• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    BRAF T1799A基因突變甲狀腺乳頭狀癌超聲特征

    2014-09-27 02:41:28,,,,
    精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)雜志 2014年3期
    關(guān)鍵詞:甲狀腺癌結(jié)節(jié)陰性

    ,,,,

    (青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科,山東 青島 266003)

    BRAF T1799A基因突變甲狀腺乳頭狀癌超聲特征

    叢小飛,趙世華,王顏剛,王萍,劉鑫

    (青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科,山東 青島 266003)

    目的研究甲狀腺乳頭狀癌(PTC)組織中BRAF T1799A突變與結(jié)節(jié)超聲特征之間的關(guān)系。方法選擇行甲狀腺切除的PTC病人160例,應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)及DNA直接測序法檢測新鮮組織標(biāo)本中BRAF T1799A基因突變情況,結(jié)合甲狀腺超聲檢查結(jié)果分析BRAF T1799A基因突變與結(jié)節(jié)邊界、鈣化、血流、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及結(jié)節(jié)大小等超聲特征的關(guān)系。結(jié)果160例PTC病人中,BRAF T1799A突變陽性者46例,突變率為28.75%。BRAF T1799A突變陽性病人血流豐富的比例大于陰性者(χ2=4.88,P<0.05);Logistic回歸分析顯示,血流豐富與BRAF T1799A突變呈正相關(guān)(OR=3.368,P<0.01);BRAF T1799A突變陽性組與陰性組其他超聲特征比較差異無顯著性(P>0.05)。結(jié)論P(yáng)TC組織中BRAF T1799A基因突變與結(jié)節(jié)血流關(guān)系密切,而與其他超聲特征無明顯相關(guān)性。

    甲狀腺腫瘤;BRAF;突變;超聲檢查

    近幾年來,甲狀腺乳頭狀癌(PTC)組織中的BRAF T1799A突變受到廣泛關(guān)注,現(xiàn)已明確該突變通過持續(xù)激活促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號通路,促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[1],且與PTC甲狀腺包膜外浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腫瘤TNM分期等特征密切相關(guān),通過多種分子機(jī)制影響甲狀腺腫瘤的生長方式。作為一種新的分子標(biāo)志物,BRAF T1799A突變在PTC的輔助診斷、預(yù)后評估、指導(dǎo)治療等方面起著重要作用[2]。研究結(jié)果已表明,PTC中BRAF T1799A突變與血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)過量表達(dá)密切相關(guān),且在PTC中發(fā)現(xiàn)了不同頻率的表皮生長因子受體(EGFR)的突變[3],而VEGF與EGFR的過量表達(dá)通過多種途徑共同參與腫瘤血管的生成過程, 在腫瘤生長、進(jìn)展與轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[4]。以上機(jī)制很有可能通過BRAF T1799A突變而引起PTC結(jié)節(jié)生長方式的改變,因此,本研究旨在探討B(tài)RAF T1799A突變與PTC結(jié)節(jié)超聲特征的關(guān)系。

    1 對象與方法

    1.1研究對象

    選擇2011—2013年于我院行甲狀腺切除術(shù)的PTC病人160例,其中男38例,女122例;平均年齡為(45.73±13.83)歲。病人均經(jīng)組織病理學(xué)檢查確診。標(biāo)本采集和病例收集經(jīng)過病人知情同意。癌結(jié)節(jié)按大小分為3級,<1 cm為微小癌,1~3 cm為中等大小癌,>3 cm為大結(jié)節(jié)癌;結(jié)節(jié)邊界分為清晰和欠清晰;回聲分為高、低及混合回聲;鈣化情況分為有和無鈣化;血流根據(jù)結(jié)節(jié)內(nèi)部及周邊的分布情況分為豐富(3個(gè)以上點(diǎn)狀血流、條狀血流信號、高阻動脈血流信號)和不豐富(血流分布未見異常、1~2個(gè)點(diǎn)狀血流);淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腺體外浸潤分為有和無轉(zhuǎn)移或浸潤。

    1.2方法

    1.2.1DNA提取和PCR擴(kuò)增 收集術(shù)后新鮮甲狀腺癌組織標(biāo)本50 mg,按照組織基因組DNA提取試劑盒說明書中的步驟提取各樣本中的基因組DNA,取基因組DNA 2 μL,用紫外線分光光度計(jì)檢測樣本吸光度(A)值,以測定所提取DNA的濃度和純度,所得合格DNA放于-20 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩2捎闷胀≒CR方法對BRAF基因第15外顯子進(jìn)行擴(kuò)增。目的基因片段為:ATATATTTCTTCAT-GAAGACCTCACAGTAAAAATAGGTGATTTT-GGTCTAGCTACAGTGAAATCTCGATGGAGT-GGGTCCCATCAGTTTGAACAGTTGTCTGGA-TCCATTTTGTGGATG,其上游引物序列:5′-GCT-TGCTCTGATAGGAAAATGAG-3′,下游引物序列:5′-GTAACTCAGCAGCATCTCAGG-3′。

    1.2.2產(chǎn)物測序 PTC的PCR反應(yīng)產(chǎn)物送至上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司進(jìn)行基因測序,分析各樣本中有無BRAF T1799A突變。

    1.2.3B超資料的分析 對160例病人的B超資料,包括癌結(jié)節(jié)邊界、回聲、鈣化、血流及結(jié)節(jié)數(shù)量、淋巴結(jié)大小、結(jié)節(jié)大小及腺體外浸潤情況等超聲表現(xiàn)進(jìn)行分析。

    1.2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,組間超聲特征差異比較采用卡方檢驗(yàn), BRAF T1799A與超聲表現(xiàn)的相關(guān)性采用Logistic回歸分析。

    2 結(jié) 果

    本文160例PTC標(biāo)本中BRAF T1799A突變陽性者46例,陰性者114例,陽性率為28.75%(圖1、2)。BRAF T1799A突變陽性與陰性組年齡分別為(47.85±12.94)、(44.88±14.15)歲,BRAF T1799A突變陽性組男女分別為9、41例,BRAF T1799A突變陰性男女分別為29、81例,兩組年齡、性別相比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。BRAF T1799A突變陽性組血流豐富的比例明顯高于陰性組(χ2=4.88,P<0.05)。見表1。Logistic回歸分析顯示,血流豐富與BRAF T1799A突變間呈正相關(guān)(OR=3.368,P<0.01),與結(jié)節(jié)的邊界、回聲、鈣化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及腺體外浸潤等超聲特征均無相關(guān)性(P>0.05)。見表2。

    圖1 BRAF第15外顯子1799位點(diǎn)基因分析圖譜

    圖2 BRAF第15外顯子1799位點(diǎn)T-A基因突變分析圖譜

    組別邊界清晰模糊回聲高低混合鈣化有無血流豐富否多結(jié)節(jié)是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有無腺體外浸潤有無結(jié)節(jié)大小小中大陽性133714723713272325252129113916286陰性3971710218525397156543476308034733

    3 討 論

    PTC是甲狀腺癌中最常見的一種類型,而BRAF T1799A突變主要發(fā)生于PTC,國內(nèi)外報(bào)道的突變率為28%~83%[5-6],本研究的突變率為28.75%,處在較低水平。BRAF基因是RET和RAS的下游蛋白激酶,是Ras/Raf/MEK/MAPK信號通路關(guān)鍵成分,其突變可持續(xù)激活MAPK信號通路,促進(jìn)細(xì)胞增殖,抑制細(xì)胞凋亡,形成腫瘤[7]。很多研究證實(shí),BRAF T1799A突變與高侵襲性的臨床及病理特征密切相關(guān),如淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腺體外浸潤、腫瘤分期等。XING等[8]研究認(rèn)為,檢測細(xì)針穿刺樣本的BRAF T1799A突變情況可有助于甲狀腺癌的診斷,經(jīng)細(xì)胞學(xué)診斷為PTC的病人應(yīng)在手術(shù)前檢測其穿刺樣本的BRAF T1799A突變情況,以指導(dǎo)手術(shù)方式。由此可見,BRAF T1799A突變在PTC中具有獨(dú)特而重要的地位。

    隨著超聲顯像成為甲狀腺腫瘤的主要診斷手段,二者的關(guān)系也受到關(guān)注。已有文獻(xiàn)報(bào)道,存在BRAF T1799A突變的PTC傾向于結(jié)節(jié)前后徑大于橫徑,鈣化的發(fā)生率也相對較高,但數(shù)據(jù)均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[9],國內(nèi)外對BRAF T1799A突變與結(jié)節(jié)大小關(guān)系的結(jié)論尚不一致[10-11]。本研究結(jié)果顯示,BRAF T1799A突變與結(jié)節(jié)大小無相關(guān)性,與國內(nèi)

    表2 BRAF突變陽性與陰性組多因素Logistic回歸分析

    報(bào)道結(jié)果一致。本研究結(jié)果顯示,BRAF T1799A突變陽性與陰性組在結(jié)節(jié)邊界、回聲、鈣化、結(jié)節(jié)大小、腺體外浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等超聲表現(xiàn)方面比較差異均無顯著性,提示PTC中BRAF T1799A突變陽性超聲表現(xiàn)尚無特異性。而Logistic多元逐步回歸分析顯示, BRAF T1799A突變與血流豐富相關(guān),其機(jī)制尚不明確。有研究結(jié)果顯示,BRAF突變與VEGF的過量表達(dá)密切相關(guān)[12],而VEGFR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與腫瘤周圍血管新生內(nèi)皮細(xì)胞的遷移、增殖、生存等過程,在腫瘤周圍血管生成中發(fā)揮重要的作用。XING等[13]研究顯示,EGFR在PTC中的突變率為5%,其突變與STAT、MAPK、PI3K/AKT活性增強(qiáng)密切相關(guān)。PTC組織中BRAF突變率高,EGFR突變與BRAF突變很可能具一定相關(guān)性。EGFR高表達(dá)可促進(jìn)血管生成和腫瘤細(xì)胞的增殖、黏附、侵襲和轉(zhuǎn)移, 抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡[14]。因此認(rèn)為,BRAF T1799A突變可能通過以上兩種機(jī)制引起結(jié)節(jié)周圍新生血管形成,使結(jié)節(jié)周圍血流信號增加,并增強(qiáng)了腫瘤的侵襲性。但是,具體機(jī)制還需深入探索。此外,由于沒有進(jìn)行大樣本量的試驗(yàn),且本研究中甲狀腺超聲檢查對結(jié)節(jié)血流結(jié)果的報(bào)告較粗略,沒有進(jìn)行分級,無具體血流阻力值,所以具有一定的局限性,未來還需要做更加細(xì)致的研究。本研究沒有發(fā)現(xiàn)其他超聲特征與BRAF T1799A突變有相關(guān)性,而很多研究證實(shí)BRAF T1799A突變與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及病理分期呈正相關(guān),分析其原因可能為超聲對淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的檢查不敏感,應(yīng)結(jié)合病理報(bào)告中淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)果進(jìn)行分析。

    綜上所述,認(rèn)為PTC中BRAF T1799A突變與結(jié)節(jié)血流具有相關(guān)性,可能會對甲狀腺結(jié)節(jié)穿刺活檢起到提示作用,并通過檢測穿刺標(biāo)本的BRAF T1799A突變情況,指導(dǎo)手術(shù)方式,評估預(yù)后。但超聲尚不能準(zhǔn)確提示BRAF T1799A突變的存在,兩者應(yīng)有效結(jié)合,以更好地指導(dǎo)PTC的診斷和治療。

    [1] PEYSSONNAUX C, EYCHENE A. The RAF/MEK/ERK pathway: new concepts of activation[J]. Biol Cell, 2001,93:53-62.

    [2] ADENIRAN A J, ZHU Z, GANDHI M, et al. Correlation between genetic alterations and microscopic features, clinical manifestations, and prognostic characteristics of thyroid papillary carcinomas[J]. Am J Surg Pathol, 2006,30:216-222.

    [3] MASAGO K, ASATO R, FUJITA S, et al. Epidermal growth factor receptor mutations in papillary thyroid carcinoma[J]. Int J Cancer, 2009, 124:2744-2749.

    [4] TAMAS P, SOLTI Z, BAUER P. Mechanism of epidermal growth factor Regulation of Vav2,a guanine nucleotide exchange factor for Rac [J]. J Biol Chem, 2003,278(2):5163-5171.

    [5] XING M Z. BRAF mutation in thyroid cancer[J]. Endocrine Related Cancer, 2005,12:245-262.

    [6] JO Y S, II S,SONG J H, et al. Influence of the BRAF V600E mutation on expression of vascular endothelial growth factor in papillary thyroid Cancer[J]. J Clin Endocrinol Metab, 2006,91:3667-3670.

    [7] KIM S K, SONG K H, LIM S D, et al. Clinical and pathological features and the BRAF (V600E) mutation in patients with papillary thyroid carcinoma with and without concurrent Hashimoto thyroiditis[J]. Thyroid, 2009,19(2):137-141.

    [8] XING M Z. BRAF mutation in papillary thyroid cancer: pa-thogenic role, molecular bases, and clinical implications[J]. Endocrine Reviews, 2007,28(7):742-762.

    [9] HWANG J, SHIN J H, HAN B K, et al. Papillary thyroid carcinoma with BRAF V600E mutation: sonographic prediction[J]. AJR, 2010, 194(5):W425-W430.

    [10] 王谷子,房世保,趙誠,等. 高頻及彩色多普勒超聲對結(jié)節(jié)性甲狀腺腫并發(fā)甲狀腺癌的診斷價(jià)值[J]. 青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2010,46(6):495-496.

    [11] 王斌, 錢孝綱. 超聲探討甲狀腺癌的血流動力學(xué)變化特征 [J]. 臨床超聲醫(yī)學(xué)雜志, 2011,13(4):227-228.

    [12] JO Y S, LI S, SONG J H, et al. Influence of the BRAF V600E mutation on expression of vascular endothelial growth factor in papillary thyroid cancer[J]. J Clin Endocrinol Metab, 2006,91:3667-3670.

    [13] XING M Z, DONG J L, XIE J W. Uncommon GNAQ, MMP8, AKT3, EGFR, and PIK3R1 mutations in thyroid cancers[J]. Endocr Pathol, 2011,22(2):97-102.

    [14] TAMAS P, SOLTI Z, BAUER P, et al. Mechanism of epidermal growth factor regulation of Vav2,a guanine nucleotide exchange factor for Rac [J]. J Biol Chem, 2003,278(2):5163-5171.

    (本文編輯 厲建強(qiáng))

    ULTRASOUNDFEATURESOFBRAFT1799AGENEMUTATIONPAPILLARYTHYROIDCARCINOMA

    CONGXiaofei,ZHAOShihua,WANGYan′gang,WANGPing,LIUXin

    (Department of Endocrinology, The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266003, China)

    ObjectiveTo investigate the correlation between BRAF T1799A gene mutation in tissue of papillary thyroid carcinoma (PTC) and the ultrasound features of the thyroid.MethodsOne hundred and sixty patients with PTC underwent thyroidectomy were enrolled in this study. Using polymerase chain reaction (PCR) and direct DNA sequencing, the BRAF T1799A gene mutation in fresh tissue samples was detected, which was analyzed by comparing with ultrasonographic results in terms of the boundary of nodules, calcification, blood supply, lymph node metastases and tumor size.ResultsOf the 160 patients,46 were BRAF T1799A positive, mutation rate being 28.75%. Those of positive BRAF T1799A showed a higher ratio of rich blood supply of their tumor samples than the negative ones (χ2=4.88,P<0.05). Logistic regression showed a positive correlation between BRAF T1799A mutation and rich blood flow (OR=3.368,P<0.01). The chi-square test showed no significant differences between BRAF T1799A mutation positive and negative groups in other sonographic features (P>0.05).ConclusionBRAF T1799A mutation in PTC is closely associated with the blood flow around the nodules but not with other sonographic features.

    thyroid neoplasms; BRAF; mutation; ultrasonography

    2013-08-31;

    2014-03-01

    山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2013WS0266)

    叢小飛(1986-),女,在讀碩士研究生。

    趙世華(1962-), 男,主任醫(yī)師,碩士生導(dǎo)師。

    R736.1

    A

    1008-0341(2014)03-0210-03

    猜你喜歡
    甲狀腺癌結(jié)節(jié)陰性
    肺結(jié)節(jié),不糾結(jié)
    中老年保健(2021年6期)2021-08-24 06:53:54
    發(fā)現(xiàn)肺結(jié)節(jié)需要做PET/CT嗎?
    中老年保健(2021年9期)2021-08-24 03:50:24
    從氣、虛、痰、瘀辨治肺結(jié)節(jié)術(shù)后咳嗽
    分化型甲狀腺癌切除術(shù)后多發(fā)骨轉(zhuǎn)移一例
    分化型甲狀腺癌肺轉(zhuǎn)移的研究進(jìn)展
    體檢查出肺結(jié)節(jié),我該怎么辦
    鉬靶X線假陰性乳腺癌的MRI特征
    三陰性乳腺癌的臨床研究進(jìn)展
    全甲狀腺切除術(shù)治療甲狀腺癌適應(yīng)證選擇及并發(fā)癥防治
    hrHPV陽性TCT陰性的婦女2年后隨訪研究
    美女福利国产在线| 欧美中文综合在线视频| 精品少妇久久久久久888优播| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 老司机影院毛片| 免费在线观看完整版高清| 精品一品国产午夜福利视频| 国产又爽黄色视频| 宅男免费午夜| 午夜福利在线免费观看网站| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲av第一区精品v没综合| 男女之事视频高清在线观看| 99热只有精品国产| 欧美激情极品国产一区二区三区| 精品久久久久久久毛片微露脸| 久久中文字幕人妻熟女| 国产精品.久久久| 男女床上黄色一级片免费看| 久久天堂一区二区三区四区| avwww免费| 精品人妻在线不人妻| 色在线成人网| 精品亚洲成a人片在线观看| 日本五十路高清| 精品电影一区二区在线| 日本黄色视频三级网站网址 | 国产在线观看jvid| 国产精品国产高清国产av | 亚洲精品中文字幕在线视频| 在线视频色国产色| 大香蕉久久网| 国产精品偷伦视频观看了| 欧美黄色淫秽网站| 精品国产国语对白av| 水蜜桃什么品种好| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国产三级黄色录像| 天堂中文最新版在线下载| 99精品久久久久人妻精品| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 国产精品秋霞免费鲁丝片| aaaaa片日本免费| 99热网站在线观看| 亚洲成国产人片在线观看| 亚洲人成电影免费在线| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 大片电影免费在线观看免费| 欧美最黄视频在线播放免费 | 黄片大片在线免费观看| 欧美丝袜亚洲另类 | 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 999精品在线视频| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 久久精品91无色码中文字幕| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产麻豆69| 制服人妻中文乱码| 热re99久久精品国产66热6| 国产又爽黄色视频| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 丰满的人妻完整版| 久久久久久久久久久久大奶| 极品人妻少妇av视频| 最近最新中文字幕大全电影3 | 老熟妇仑乱视频hdxx| 天堂√8在线中文| 午夜福利在线观看吧| 女人精品久久久久毛片| 亚洲午夜理论影院| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 女性生殖器流出的白浆| 在线观看日韩欧美| 国产亚洲精品一区二区www | 亚洲精品美女久久av网站| 18在线观看网站| 精品午夜福利视频在线观看一区| 欧美精品av麻豆av| 两个人看的免费小视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产在线精品亚洲第一网站| 色播在线永久视频| 久久 成人 亚洲| 我的亚洲天堂| 国产成人免费无遮挡视频| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| x7x7x7水蜜桃| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 久久性视频一级片| 青草久久国产| 午夜精品在线福利| 性少妇av在线| 777米奇影视久久| 久久影院123| 亚洲一区中文字幕在线| 精品亚洲成a人片在线观看| 亚洲中文av在线| 这个男人来自地球电影免费观看| 多毛熟女@视频| 高潮久久久久久久久久久不卡| 欧美不卡视频在线免费观看 | 韩国精品一区二区三区| 婷婷精品国产亚洲av在线 | 久久中文看片网| 欧美黑人精品巨大| 无遮挡黄片免费观看| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产免费av片在线观看野外av| 亚洲精品美女久久av网站| 91av网站免费观看| 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲精品国产色婷婷电影| 美女福利国产在线| 国产精品综合久久久久久久免费 | 欧美成人免费av一区二区三区 | 水蜜桃什么品种好| 国产真人三级小视频在线观看| 极品教师在线免费播放| 少妇的丰满在线观看| 黄色毛片三级朝国网站| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 老司机影院毛片| 两人在一起打扑克的视频| 成人精品一区二区免费| av中文乱码字幕在线| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 欧美日韩视频精品一区| 丁香六月欧美| 亚洲专区中文字幕在线| 99在线人妻在线中文字幕 | 激情视频va一区二区三区| 国产一区有黄有色的免费视频| 黄片小视频在线播放| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 日本欧美视频一区| 男女免费视频国产| 欧美国产精品一级二级三级| 建设人人有责人人尽责人人享有的| 国产av一区二区精品久久| 欧美在线一区亚洲| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 精品久久久精品久久久| 国产xxxxx性猛交| 国产亚洲精品久久久久5区| 国产成人免费观看mmmm| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 欧美精品高潮呻吟av久久| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 最新在线观看一区二区三区| 色婷婷久久久亚洲欧美| 日韩免费av在线播放| 啦啦啦 在线观看视频| 一区在线观看完整版| 午夜免费鲁丝| www.自偷自拍.com| 国产精品av久久久久免费| 夜夜夜夜夜久久久久| av电影中文网址| 精品久久久久久,| www.999成人在线观看| 香蕉国产在线看| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产精品综合久久久久久久免费 | 国产激情欧美一区二区| 美女视频免费永久观看网站| 国产欧美日韩精品亚洲av| 波多野结衣一区麻豆| 淫妇啪啪啪对白视频| 在线观看www视频免费| 国产精品二区激情视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 人人澡人人妻人| 亚洲一区二区三区不卡视频| 亚洲熟女毛片儿| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲成人免费av在线播放| 国产精品国产av在线观看| 国产精品.久久久| cao死你这个sao货| 一区二区三区精品91| 国产97色在线日韩免费| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 高清欧美精品videossex| 亚洲专区国产一区二区| 亚洲中文字幕日韩| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产亚洲一区二区精品| 99re在线观看精品视频| 亚洲熟妇熟女久久| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产精华一区二区三区| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲avbb在线观看| 国产片内射在线| 亚洲成人手机| 欧美日韩av久久| 国产精品影院久久| 久久狼人影院| 国产精品 国内视频| 久久午夜综合久久蜜桃| 悠悠久久av| av有码第一页| 亚洲成国产人片在线观看| 高潮久久久久久久久久久不卡| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 丝袜美腿诱惑在线| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲精品国产区一区二| 国产男女超爽视频在线观看| 美女扒开内裤让男人捅视频| 国产99白浆流出| 国产一区二区激情短视频| 后天国语完整版免费观看| 久久久久视频综合| 久久久久国产一级毛片高清牌| 老司机福利观看| 中文字幕最新亚洲高清| 国产人伦9x9x在线观看| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲成人免费电影在线观看| 亚洲成人免费av在线播放| 人妻一区二区av| 在线观看免费午夜福利视频| 一本大道久久a久久精品| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 人妻丰满熟妇av一区二区三区 | 亚洲中文字幕日韩| 大香蕉久久网| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 九色亚洲精品在线播放| 深夜精品福利| 中文字幕色久视频| 亚洲五月色婷婷综合| 久久久水蜜桃国产精品网| 日本wwww免费看| 看黄色毛片网站| 村上凉子中文字幕在线| 电影成人av| 人妻丰满熟妇av一区二区三区 | 1024视频免费在线观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产精品免费一区二区三区在线 | 国产欧美日韩一区二区三区在线| 中亚洲国语对白在线视频| 9191精品国产免费久久| 黄色视频不卡| 正在播放国产对白刺激| 国产又爽黄色视频| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 国产视频一区二区在线看| 免费观看人在逋| 精品国内亚洲2022精品成人 | 99久久精品国产亚洲精品| 精品国产亚洲在线| 又大又爽又粗| 又黄又爽又免费观看的视频| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 青草久久国产| 咕卡用的链子| 老熟女久久久| 中国美女看黄片| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 亚洲七黄色美女视频| 搡老乐熟女国产| 婷婷成人精品国产| 日韩欧美免费精品| 人妻丰满熟妇av一区二区三区 | 日本精品一区二区三区蜜桃| 国产区一区二久久| 久久久久国产精品人妻aⅴ院 | 国产精品一区二区在线不卡| 99久久人妻综合| 夜夜爽天天搞| 亚洲精品av麻豆狂野| tube8黄色片| 亚洲五月婷婷丁香| 大片电影免费在线观看免费| 免费看a级黄色片| 亚洲精华国产精华精| 日日爽夜夜爽网站| 国产不卡一卡二| 欧美日韩视频精品一区| 欧美日韩av久久| 婷婷精品国产亚洲av在线 | 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 久久久久久人人人人人| 久久中文字幕一级| 午夜免费鲁丝| 免费少妇av软件| 欧美色视频一区免费| 高清欧美精品videossex| 亚洲,欧美精品.| 最新在线观看一区二区三区| 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 国产成人一区二区三区免费视频网站| 看黄色毛片网站| 国产主播在线观看一区二区| 操出白浆在线播放| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产又爽黄色视频| 午夜老司机福利片| 水蜜桃什么品种好| 成在线人永久免费视频| 黄色a级毛片大全视频| 新久久久久国产一级毛片| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 一a级毛片在线观看| 波多野结衣一区麻豆| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 午夜福利视频在线观看免费| 亚洲中文av在线| 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲av熟女| 中出人妻视频一区二区| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲中文字幕日韩| 国产蜜桃级精品一区二区三区 | 久久午夜亚洲精品久久| 91老司机精品| 久久久久久人人人人人| 90打野战视频偷拍视频| 午夜老司机福利片| 91麻豆av在线| 搡老乐熟女国产| netflix在线观看网站| 亚洲全国av大片| 亚洲七黄色美女视频| 成人18禁在线播放| 色婷婷久久久亚洲欧美| 丁香欧美五月| 18禁美女被吸乳视频| 热99re8久久精品国产| 一级毛片精品| 悠悠久久av| 亚洲精品粉嫩美女一区| 99久久国产精品久久久| 亚洲色图av天堂| 啦啦啦 在线观看视频| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 午夜91福利影院| 999久久久国产精品视频| 国产免费现黄频在线看| 欧美日韩福利视频一区二区| 啦啦啦在线免费观看视频4| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 日韩欧美免费精品| 国产高清videossex| 国产精品免费视频内射| 欧美黄色片欧美黄色片| 老司机福利观看| 成人国产一区最新在线观看| 欧美精品一区二区免费开放| 国产精品99久久99久久久不卡| 久久国产精品大桥未久av| 精品久久久久久久久久免费视频 | 久久国产精品影院| 91av网站免费观看| 在线国产一区二区在线| 亚洲成人国产一区在线观看| 国产单亲对白刺激| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 高清毛片免费观看视频网站 | 美国免费a级毛片| 99re6热这里在线精品视频| 多毛熟女@视频| 久久久国产欧美日韩av| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 日韩大码丰满熟妇| 国产精品免费一区二区三区在线 | 国产乱人伦免费视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 国产精品久久视频播放| 亚洲av欧美aⅴ国产| 婷婷丁香在线五月| 国产在视频线精品| 日本五十路高清| 国产精品av久久久久免费| 99久久精品国产亚洲精品| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲七黄色美女视频| 一级毛片精品| 99热只有精品国产| 多毛熟女@视频| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 香蕉国产在线看| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 天堂√8在线中文| 欧美另类亚洲清纯唯美| videos熟女内射| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 一本综合久久免费| 亚洲中文av在线| 高清在线国产一区| 日韩成人在线观看一区二区三区| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产精品98久久久久久宅男小说| 中文字幕人妻丝袜制服| 久久国产亚洲av麻豆专区| 少妇被粗大的猛进出69影院| 99久久综合精品五月天人人| av中文乱码字幕在线| 两性夫妻黄色片| 国产精品乱码一区二三区的特点 | 香蕉久久夜色| 精品免费久久久久久久清纯 | av免费在线观看网站| 免费看十八禁软件| 国产成人欧美| 黄色片一级片一级黄色片| 91字幕亚洲| 老司机午夜十八禁免费视频| 在线视频色国产色| 黑人猛操日本美女一级片| 丰满的人妻完整版| xxxhd国产人妻xxx| 日韩视频一区二区在线观看| 欧美精品啪啪一区二区三区| 这个男人来自地球电影免费观看| 悠悠久久av| 久久这里只有精品19| 亚洲成人免费av在线播放| 久久久久国产一级毛片高清牌| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 久久影院123| 日本黄色日本黄色录像| 在线观看舔阴道视频| 18禁美女被吸乳视频| 精品福利观看| 国产色视频综合| 纯流量卡能插随身wifi吗| 日本vs欧美在线观看视频| 天天影视国产精品| 久久久久精品国产欧美久久久| 精品国产美女av久久久久小说| 久久久久精品国产欧美久久久| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 亚洲成人手机| 亚洲av熟女| 在线观看免费视频日本深夜| 在线观看免费午夜福利视频| 波多野结衣av一区二区av| 欧美中文综合在线视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 久久中文字幕人妻熟女| 欧美精品亚洲一区二区| 欧美日韩视频精品一区| 男女午夜视频在线观看| √禁漫天堂资源中文www| 免费在线观看完整版高清| 黄色毛片三级朝国网站| 91成年电影在线观看| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 一边摸一边抽搐一进一小说 | 亚洲人成电影免费在线| 在线视频色国产色| 欧美大码av| 国产三级黄色录像| 热99国产精品久久久久久7| 免费看十八禁软件| 999久久久国产精品视频| 国产精品亚洲av一区麻豆| 人妻 亚洲 视频| 午夜免费鲁丝| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产精品99久久99久久久不卡| 成人手机av| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲综合色网址| 国产蜜桃级精品一区二区三区 | 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 水蜜桃什么品种好| 在线观看日韩欧美| 精品久久久久久,| 在线播放国产精品三级| 亚洲熟妇熟女久久| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 国产精华一区二区三区| 十八禁高潮呻吟视频| 国产激情久久老熟女| 国产91精品成人一区二区三区| 丁香六月欧美| 99国产精品一区二区蜜桃av | 日本vs欧美在线观看视频| 一区福利在线观看| 99精品在免费线老司机午夜| 精品免费久久久久久久清纯 | 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 国产成人精品无人区| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 男人的好看免费观看在线视频 | 成人永久免费在线观看视频| 亚洲黑人精品在线| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 久久这里只有精品19| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 老司机影院毛片| a级毛片黄视频| 男人操女人黄网站| 搡老岳熟女国产| 久久午夜综合久久蜜桃| 国产男女超爽视频在线观看| 久热爱精品视频在线9| 久99久视频精品免费| 国产真人三级小视频在线观看| 国产在线精品亚洲第一网站| 久久精品人人爽人人爽视色| 老司机深夜福利视频在线观看| 精品国产乱码久久久久久男人| 黑人操中国人逼视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| 男男h啪啪无遮挡| 亚洲人成77777在线视频| 黑人操中国人逼视频| 亚洲九九香蕉| 欧美精品啪啪一区二区三区| 夜夜爽天天搞| 亚洲精品成人av观看孕妇| 这个男人来自地球电影免费观看| 成人特级黄色片久久久久久久| 成年人黄色毛片网站| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 黄色片一级片一级黄色片| 99久久人妻综合| 国产区一区二久久| 国产真人三级小视频在线观看| www.精华液| 国产一卡二卡三卡精品| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 久久久久精品人妻al黑| 啦啦啦在线免费观看视频4| 色94色欧美一区二区| 在线观看舔阴道视频| 日韩欧美免费精品| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 一级,二级,三级黄色视频| 国产亚洲精品久久久久久毛片 | 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 亚洲精华国产精华精| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 精品亚洲成a人片在线观看| 无人区码免费观看不卡| 十八禁高潮呻吟视频| 一级片'在线观看视频| 国产av一区二区精品久久| 亚洲精品国产一区二区精华液| 国产蜜桃级精品一区二区三区 | 精品人妻在线不人妻| av一本久久久久| 亚洲第一青青草原| 国产成人av激情在线播放| 老汉色av国产亚洲站长工具| 丁香六月欧美| 成人免费观看视频高清| 看片在线看免费视频| 亚洲性夜色夜夜综合| 热99国产精品久久久久久7| 国产成人精品久久二区二区91| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 中国美女看黄片| 欧美日韩黄片免| 国产极品粉嫩免费观看在线| 日韩欧美国产一区二区入口| 亚洲免费av在线视频| 在线观看一区二区三区激情| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产一卡二卡三卡精品| 国产精品电影一区二区三区 | 亚洲色图av天堂| 热99re8久久精品国产| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 欧美性长视频在线观看| 女警被强在线播放| 国产91精品成人一区二区三区| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲熟女精品中文字幕| 国产主播在线观看一区二区| 色综合婷婷激情| 国产精品成人在线| 亚洲欧美色中文字幕在线| 亚洲 欧美一区二区三区| 色精品久久人妻99蜜桃| 精品亚洲成a人片在线观看| 一级毛片女人18水好多| 天堂中文最新版在线下载| 欧美日韩亚洲高清精品| 多毛熟女@视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产成人欧美| 男女高潮啪啪啪动态图| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 成人av一区二区三区在线看| 在线播放国产精品三级| 性色av乱码一区二区三区2| 18禁观看日本| 丰满迷人的少妇在线观看| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 丝瓜视频免费看黄片| 人人澡人人妻人| 国产成人精品无人区| 激情在线观看视频在线高清 | avwww免费| 精品久久久精品久久久|