食管鱗狀細(xì)胞癌組織中GASC1蛋白的表達(dá)及意義*

李 娜，楊 薇，王新帥，孫佳春，孔國強(qiáng)，單探幽，賈瑞諾，原 翔，劉 剛#，高社干#

1)河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院腫瘤中心 洛陽 471003 2)國家電網(wǎng)許繼集團(tuán) 許昌 461000

食管鱗狀細(xì)胞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)是世界上最常見的六大惡性腫瘤之一，全世界每年約有30萬新診斷的ESCC病例，5 a生存率僅為10%左右。我國北部尤其是河南省是世界上ESCC發(fā)病率最高的地區(qū)，男、女平均發(fā)病率分別為161/10萬和103/10萬，局部地區(qū)高達(dá)500/10 萬[1－2]。盡管手術(shù)治療、圍手術(shù)期治療、放射治療和化學(xué)治療等已有長足進(jìn)展，但ESCC患者的生存期和生存質(zhì)量仍未顯著提高[3]，因此尋找新的ESCC診斷和治療途徑具有重要意義。鱗癌擴(kuò)增基因1(gene amplified in squamous cell carcinoma 1，GASC1)是2000年Yang等[4]利用原位雜交技術(shù)和DNA印記技術(shù)在ESCC細(xì)胞系KYSE150中成功克隆獲得的一種組蛋白去甲基化酶基因，其過表達(dá)可誘發(fā)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[5]。目前已發(fā)現(xiàn)GASC1在乳癌、前列腺癌、肺肉瘤樣癌和促結(jié)締組織增生性成神經(jīng)管細(xì)胞瘤組織中均出現(xiàn)異常擴(kuò)增或表達(dá)增加[6－8]。作者對ESCC組織中GASC1蛋白的表達(dá)與ESCC發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系進(jìn)行了探討。

1 材料與方法

1.1 一般資料 收集2011年2月至10月在河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院確診為原發(fā)性ESCC的患者82例，其中男48例，女34例，年齡40～70(55.0±2.5)歲，≤60歲52例，＞60歲30例。高分化30例，中低分化52例;T1、T2期29例，T3期53例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移56例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移26例;臨床分期Ⅰ、Ⅱ期61例，Ⅲ期21例?；颊咝g(shù)后規(guī)范治療。對手術(shù)切除標(biāo)本依次選取癌組織、相應(yīng)癌旁正常食管黏膜組織(距離癌組織5 cm以上)常規(guī)制片，4 μm厚連續(xù)切片，HE染色和免疫組化染色觀察。

1.2 GASC1蛋白的檢測 采用免疫組化SP法。鼠抗人GASC1多克隆抗體(一抗)購自美國R＆D公司，辣根酶標(biāo)記兔抗綿羊IgG抗體(二抗)購自武漢艾美捷生物技術(shù)有限公司，兔抗綿羊二步法免疫組化染色檢測試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。對組織切片進(jìn)行常規(guī)脫蠟、脫水、封閉血清，滴加一抗、二抗，DAB顯色、蘇木精復(fù)染、透明、封片，顯微鏡下觀察。結(jié)果判定[3]:細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色染色即為陽性細(xì)胞。按陽性細(xì)胞百分率評分:0% ～為0分，5% ～為1分，25% ～為2分，≥75%為3分。按細(xì)胞核著色程度評分:未著色為0分，淺黃色著色為1分，棕黃色著色為2分，棕褐色著色為3分。將兩項(xiàng)得分相乘，＜2分判為陰性(－)，≥2分為陽性(+)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 用SPSS 17.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。ESCC組織、配對癌旁正常食管黏膜組織中GASC1蛋白陽性表達(dá)率的比較采用配對χ2檢驗(yàn)，一致性分析采用Kappa檢驗(yàn);不同臨床病理特征ESCC患者GASC1蛋白表達(dá)的比較采用χ2檢驗(yàn);隨訪2 a，以死亡為終點(diǎn)事件，對GASC1蛋白陽性表達(dá)和陰性表達(dá)的ESCC患者進(jìn)行 Kaplan－Meier生存分析;檢驗(yàn)水準(zhǔn) α =0.05。

2 結(jié)果

2.1 ESCC和配對癌旁正常食管黏膜組織中GASC1蛋白表達(dá)的比較 見表1和圖1。GASC1蛋白在ESCC、配對癌旁正常食管黏膜組織中的陽性表達(dá)率分別為 51.2%(42/82)、42.7%(35/82)，二者比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但具有一致性。

表1 ESCC和配對癌旁正常食管黏膜組織中GASC1蛋白表達(dá)的比較 例

圖1 ESCC和配對癌旁正常食管黏膜組織中GASC1蛋白的表達(dá)(SP，×400)

2.2 不同臨床病理特征ESCC患者GASC1蛋白表達(dá)的比較 見表2。

表2 不同臨床病理特征ESCC患者GASC1蛋白表達(dá)的比較

2.3 GASC1蛋白表達(dá)與ESCC患者預(yù)后的關(guān)系分別對GASC1陽性表達(dá)和陰性表達(dá)的ESCC患者繪制Kaplan－Meier生存曲線，見圖2。兩條生存曲線差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=5.688，P=0.040)，GASC1陽性表達(dá)者 2 a生存率為 65.8%，低于GASC1陰性表達(dá)者的86.4%。

圖2 生存曲線

3 討論

GASC1蛋白作為一種組蛋白去甲基化酶，對于維持胚胎干細(xì)胞自我更新和分化潛能至關(guān)重要。有研究[7]顯示，GASC1通過H3K9對胚胎干細(xì)胞自我更新的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子(如 NOTCH1、NANOG、OCT4和Sox2等)進(jìn)行轉(zhuǎn)錄后修飾。NOTCH1是GASC1的目標(biāo)靶點(diǎn)，而NOTCH1信號(hào)通路是一個(gè)高度進(jìn)化保守的途徑，在胚胎發(fā)育以及成人自我更新組織中發(fā)揮重要功能[8]。目前已發(fā)現(xiàn)GASC1在12種人類正常組織中高水平表達(dá)，并且在多種類型的惡性腫瘤包括ESCC、乳癌、前列腺癌、肺轉(zhuǎn)移性肉瘤樣癌、原發(fā)性縱隔B細(xì)胞淋巴瘤和霍奇金淋巴瘤組織中也檢測到了GASC1的過表達(dá)[9]。食管鱗狀上皮是不斷更新的組織，因此，需要有一部分具有高度增殖分化潛能的正常干細(xì)胞或早期祖細(xì)胞來維持其不斷脫落更新的需要[10]。

該研究結(jié)果顯示，ESCC組織和相應(yīng)癌旁正常食管黏膜組織中GASC1蛋白的表達(dá)差異并無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但二者的表達(dá)具有一致性;進(jìn)一步分析結(jié)果表明，在T3期、中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床晚期(Ⅲ期)等惡性程度較高的ESCC組織中，GASC1蛋白陽性表達(dá)率較高;此外，生存分析結(jié)果顯示:GASC1陽性表達(dá)的ESCC患者術(shù)后2 a生存率為65.8%，而陰性表達(dá)者為86.4%。上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示GASC1可能不參與ESCC的早期癌變發(fā)生，但是對ESCC的分化、浸潤、轉(zhuǎn)移等晚期進(jìn)展過程有明顯作用，其機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

總之，GASC1過表達(dá)可能促進(jìn)了ESCC的發(fā)展，且提示預(yù)后不良。因此針對GASC1的分子靶向治療可在一定程度上阻止ESCC侵襲、轉(zhuǎn)移，進(jìn)而延長患者生存期。

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