 冷藏條件下連續(xù)8 天測定的體細(xì)胞數(shù) 單位：萬個/mL

表12 保存條件對體細(xì)胞數(shù)的影響（T值）

3.5 保存條件對尿素氮的影響

保存條件對尿素氮的影響見表13、表14，T值見表15。常溫條件下，T值均大于0.05，表明差異不顯著，但是尿素氮值忽高忽低，差異較大（1號和5號樣品第1天和第3天差異達(dá)到1.4 mg/100 mL，6號樣品第1天和第3天的差異達(dá)到2.5 mg/100 mL）。而冷藏條件下，第1天和第4天，第1天和第7天尿素氮測定值的T值均小于0.05，表明差異顯著，但規(guī)律性不強(qiáng)。總體上來說，不論是常溫或是冷藏條件，尿素氮指標(biāo)值均不穩(wěn)定，采樣后要及時檢測。

4 討論

4.1 脂肪含量

常溫保存時，樣品脂肪含量在第2天升高，6 個樣品絕對差均值最高達(dá)到0.06 個百分點，然后脂肪含量檢測值逐漸下降，但規(guī)律性不強(qiáng)，差異不顯著，可能是樣品本身的問題所致。冷藏保存對樣品脂肪含量的影響不大，7 天之內(nèi)對檢測結(jié)果的影響在0.02 個百分點之內(nèi)。

4.2 蛋白質(zhì)含量

常溫保存情況下，連續(xù)測定7 天，樣品的蛋白質(zhì)含量與第1天的T值都在0.05以上；第5天時，6 個樣品的絕對差均值為0.06 個百分點，說明保存期超過5 天時，差異較大。而冷藏保存條件下，第4天、第6天的結(jié)果與第1天有顯著差異，T值分別為0.025和0.01，但由于第5天、第7天和第8天的差異不顯著，連續(xù)測定8天，絕對差均值都在0.03 個百分點以內(nèi)，說明差異可以忽略不計。

表13 常溫條件下連續(xù)7 天測定的尿素氮值 單位：mg/100 mL

表14 冷藏條件下連續(xù)測定8 天的尿素氮值 單位：mg/100 mL

表15 保存條件對尿素氮的影響（T值）

4.3 乳糖含量

常溫保存時，連續(xù)測定7 天乳糖含量T值都在0.05以上，但是第5天之后6 個樣品的絕對差均值達(dá)到0.05 個百分點。而冷藏保存條件下，雖然在第3天時差異極顯著（T值為0.01），但隨后的幾天內(nèi)，T值均大于0.05，連續(xù)測定8 天，6 個樣品絕對差均值都在0.02 個百分點以內(nèi)，說明差異主要來自樣品本身。

4.4 體細(xì)胞數(shù)

常溫保存時，在第2天和第3天，測定的體細(xì)胞數(shù)的絕對差均值在10 萬個/mL以內(nèi)，第4 天后，6 個樣品的絕對差均值都在10 萬個/mL以上，且在第5天后檢測值的T值都小于0.05，說明體細(xì)胞數(shù)變化顯著。而冷藏條件下，連續(xù)測定8 天，6 個樣品的絕對差均值都在5 萬個/mL以內(nèi)，說明冷藏條件下樣品可以保存7天以上。

4.5 尿素氮

不論是常溫或冷藏保存，尿素氮測定值均不穩(wěn)定，規(guī)律性不強(qiáng)，忽高忽低，原因尚不明確。常溫條件下，保存至第7天，尿素氮測定值的絕對差均值超過了2.0 mg/mL；冷藏條件下，保存至第8天，尿素氮測定值的絕對差均值也達(dá)到了2.0 mg/mL。

5 結(jié)論

5.1 常溫保存條件下，樣品穩(wěn)定性不如冷藏條件保存，因此樣品采集后應(yīng)盡量冷藏保存。檢測脂肪含量、蛋白質(zhì)含量、乳糖含量時，如果常溫保存，最好在4 天之內(nèi)測定完畢，如果需要長途運(yùn)輸，要有冷鏈措施；如果冷藏保存，至少可以保存8 天以上。

5.2 保存條件對體細(xì)胞數(shù)的影響較大。常溫條件下，隨時間的延長，體細(xì)胞數(shù)下降，冷藏條件下也如此，但下降幅度較小。檢測體細(xì)胞數(shù)時，常溫保存樣品要在3天之內(nèi)檢測，冷藏條件下可以保存至少7 天。

5.3 測定尿素氮時，由于其很不穩(wěn)定，樣品采集以后最好能在2 天內(nèi)測定完畢；超過3 天，尿素氮指標(biāo)變化可能會較大，導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)確。C