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    單純性單臍動(dòng)脈孕婦胎盤及臍帶組織中VEGF、eNOS蛋白的表達(dá)

    2014-10-08 09:06:08許雅娟翟閃閃劉月華羅曉華張瑩瑩

    許雅娟,翟閃閃,劉月華,羅曉華,張瑩瑩

    鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科 鄭州 450052

    目前關(guān)于單臍動(dòng)脈(single umbilical artery,SUA)與胎兒生長(zhǎng)受限、胎兒染色體異常、胎兒發(fā)育異常及出生后的生存質(zhì)量的相關(guān)性研究逐漸引起了產(chǎn)科、新生兒科及超聲科等科室的重視[1-4]。人類正常臍帶中有兩條動(dòng)脈一條靜脈,臍帶中僅有一條動(dòng)脈的稱為 SUA。單純性單臍動(dòng)脈(isolated single umbilical artery,ISUA)是指不合并畸形的SUA,胎兒結(jié)局相對(duì)復(fù)雜性SUA較好。有研究[5]表明胎盤組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、內(nèi)皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)的表達(dá)異??捎绊懱ケP循環(huán),進(jìn)而導(dǎo)致血氧交換障礙,從而影響胎兒生長(zhǎng)發(fā)育。該研究通過(guò)測(cè)定VEGF及eNOS在胎盤和臍帶中的表達(dá),分析ISUA胎兒生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中胎盤循環(huán)的供血供氧情況。

    1 對(duì)象與方法

    1.1 研究對(duì)象 選取2012年1月至2013年5月鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院ISUA足月分娩的孕婦37例為ISUA組,選取同期正常足月分娩孕婦40例作正常對(duì)照。2組孕婦均無(wú)高血壓、腎病、糖尿病及其他合并癥。對(duì)每個(gè)孕婦娩出的胎盤及新生兒分別進(jìn)行稱重,記錄數(shù)值。

    1.2 胎盤及臍帶組織中VEGF、eNOS表達(dá)的檢測(cè)采用免疫組化SP方法。取1 cm×1 cm×1 cm母面胎盤組織,取距離胎盤10 cm處的臍帶組織1 cm,多聚甲醛固定,常規(guī)脫水,石蠟包埋后4 μm厚度連續(xù)切片備用。即用型VEGF鼠抗人單克隆抗體和免疫組化Max Visionx試劑盒(鼠/兔)購(gòu)自福州邁新公司,eNOS兔抗人多克隆抗體(稀釋150倍使用)購(gòu)自武漢博士德生物工程公司。將組織切片脫蠟至水,微波爐抗原修復(fù),H2O2封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶,滴加一抗4℃過(guò)夜,按照Max Visionx試劑盒說(shuō)明加入二抗,DAB顯色,蘇木素復(fù)染,梯度乙醇脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片。用PBS液代替一抗作陰性對(duì)照,用已知陽(yáng)性切片作陽(yáng)性對(duì)照。

    1.3 結(jié)果判定 VEGF、eNOS蛋白均以細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為染色陽(yáng)性細(xì)胞。使用德國(guó)Lecia顯微照像系統(tǒng),每張切片選擇5個(gè)具有代表意義的高倍視野觀察eNOS、VEGF蛋白的分布及表達(dá)。采用上海山富科學(xué)儀器有限公司 Biosens Digital Imaging System V1.6圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析,以平均灰度值表示eNOS和VEGF蛋白的表達(dá)強(qiáng)度。

    1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0分析,ISUA組和正常對(duì)照組胎兒出生體重、胎盤質(zhì)量、胎盤和臍帶組織中eNOS和VEGF蛋白表達(dá)的比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)α=0.05。

    2 結(jié)果

    2.1 2組孕婦一般情況的比較 正常對(duì)照組孕婦娩出的新生兒體重及胎盤質(zhì)量均大于ISUA組,見(jiàn)表1。

    表1 2組孕婦年齡、孕周、胎兒出生體重和胎盤重量的比較

    2.2 2組胎盤及臍帶組織中VEGF、eNOS蛋白的表達(dá)情況 見(jiàn)表2和圖1。ISUA組和正常對(duì)照組胎盤和臍帶組織中eNOS、VEGF均有表達(dá)。胎盤組織中eNOS分布于絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞和絨毛血管內(nèi)皮細(xì)胞,VEGF主要分布于絨毛合體滋養(yǎng)細(xì)胞,其次是絨毛血管內(nèi)皮細(xì)胞和部分間質(zhì)。臍帶組織中,VEGF、eNOS主要在動(dòng)脈的內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)。

    表2 2組胎盤及臍帶組織中VEGF、eNOS的表達(dá)

    3 討論

    研究[6]表明部分SUA妊娠會(huì)合并胎兒臍血流和動(dòng)脈導(dǎo)管血流指標(biāo)異常,給母胎的血循環(huán)造成影響。該研究結(jié)果顯示ISUA組胎盤質(zhì)量和胎兒出生體重小于正常對(duì)照組,提示ISUA孕婦可能存在影響胎兒胎盤循環(huán)及胎兒生長(zhǎng)發(fā)育的因素。

    一氧化氮(nitric oxide,NO)是一種有效的血管舒張因子,對(duì)維持胎盤妊娠期間胎盤循環(huán)的低阻力高灌注狀態(tài)起著重要的作用。Sheppard等[7]認(rèn)為NO通過(guò)cGMP來(lái)控制子宮、胎盤的血流。eNOS是內(nèi)源性NO的重要限速酶,能正確反映NO的水平。正常妊娠時(shí)胎盤和臍帶組織中eNOS對(duì)NO的合成起著重要的調(diào)控作用。有報(bào)道[8-9]缺氧情況下胎兒胎盤循環(huán)呈高阻力,血管透壁壓力增加及血管應(yīng)切力的增加,刺激eNOS的表達(dá)增加。Lyall等[10]認(rèn)為胎盤eNOS表達(dá)增加是對(duì)胎盤高阻力和低灌注的一種代償反應(yīng)。該研究中eNOS在ISUA組胎盤及臍帶組織中呈高表達(dá),分析原因可能是ISUA的胎兒胎盤循環(huán)中存在缺氧情況,循環(huán)呈現(xiàn)高阻力和低灌注,作為低氧時(shí)機(jī)體的一種代償性保護(hù),刺激胎盤及臍帶組織eNOS表達(dá)增加,導(dǎo)致NO生成增加,從而舒張血管使血管阻力降低,滿足循環(huán)的血氧需求。

    圖1 2組胎盤及臍帶組織中VEGF(1)、eNOS(2)蛋白的表達(dá)(SP,×400)

    VEGF是內(nèi)皮細(xì)胞特異性的有絲分裂原,作為一個(gè)重要的血管形成因素,能促進(jìn)胎盤及臍帶新生血管的形成與重建,其生物學(xué)功能表現(xiàn)在:①促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂,誘導(dǎo)纖維蛋白溶解酶原的降解,參與細(xì)胞外蛋白水解和基底膜的降解,有利于血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移和增生。②增加血管通透性,促進(jìn)包括纖維蛋白原在內(nèi)的血漿蛋白的滲出,形成纖維素網(wǎng)絡(luò),為血管芽延伸生長(zhǎng)提供良好基質(zhì)。劉海意等[11]認(rèn)為滋養(yǎng)細(xì)胞因受到氧壓力的調(diào)控,在缺血缺氧狀態(tài)下可以使VEGF代償性的表達(dá)上調(diào)。Kimura等[12]發(fā)現(xiàn)NO具有類似低氧對(duì)VEGF的調(diào)節(jié)效應(yīng),NO通過(guò)與VEGF的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子靶向定位結(jié)合后,再與VEGF啟動(dòng)子調(diào)控元件結(jié)合,從而促進(jìn)VEGF的轉(zhuǎn)錄,使其表達(dá)上調(diào)。該研究中ISUA組胎盤及臍帶組織中VEGF表達(dá)高于正常對(duì)照組,原因可能是ISUA的胎兒胎盤循環(huán)中存在高阻力和低灌注的缺氧狀況,刺激機(jī)體代償性地上調(diào)VEGF的表達(dá),以促進(jìn)胎盤與臍帶的新生血管形成與重建,從而降低循環(huán)阻力;也可能是在缺氧情況下,胎兒胎盤循環(huán)代償性引起eNOS的增加,使組織產(chǎn)生更多的NO,更多的NO刺激VEGF表達(dá)上調(diào),從而改善循環(huán)血氧灌注。

    總之,ISUA胎兒胎盤循環(huán)中可能存在缺血缺氧情況,引起母胎物質(zhì)交換障礙,從而影響胎盤生長(zhǎng)發(fā)育及胎兒生長(zhǎng)發(fā)育。ISUA胎兒胎盤循環(huán)在低氧刺激下代償性地使VEGF與eNOS的表達(dá)增加,通過(guò)有效的調(diào)節(jié)機(jī)制,使胎兒胎盤循環(huán)的供血供氧可以達(dá)到胎兒生長(zhǎng)發(fā)育的基本需求,使ISUA孕婦達(dá)到基本滿意的妊娠結(jié)局。ISUA孕婦應(yīng)在嚴(yán)密監(jiān)測(cè)下妊娠,加強(qiáng)ISUA孕婦分娩過(guò)程監(jiān)護(hù)。嚴(yán)密隨訪胎兒出生以后生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程。該研究選取的樣本量較少,作者將進(jìn)一步對(duì)ISUA妊娠過(guò)程進(jìn)行更大樣本量的研究,從而指導(dǎo)ISUA孕婦的孕期保健,提高新生兒出生體重。

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