丁小瑩,郭長(zhǎng)青
鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院消化內(nèi)科 鄭州 450052
食管癌是我國最常見的惡性腫瘤之一,居腫瘤死亡的第4位,其發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多基因、多步驟相互作用的復(fù)雜過程。SASH1基因是編碼銜接蛋白的 SLY基因家族中的一員[1],F(xiàn)BXO32屬于FBX蛋白家族,二者均為新的候選抑癌基因,參與了許多惡性腫瘤的生物學(xué)行為,在結(jié)腸癌、胃癌、肺癌、黑色素瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤等多種腫瘤組織中的表達(dá)均下降[2-6]。作者檢測(cè)了食管鱗狀細(xì)胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)組織及正常食管黏膜組織中SASH1和FBXO32蛋白的表達(dá),探討二者與ESCC發(fā)生發(fā)展的關(guān)系及臨床意義。
1.1 標(biāo)本來源 選用鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院2012年2月至2013年3月胸外科手術(shù)中切除的食管癌標(biāo)本76例及相應(yīng)的正常食管黏膜組織(距癌組織邊緣的距離>5 cm),患者術(shù)前均未接受放化療或免疫治療,術(shù)后均經(jīng)病理證實(shí)為ESCC。76例ESCC患者中男57例,女19例;年齡43~74歲;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移29例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移47例;病理學(xué)分級(jí):低分化25例,中分化33例,高分化18例;按照國際抗癌聯(lián)盟(UICC)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行TNM分期:Ⅰ、Ⅱ期45例,Ⅲ、Ⅳ期31例。
1.2 SASH1和FBXO32蛋白的免疫組化染色 所有標(biāo)本均經(jīng)甲醛固定,石蠟包埋,連續(xù)切片。SASH1、FBXO32兔抗人多克隆抗體均購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司,使用時(shí)分別按1∶300和1∶200稀釋;免疫組化SP試劑盒及DAB顯色液均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。采用SP三步法,按照試劑盒說明進(jìn)行操作,DAB顯色,蘇木素復(fù)染,鹽酸乙醇分色。以PBS取代一抗作為陰性對(duì)照。
1.3 結(jié)果判定 由兩位病理醫(yī)師雙盲閱片,SASH1陽性判定標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)胞核中出現(xiàn)明顯的棕黃色顆粒,F(xiàn)BXO32陽性判定標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色或褐色顆粒。200倍視野下每張切片選10個(gè)代表區(qū),計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞,計(jì)算陽性細(xì)胞百分比。陽性程度的判斷標(biāo)準(zhǔn)如下。①按陽性細(xì)胞百分比計(jì)分:0為0分,<10%為1分,10% ~為2分,51% ~為 3分,≥75%為4分。②按染色強(qiáng)度計(jì)分:無染色為0分,淡黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分。兩項(xiàng)積分相乘,<3分為陰性,≥3分為陽性。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用 SPSS 11.0處理數(shù)據(jù)。應(yīng)用配對(duì)χ2檢驗(yàn)比較ESCC與正常食管黏膜組織中SASH1和FBXO32蛋白陽性表達(dá)率的差異,應(yīng)用χ2檢驗(yàn)比較不同人口學(xué)特征及臨床病理因素的ESCC患者SASH1和FBXO32蛋白陽性表達(dá)率的差異,應(yīng)用列聯(lián)系數(shù)評(píng)估ESCC組織中SASH1與FBXO32蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
2.1 ESCC和正常食管黏膜組織中 SASH1和FBXO32蛋白的表達(dá) 見圖1,表1、2。由表1、2知,SASH1蛋白在ESCC組織中的陽性表達(dá)率為35.5%,低于正常食管黏膜組織(53.9%);FBXO32蛋白在ESCC組織中的陽性表達(dá)率為36.8%,低于正常食管黏膜組織(55.3%)。
圖1 ESCC組織(A)及正常食管黏膜組織(B)中SASH1和FBXO32蛋白的表達(dá)(SP,×200)
表1 ESCC及正常食管黏膜組織中SASH1蛋白的表達(dá) 例
表2 ESCC及正常食管黏膜組織中FBXO32蛋白的表達(dá) 例
2.2 ESCC組織中SASH1和FBXO32蛋白的表達(dá)與患者一般人口學(xué)特征及臨床病理因素的關(guān)系ESCC組織中SASH1及FBXO32蛋白的表達(dá)與ESCC的分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),與性別、年齡無關(guān),見表3。
表3 ESCC組織中SASH1和FBXO32蛋白的表達(dá)與患者一般人口學(xué)特征及臨床病理因素的關(guān)系 陽性例數(shù)(%)
2.3 ESCC組織中SASH1和FBXO32蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性分析 見表4。ESCC組織中SASH1和FBXO32蛋白的表達(dá)呈正關(guān)聯(lián)(rP=0.417,P<0.001)。
表4 ESCC組織中SASH1和FBXO32蛋白表達(dá)的關(guān)聯(lián)性 例
SASH1基因是近年來發(fā)現(xiàn)的候選抑癌基因,除淋巴樣干細(xì)胞外,廣泛地表達(dá)于多種正常組織。SASH1蛋白包含1個(gè)SH3和2個(gè)SAM結(jié)構(gòu)域,通過這兩種作用多樣化的結(jié)構(gòu)域在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中發(fā)揮重要作用[7-8]。Zeller等[9]研究證明其在多種腫瘤組織中表達(dá)下調(diào)。有證據(jù)[6,10]證明 SASH1基因可以影響腫瘤細(xì)胞的成瘤能力及通過核質(zhì)穿梭而影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。Martini等[10]研究表明SASH1蛋白能夠抑制細(xì)胞轉(zhuǎn)移。以上研究表明SASH1基因與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。該研究表明SASH1在ESCC組織中低表達(dá),而在正常食管黏膜組織中高表達(dá),且SASH1蛋白與TNM分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),而與性別、年齡無關(guān)。說明SASH1在ESCC的發(fā)生發(fā)展及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用,與上述研究相符。
FBXO32蛋白是SCF泛素蛋白連接酶的重要組成部分,參與多種細(xì)胞過程,如信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞周期進(jìn)程和細(xì)胞泛素化等[11]。有研究[12]發(fā)現(xiàn) FBXO32作為凋亡調(diào)節(jié)基因可通過前存活信號(hào)進(jìn)行負(fù)性調(diào)節(jié)。此外,體內(nèi)外研究[13-15]表明,F(xiàn)BXO32通過TGF-β/SMAD4信號(hào)通路可增加腫瘤細(xì)胞凋亡,從而抑制腫瘤生長(zhǎng),其表達(dá)下調(diào)可加速惡性腫瘤的增殖、浸潤、轉(zhuǎn)移及廣泛播種等生物學(xué)行為。該研究顯示FBXO32在ESCC組織中低表達(dá),且與腫瘤TNM分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),而與性別、年齡無關(guān)。
此外,該研究結(jié)果還顯示,ESCC組織中SASH1與FBXO32蛋白的表達(dá)呈正關(guān)聯(lián),表明在ESCC的發(fā)生發(fā)展中SASH1與FBXO32具有協(xié)同作用。
綜上所述,ESCC中SASH1與FBXO32蛋白的表達(dá)降低,且均與腫瘤的TNM分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān),提示二者在ESCC的發(fā)生發(fā)展中具有協(xié)同作用;二者有望成為ESCC診斷、基因治療的新靶點(diǎn)以及預(yù)后判斷的重要指標(biāo)。
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