淋病奈瑟氏菌3種檢測方法的結(jié)果對照思路

謝國勇 余進勝

淋病是臨床上最為常見的一種性傳播疾病，淋病奈瑟氏菌（NG，也稱淋球菌）是淋病的病原體，常引起生殖道感染-淋菌性尿道炎和淋菌性宮頸炎，逆行感染可引起尿道膀胱炎、附睪炎、前列腺炎、前庭大腺炎、輸卵管炎和盆腔炎等，可導致男女不育癥，也可經(jīng)血液傳播到全身的其他部位，形成播散性淋球菌感染。潛伏期平均為3～5天，5%～20%的男性和60%女性感染者呈現(xiàn)無癥狀感染。淋病奈瑟氏菌感染會對患者的生理及心理健康產(chǎn)生嚴重危害。據(jù)我國的流行病學統(tǒng)計顯示[1]，淋病的發(fā)病人數(shù)在5種性病病種中位居第三。目前，臨床上檢測NG的方法多種多樣，較為常用的有快速檢測法、直接涂片法、細菌培養(yǎng)法、PCR檢測法（也稱體外DNA基因擴增法）等[2]，為比較直接涂片法、細菌培養(yǎng)法、PCR檢測法3種NG檢測法的檢測效果，本研究對100例淋病患者分別應(yīng)用了上述3種方法進行檢測，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取廣東省惠州市惠東縣慢性病防治站2011年9月～2013年9月收治的100例確診或疑為淋病的患者作為研究對象，其中男53例，女47例，年齡25～58歲，平均（38.4±3.3）歲，所有患者均有性生活史，均出現(xiàn)不同程度的淋病體征、癥狀。選取100例患者的尿道及宮頸口分泌物進行檢測。

1.2 方法

1.2.1 標本采集 男性：將棉拭子蘸取無菌鹽水插入尿道口，深度在2～3cm，輕輕旋轉(zhuǎn)拭子，停留10～15s取出，以潔凈試管保存棉拭子送檢。女性：用窺陰器擴張陰道暴露子宮頸，除去宮頸口表面的分泌物，用棉拭子插入子宮頸管內(nèi)1～2cm處輕輕轉(zhuǎn)動，停留20～30s將棉拭子取出，以潔凈試管保存送檢。女性患者檢測需避開經(jīng)期。

1.2.2 NG檢測

1.2.2.1 直接涂片 將分泌物涂片，保持厚薄均勻，在分泌物涂片自然干燥后，做革蘭染色。初染使用結(jié)晶紫，再使用碘液媒染，以95%乙醇脫色后使用復紅復染。使用油鏡觀察染色涂片結(jié)果，淋病奈瑟菌的形態(tài)呈半圓形或腎性對稱排列，顏色為粉紅或紅色，在細胞內(nèi)外鏡檢中，可觀察到在多形核白細胞的胞質(zhì)中常成對排列，兩菌接觸面扁平或稍凹的革蘭陰性雙球菌。

1.2.2.2 細菌培養(yǎng) 標本采集后應(yīng)立即分區(qū)接種于經(jīng)室溫平衡的選擇性培養(yǎng)基。接種后的平皿（巧克力平板和血瓊脂平板各1塊）置35℃～36℃、5% CO2和＞70%濕度的培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)。培養(yǎng)24～48h觀察細菌的生長。培養(yǎng)出菌株后，根據(jù)細菌鑒定方法及試劑說明書進行檢測，對于可疑菌落，還需做生化鑒定。

1.2.2.3 PCR檢測 利用聚合酶鏈反應(yīng)對標本中的少量DNA片段進行擴增，得到較長的DNA片段，再采用凝膠電泳法檢測，觀察色帶變化，以判定檢測結(jié)果。全程操作均嚴格按照PCR試劑盒上的操作說明進行。

1.3 統(tǒng)計學方法 應(yīng)用SPSS18.0軟件處理本次研究數(shù)據(jù)，相關(guān)正態(tài)計量資料數(shù)據(jù)比較采用t檢驗，計數(shù)資料比較采用χ2檢驗，P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

3種檢測方法的NG陽性檢出率比較 PCR檢測的NG陽性率為81.0%，明顯高于細菌培養(yǎng)法（61.0%）及直接涂片法（43.0%）（χ2=9.71、χ2=30.65），差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與直接涂片法相比，細菌培養(yǎng)法的NG陽性率更高,差異有統(tǒng)計學意義(χ2=6.49，P<0.05，見表 1)。

表1 3種檢測方法的NG陽性檢出率比較

3 討論

淋病作為一種全世界范圍內(nèi)流行的性傳染病，其具有局部癥狀重、發(fā)病急驟的特點[3]。臨床診斷淋病主要采用實驗室檢查手段，目前大部分的醫(yī)療機構(gòu)都沿用了直接涂片法進行淋病檢驗，其在性病門診中的應(yīng)用也十分廣泛。從大量臨床實踐來看[4]，直接涂片法的陽性檢出率非常低，誤診、漏診率較高，特別是女性患者，由于其分泌物雜菌污染較多，所以僅根據(jù)染色形態(tài)判定，容易出現(xiàn)失誤。

細菌培養(yǎng)法是世界衛(wèi)生組織倡導的淋病診斷金標準[5]，然而其不僅在試劑、培養(yǎng)條件、操作技術(shù)等方面受限嚴格，同時NG陽性檢出率也較低。與細菌培養(yǎng)法相比，PCR檢測法對標本的要求更為寬松，不論細菌是否存活，PCR法都可準確檢測出來，其有效克服了使用抗菌藥物后殺滅細菌而無法檢測的問題，另一方面，由于PCR可將細菌DNA片段放大，也很好地克服了標本量少而無法檢測的問題。PCR檢測法對實驗室的要求更高，應(yīng)用該方法判定治療效果時，還需仔細剔除死亡細菌檢測出的陽性率[6]。

本次研究結(jié)果顯示，在3種方法中，PCR檢測的NG陽性率最高，細菌培養(yǎng)法次之，直接涂片法最低。PCR檢測的陽性率顯著高于細菌培養(yǎng)法及直接涂片法（P<0.05），差異均具有統(tǒng)計學意義；細菌培養(yǎng)法的NG陽性率顯著高于直接涂片法（P<0.05）?？傊谥苯油科?、細菌培養(yǎng)法、PCR檢測法3種檢測法中，PCR檢測法的靈敏度最高、特異性最強，是臨床檢測淋病的理想方法。

[1]劉鎮(zhèn)平,徐志康,竇宇紅等.淋病奈瑟氏菌三種檢測方法的結(jié)果比較[J].河北醫(yī)學,2010,16(10):1201-1203.

[2]夏克強,孫麗琴.對240例男性患者泌尿生殖系感染5種病原體的檢測分析[J].中外醫(yī)療,2009,28(2):166.

[3]吳玉霞.淋病奈瑟氏菌的細菌培養(yǎng)與PCR方法檢測的結(jié)果對比[J].右江醫(yī)學,2011,39(3):337.

[4]稅開毅.三種檢測淋病奈瑟氏菌方法結(jié)果比較[J].中國醫(yī)學創(chuàng)新,2009,6(29):134.

[5]陳秀英.應(yīng)用細菌培養(yǎng)法與PCR檢測法檢測淋病奈瑟氏茵的對比研究[J].求醫(yī)問藥（學術(shù)版）,2012,10(5):236-237.

[6]潘云霞.淋病奈瑟氏菌二種檢測方法結(jié)果比較[J].健康必讀（中旬刊）,2012,11(8):119.