蛇毒血凝酶在肺癌根治術中的止血效果分析及其對凝血酶受體-1的影響

沈國滿

（青海大學附屬醫(yī)院 藥劑科，青海 西寧 810001）

蛇毒血凝酶在肺癌根治術中的止血效果分析及其對凝血酶受體-1的影響

沈國滿

（青海大學附屬醫(yī)院 藥劑科，青海 西寧 810001）

目的探討蛇毒血凝酶在肺癌根治術中的止血效果及其對凝血酶受體-1（protease-activated receptor-1，PAR-1）的影響。方法選取86例經病理證實為肺癌患者，隨機分為觀察組和對照組，其中對照組采用止血敏，觀察組采用蛇毒血凝酶，分別在手術前后測定出血量，凝血系統(tǒng)相關因子，采用酶聯(lián)免疫吸附實驗（enzyme linked immuno sorbent assay，ELISA）測定P-選擇素，流式細胞術測定血小板PAR-1，Western blot測定肺癌組織中PAR-1的表達情況，對所得數據采用統(tǒng)計學分析。結果觀察組在術中及術后2d出血量，顯著低于對照組，差異具有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）；流式細胞術檢測結果發(fā)現(xiàn)，觀察組中組內不同時間段PAR-1陽性率及P-選擇素無統(tǒng)計學意義，同對照組相比具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；Western Blot檢測發(fā)現(xiàn)蛇毒血凝酶對肺癌患者組織中PAR-1影響不明顯，而對照組具有統(tǒng)計學差異義（P＜0.05）。結論蛇毒血凝酶在肺癌根治術中可以減少出血量，對凝血系統(tǒng)作用較為穩(wěn)定，對P-選擇素和PAR-1影響較小，這一結果提示蛇毒血凝酶可能在肺癌根治術患者止血過程中不會使患者出現(xiàn)全身血液高凝狀態(tài)，即不會導致凝血酶受體高表達從而引起的腫瘤細胞轉移。

蛇毒血凝酶；肺癌根治術；止血；凝血酶受體-1

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2010年2月～2013年12月青海大學附屬醫(yī)院就診的86例患者，經病理檢測證實為肺癌。其中男性患者48例，女性患者38例；年齡42～74歲，平均年齡為（59.1±6.1）歲?；颊咴谑中g前行ASA評分均為Ⅰ-Ⅱ級，且均無肝、腎功能以及凝血功能異常，在手術前也未服用過止血或者抗凝相關藥物?；颊咴诮邮苎芯亢褪中g前均簽訂知情同意書并經醫(yī)院倫理委員會同意。采用隨機數字表示法，患者被分為2組：對照組和觀察組，其中對照組采用止血敏，每組40例；觀察組采用蛇毒血凝酶。2組患者在年齡、性別、體重以及凝血功能方面均無統(tǒng)計學差異，具有可比性。另外6例患者不愿接受止血藥物采用的是生理鹽水進行簡單對照。手術均由同一組醫(yī)師完成。另需要排除以下情況：①患者近1個月內服用過抗凝血藥物或者止血相關藥物；②合并腦心血管疾病的患者；③因其他原因不能行手術的患者。

1.2 方法 對照組：患者在手術前半小時按照0.5 g／mL生理鹽水中靜脈注射，手術結束后每天給予酚磺乙胺止血敏（湖北中佳藥業(yè)有限公司，國藥準字H42020621）0.5 g／mL，連續(xù)2 d。觀察組：術前半小時靜脈注射蛇毒血凝酶［兆科藥業(yè)（合肥）有限公司，國藥準字H20060895］2 ku，術后仍給予蛇毒血凝酶2 ku／d，連續(xù)2 d。

1.3 觀察指標 2組患者分別在術前24 h（T1）、術后20min內（T2）、術后24 h（T3）及48 h（T4）抽取靜脈血，所有血樣采用自動凝血分析儀測定凝血酶原時間（prothrombin time，PT）、纖維蛋白原（fibrinogen，F(xiàn)IB）、活化部分凝血酶時間（activated partial thromboplastin time，APTT）、D-D二聚體、血小板計數及聚集率。記錄手術所需時間，測量肺癌根治術中以及手術后3 d出血量。采用流式細胞儀測定血小板PAR-1、ELISA試劑盒測定血漿中P-選擇素以及Western blot測定肺癌組織中PAR-1。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包以及ImageJ4.2對數據以及圖片進行處理；對正態(tài)計量數據以“±s”表示，采用t檢驗，計數資料采用卡方檢驗。所有數據通過統(tǒng)計學比較，以P＜0.05作為具有顯著性差異的判斷標準。

2 結果

2.1 2組患者出血量、手術時間情況比較 通過表1顯示，對照組與觀察組手術時間分別為（149.1±43.8）min和（152.6±46.2）min，2組相比較差異無統(tǒng)計學意義；觀察組術中出血量顯著低于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；術后1 d、2 d，觀察組術中出血量顯著低于對照組，2組相比具有顯著性差異（P＜0.01），術后3 d，2組相比無顯著性差異（見表1）。

表1 2組患者出血量、手術時間情況比較Tab.1 Comparison of the amount of bleeding and operative time in two groups

2.2 凝血相關指標變化情況 通過表2發(fā)現(xiàn)，觀察組的PT、APTT在T3時間段相對于T1差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），D-D二聚體T4相對于T1差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。對照組PT、APTT、FIB以及D-D二聚體在不同時間具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；而血小板計數2者無差別，組內比較也沒有顯著的統(tǒng)計學差異（見表2）。

表2 凝血相關指標變化情況Table 2 Coagulation changes of related indicators

2.3 各時間段血清中PAR1、P-選擇素變化情況 通過表3顯示，對照組中PAR-1在血清中表達，手術治療前（即T1），相對T3具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。觀察組PAR-1和P-選擇素在血清中表達，手術治療前后并不具有統(tǒng)計學意義；觀察組PAR1在T1、T2相對于對照組 T1、T2具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而 P-選擇素在T2、T3具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05，見表3）。

表3 各時間段血清中PAR1、P-選擇素變化情況Tab.3 Changs of the serum PAR1，P-selectin expression at each time

2.4 Western Blot檢測肺癌組織中PAR1的表達情況 通過Western Blot比較分析我們發(fā)現(xiàn)，蛇毒血凝酶對患者肺癌組織的影響較小，同生理鹽水組相比較無統(tǒng)計學意義。而止血敏對照組同生理鹽水組比較具有顯著性差異（P＜0.05，見圖1）。

圖1 Western Blot檢測組織中PAR1表達情況和灰度值分析a.PAR1表達情況；b.PAR1灰度值分析1.生理鹽水組；2.蛇毒血凝酶觀察組；3.止血敏對照組*P＜0.05，與生理鹽水組比較Fig.1 Analysis of gray value of tissue PAR1 by Western Blot detectiona.Western Blot results；b.Protein luminance ratio results1.saline group；2.hemocoagulase observation group；3.dicynone control group*P＜0.05，compared with saline group

3 討論

目前有研究顯示［7］，癌周組織出現(xiàn)的異常血管新生是導致癌細胞轉移擴散的重要因素。異常血管新生導致癌周微血管密度增加，增加了癌癥手術的治療風險［8］。因此在癌癥手術中常常因為出血而導致手術時間延長、有的甚至大出血而死亡。本研究顯示，蛇毒血凝酶在手術中具有顯著降低出血量且具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），手術后前兩天的出血量相對于對照組差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。在對患者凝血功能的影響指標中，發(fā)現(xiàn)蛇毒血凝酶與對照組相比，凝血酶原時間以及活化部分凝血酶時間具有統(tǒng)計學差異（P＜0.05），而纖維原蛋白、血小板計數以及D-D二聚體2者相比較并無顯著性差異。觀察組中各時間段凝血功能相關指標較為穩(wěn)定。我們初步斷定蛇毒血凝酶在整個手術期間以及術后恢復中能夠產生明顯的止血效果，可能與其對凝血功能的影響要強于止血敏的效果。從蛇毒血凝酶對手術時間中的出血量以及凝血功能的影響來看，蛇毒血凝酶在肺癌根治術中應用是可行的。

血小板的生理功能主要是參與血栓的形成和止血，任何凝血過程都會涉及到血小板的活化［9］，血小板表面表達PAR-1以及凝血酶受體-4，其中凝血酶最易與PAR-1結合而發(fā)揮凝血效果［10］，凝血系統(tǒng)的多種因子參與了腫瘤的發(fā)生發(fā)展［11］。目前大多數學者認為凝血酶受體對于腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，尤其是癌細胞轉移上占有很重要的作用［12］。蛇毒血凝酶在外科手術中的應用非常廣泛，那么在癌癥手術中是否可以應用是值得研究和探討的［13］。為了進一步研究蛇毒血凝酶在肺癌根治術中應用的安全性以及對肺癌患者本身凝血系統(tǒng)等是否會造成影響，本文初步研究了蛇毒血凝酶對癌癥患者組織中PAR-1的影響。采用流式細胞術檢測血小板PAR-1，結果顯示，患者血小板PAR-1的表達并未出現(xiàn)明顯升高的現(xiàn)象，尤其與止血敏比較，具有非常顯著的差異。這一研究結果提示，蛇毒血凝酶在肺癌根治術中應用尤其是止血方面是安全有效的。

目前一些止血藥物應用不慎容易出現(xiàn)血栓，有研究報道蛇毒血凝酶在臨床應用上不僅可以達到止血的效果，而且可以避免血栓的形成，其原因主要是蛇毒血凝酶只在出血部位止血，而并不會打破凝血-纖溶系統(tǒng)的平衡，因而不會引起正常血管內凝血［14］。通過研究顯示［15］，蛇毒血凝酶對凝血酶原時間以及活化部分凝血酶時間的作用相對于對照組具有統(tǒng)計學差異（P＜0.05），其時間相對于對照組時間較短，這一結果提示蛇毒血凝酶能更快發(fā)揮止血效果。P-選擇素與PAR-1表達呈正相關，其表達使血小板和內皮細胞大量激活，從而使腫瘤患者血液處于高凝狀態(tài)并誘導腫瘤細胞與血小板、血管內皮細胞相互作用，進一步誘導腫瘤細胞的生長以及轉移。因此，本研究選取P-選擇素作為指標，主要是在考察蛇毒血凝酶對血小板活化的影響，從而分析蛇毒血凝酶是否會造成患者血液處于高凝狀態(tài)甚至血栓。通過研究結果顯示，蛇毒血凝酶對肺癌根治術患者血漿中P-選擇素影響較小，與對照組比較具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。值得提出的是本研究并未探討蛇毒血凝血酶對腫瘤轉移的影響，尤其是對腫瘤細胞的影響。后期可以從蛇毒血凝酶對腫瘤細胞是否有影響這一角度入手，從而開發(fā)出在癌癥手術中有效安全的止血藥物提供依據。

總之，通過研究顯示，蛇毒血凝酶在肺癌根治術中可以減少出血量，對凝血系統(tǒng)影響較為小，通過對P-選擇素和PAR-1進行檢測，發(fā)現(xiàn)蛇毒血凝酶對其影響較小，這一結果提示蛇毒血凝酶可能在肺癌根治術患者止血過程中不會使患者出現(xiàn)全身血液高凝狀態(tài)，即不會導致凝血酶受體高表達從而引起的腫瘤細胞轉移的可能。

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（編校：譚玲）

The hemostatic effect of hemocoagulase in lung cancer radical surgery analysis and its effect on PAR-1

SHEN Guo-man

（Department of Pharmacy，Affiliated Hospital of Qinghai University，Xining 810001，China）

ObjectiveTo investigate hemocoagulase hemostatic effect in lung cancer radical surgery and its effecton protease-activated receptor-1（PAR-1）.Methods86 cases of pathologically confirmed lung cancer patients were random ly divided into control group and observation group，which controlswere used etamsylate，observation group were used hemocoagulase，then to measure the amount of bleeding，clotting system-related factors before and after surgery，using ELISA assay to detect P-selectin，flow cytometry to measure platelet PAR-1，Western Blot to determine lung tissue expression of PAR-1，and the resulting datawere statistically analyzed.ResultsThe blood loss of observation group during surgery and postoperative 2d compared with the control group，had a significant difference（P＜0.05）；flow cytometry results showed that，PAR-1-positive rate and P-selectin in different time periods in observation group were no statistically significant，while had a statistically significant compared with control group（P＜0.05）；Western Blot detected hemocoagulase of lung tissue in patients with PAR-1 had no obvious effect，while control group had significant difference（P＜0.05）.ConclusionVenin hemocoagulase in lung cancer radical surgery can reduce the amount of bleeding，and be more stable for the role of the coagulation system，as well as less effect on the P-selectin and PAR-1.The results suggest that vonin hemocoagulase might notmake patients with systemic hypercoagulable state in patients undergoing radical process with lung cancer，in other words itmight not lead to PAR-1 highly expression to cause tumor cellmetastasis.

hemocoagulase；radical surgery of lung cancer；hemostatic；protease-activated receptor-1

R656

A

1005－1678（2014）04－0070－03

肺癌組織在周圍釋放激肽釋放酶導致周圍細胞炎性因子以及彈性蛋白酶釋放增加，因此在肺癌根治術中滲出的血液很難凝固，此外肺癌病灶部位與胸壁黏連，在手術清掃淋巴結時創(chuàng)面出血更多［1］。蛇毒血凝酶的主要成分為廣西圓斑蝰蛇蛇毒的提取物，在臨床上主要用于出血性疾病的治療，臨床研究顯示該藥可以明顯縮短出血時間，減少出血量，且不會形成血栓，出現(xiàn)內凝血現(xiàn)象［2］。蛇毒血凝酶能促進血液凝固，但是凝血系統(tǒng)中諸多分子是腫瘤細胞發(fā)生、轉移的關鍵因素，凝血酶受體-1（proteaseactivated receptor-1，PAR-1）是腫瘤細胞轉移的主要分之一［3-4］。蛇毒血凝酶在肺癌根治術中對PAR-1的影響值得研究。本研究采用蛇毒血凝酶對肺癌根治術患者凝血系統(tǒng)以及PAR-1的影響，初步探討蛇毒血凝酶在肺癌根治術中使用的安全性。

國家自然科學基金（21002025）

沈國滿，男，本科，主治醫(yī)師，研究方向：蛇毒血凝酶及其藥物研究，E-mail：704420757＠qq.com。