重組人甲狀旁腺素1-34對(duì)去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松的作用研究

陳波 李翠瓊 朱常青 李婉媚 曹小禎

[摘要] 目的 探討重組人甲狀旁腺素1-34（hPTH1-34）對(duì)去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松的治療作用。 方法50只7個(gè)月齡SD健康雌性大鼠，30只行雙側(cè)卵巢摘除術(shù)，20只做假手術(shù)（SHAM），12周后各處死10只證實(shí)骨質(zhì)疏松造模成功。余20只雙側(cè)卵巢摘除大鼠隨機(jī)分為去卵巢（OVX）安慰劑組10只和hPTH1-34治療組10只，10只SHAM組作對(duì)照。hPTH1-34治療組劑量為20 μg/kg，皮下注射，每周注射3次。OVX安慰劑和SHAM組皮下注射0.5 mL生理鹽水，每周注射3次。治療3個(gè)月后，測(cè)定并比較三組股骨、腰椎骨密度（BMD）、血清鈣、磷、骨源性堿性磷酸酶（BALP）、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b（Trap-5b）水平。 結(jié)果 hPTH1-34治療組股骨和腰椎BMD較OVX安慰劑組明顯升高[（0.151±0.008）g/cm2比（0.135±0.013）g/cm2，（0.181±0.010）g/cm2比（0.159±0.008）g/cm2，P < 0.01]，血清鈣、磷、BALP、Trap-5b水平明顯高于OVX安慰劑組（P < 0.05或P < 0.01），與SHAM組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。 結(jié)論 hPTH1-34通過(guò)刺激成骨細(xì)胞的活性，抑制破骨細(xì)胞，可顯著增加BMD，對(duì)去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松有效。

[關(guān)鍵詞] 重組人甲狀旁腺素1-34；骨質(zhì)疏松癥；骨密度；骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)

[中圖分類號(hào)] R580[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號(hào)] 1673-7210（2014）06（b）-0017-04

Effect of human parathyroid hormone (hPTHl-34) on osteoporosis of ovariectomized rats

CHEN Bo1 LI Cuiqiong1 ZHU Changqing1 LI Wanmei1 CAO Xiaozhen2

1.Department of Endocrinology, the 12th People′s Hospital of Guangzhou City, Guangdong Province, Guangzhou 510620, China; 2.Department of Ultrasonography, the 12th People′s Hospital of Guangzhou City, Guangdong Province, Guangzhou 510620, China

[Abstract] Objective To investigate the effects of human parathyroid hormone (hPTHl-34) on the osteoporosis of ovariectomized rats. Methods 50 female 7-month-old SD rats were used for this experiment and 30 of them were ovariectomized and another 20 received sham operation. After 12 weeks of ovariectomy the osteoporosis model was confirmed by use of 10 ovariectomized and sham-operated rats. The osteoporotic rats of 20 were randomly divided into 2 treatment groups: hPTHl-34 and OVX placebo groups with 10 rats in each group, the other 10 rats were sham-operated as the control for SHAM group. Totally hPTHl-34 (20 μg/kg) were subcutaneous injected into the rats of hPTHl-34 group once every other day. The rats of the OVX placebo group and SHAM group were injected with 0.5 mL saline once every other day. The bone mineral density (BMD), serurn Ca, P, bone alkaline phosphatase (BALP), serum tartrate-resistant acid phosphatase 5b (Trap-5b) were measured after 3 months therapy. Results After 12 weeks′treatment the femoral and lumbar BMD in the hPTHl-34 group increased obviously compared with those of OVX placebo group [(0.151±0.008) g/cm2 vs (0.135±0.013) g/cm2, (0.181±0.010) g/cm2 vs (0.159±0.008) g/cm2, P < 0.01]. After treated with hPTHl-34 serum Ca, P, BALP and Trap-5b significantly increased compared with those of OVX placebo group (P < 0.05 or P < 0.01). There was no significant difference in hPTHl-34 and SHAM groups. Conclusion hPTHl-34 can stimulate osteoblast activity, inhibite bone resorption, promote bone mass effect and is effective on protection against osteoporosis.

[Key words] Human parathyroid hormone; Osteoporosis; Bone mineral density; Bone turnover markers

骨質(zhì)疏松癥（osteoporosis，OP）是一種全身性骨病，以骨量減少和骨的微結(jié)構(gòu)破壞為特征，使骨的脆性增加，并易發(fā)生骨折[1]，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。而長(zhǎng)期臥床又可加重骨質(zhì)疏松，并引發(fā)其他心肺疾患以致形成惡性循環(huán)，甚至造成死亡，給患者、家庭和社會(huì)都帶來(lái)了沉重的社會(huì)及經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。隨著老齡化社會(huì)的到來(lái)，骨質(zhì)疏松癥發(fā)病率逐年增長(zhǎng)，據(jù)統(tǒng)計(jì)2005年美國(guó)有近250萬(wàn)人次因骨質(zhì)疏松性骨折就診，有43.2萬(wàn)患者因此入院，約18萬(wàn)患者需要家庭護(hù)理[2]，目前全球約有2億患者，中國(guó)約9千萬(wàn)患者[3]，已經(jīng)成為全球所面臨的重要健康問(wèn)題。通常臨床上以骨密度（BMD）作為診斷和評(píng)價(jià)藥物療效的指標(biāo)，由于BMD是通過(guò)測(cè)量骨質(zhì)量反應(yīng)骨質(zhì)疏松的情況，作為療效評(píng)價(jià)指標(biāo)存在一定的滯后性，不能對(duì)患者治療中骨代謝情況進(jìn)行有效監(jiān)測(cè)。2011年美國(guó)臨床內(nèi)分泌學(xué)會(huì)制定的絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松診斷及治療指南中提出，骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)可以為骨折風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)和療效監(jiān)測(cè)提供及時(shí)有效的信息[4]。近年來(lái)，國(guó)外研究表明，小劑量間歇性皮下注射重組人甲狀旁腺素1-34（hPTH1-34）對(duì)松質(zhì)骨有合成作用，但對(duì)皮質(zhì)骨骨量和骨質(zhì)量是否有影響及有何種影響尚存在爭(zhēng)議[5]。本研究觀察了低劑量、間歇性皮下注射hPTH1-34對(duì)去卵巢大鼠股骨和腰椎BMD、血清生化指標(biāo)鈣、磷及骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)如骨源性堿性磷酸酶（BALP）、抗酒石酸酸性磷酸酶-5b（Trap-5b）的影響，初步探討了其作用機(jī)制，為hPTH1-34治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 造模及分組

選擇7個(gè)月齡，體重（280±20）g，雌性，清潔級(jí)SD大鼠，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，共50只。購(gòu)置動(dòng)物后適應(yīng)1周分別進(jìn)行去卵巢（OVX）和假手術(shù)（SHAM）。在無(wú)菌條件下，將5%氯胺酮注射液按100 mg/kg體重給大鼠作腹腔注射麻醉，取腰椎兩旁切口進(jìn)入腹腔背側(cè)，在雙側(cè)腎臟下方脂肪組織內(nèi)確認(rèn)卵巢后，完整切除卵巢，術(shù)后腹腔內(nèi)滴入3%過(guò)氧化氫，止血縫合，傷口酒精消毒[6]。SHAM組麻醉與手術(shù)方法均相似，保留卵巢，僅切除少許脂肪。大鼠給于標(biāo)記后每5只一組分籠飼養(yǎng)，飼養(yǎng)環(huán)境溫度為（25±3）℃，取12 h晝夜照明節(jié)律，相對(duì)濕度58%的環(huán)境，普通大鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)（鈣含量1.33%，磷含量0.95%），自由飲水。有死亡大鼠立即造模補(bǔ)充，并相應(yīng)延長(zhǎng)補(bǔ)充大鼠的飼養(yǎng)時(shí)間。術(shù)后12周隨機(jī)取SHAM組和OVX組各10只，放血處死時(shí)均檢查雙側(cè)卵巢是否完全切除和子宮是否萎縮，取腰椎做BMD測(cè)定，確認(rèn)骨質(zhì)疏松模型建立后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分組。共分為3個(gè)組：OVX安慰劑組（摘除大鼠雙側(cè)卵巢12周后不作任何處理，12周時(shí)與相鄰組同時(shí)測(cè)BMD）、hPTH1-34治療組（摘除大鼠雙側(cè)卵巢12周時(shí)測(cè)BMD后用hPTH1-34治療12周），SHAM組（僅切除卵巢周圍的脂肪組織約3 g，術(shù)后12周時(shí)測(cè)BMD）。

1.2藥物治療的途徑和方法

hPTH1-34治療組給予hPTH1-34（購(gòu)于上海吉爾生化有限公司，批號(hào)：20130215，純度>95%），治療劑量為20 μg/kg，皮下注射，每周注射3次，連續(xù)12周；OVX安慰組和SHAM組皮下注射0.5 mL生理鹽水，每周注射3次，連續(xù)12周。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均服鈣爾奇12 mg/（kg·d）和2.5 U維生素D3，連服12周。每周測(cè)量體重，根據(jù)體重變化調(diào)整藥物劑量。各組動(dòng)物于治療后12周，用3%戊巴比妥鈉麻醉，心臟采血取血標(biāo)本，采用頸椎脫臼法處死去除軟組織，剝離腰椎段脊柱L1～6和右側(cè)股骨保存，用生理鹽水紗布包裹維持濕度，塑料袋密封后置于-70℃低溫冰箱中保存標(biāo)本，以備BMD檢測(cè)。

1.3 觀察項(xiàng)目與方法

1.3.1 BMD測(cè)定應(yīng)用雙能X線吸收法BMD測(cè)定儀（美國(guó)GE Lunar Prodigy公司生產(chǎn)）進(jìn)行測(cè)定全身、腰椎段脊柱L1～6和右側(cè)股骨BMD。將標(biāo)本相當(dāng)于仰臥位放置于BMD儀探頭下，應(yīng)用附帶的小動(dòng)物軟件對(duì)其進(jìn)行掃描得出BMD值。大鼠照射范圍：掃描長(zhǎng)度為30.492 cm，掃描密度為17.912 cm，點(diǎn)分辨能力為0.0640 cm，精確度（CV） < 1%。結(jié)果以g/cm2表示。

1.3.2 生化指標(biāo)測(cè)定三組大鼠全血5 mL離心分離血清，以美國(guó)Beckman公司的CX7全自動(dòng)生化分析儀立即測(cè)定血鈣、血磷及BALP含量。采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法測(cè)量血清Trap-5b，試劑盒購(gòu)自芬蘭SBA公司，批內(nèi)差異3.0%，批間差異3.4%，該試劑盒只檢測(cè)新鮮釋放入血的具有酶活性的Trap-5b分子，在酶標(biāo)儀上405 nm波長(zhǎng)下讀取吸光度，標(biāo)準(zhǔn)品及樣品均行雙管測(cè)定，結(jié)果取兩次平均值，單位為U/L[7]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 13.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗(yàn)。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠骨質(zhì)疏松模型鑒定

大鼠的腰椎和股骨遠(yuǎn)端富含松質(zhì)骨，股骨干富含皮質(zhì)骨，OVX后骨質(zhì)疏松癥模型是否建立主要以子宮濕重和松質(zhì)骨的BMD來(lái)判斷。OVX組雙側(cè)卵巢摘除12周后，子宮濕重較SHAM組明顯下降，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01），股骨、腰椎BMD較SHAM組明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05或P < 0.01），表明骨質(zhì)疏松模型造模成功，見表1。

2.2 hPTH1-34對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠股骨、腰椎BMD的影響

OVX安慰劑組大鼠股骨、腰椎BMD較SHAM組明顯降低差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。hPTH1-34組治療12周后，與OVX安慰劑組比較，治療組的股骨、腰椎BMD明顯升高，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01，但與SHAM組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表2。

表2 hPTH1-34對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠股骨、腰椎BMD的影響（g/cm2，x±s）

注：與OVX安慰劑組比較，*P < 0.05，#P < 0.01；BMD：骨密度

2.3 hPTH1-34對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠生化指標(biāo)的影響

OVX安慰劑組大鼠血清鈣、磷、ALP、Trap-5b值較SHAM組明顯低。治療12周后，與OVX安慰劑組比較，hPTH1-34 治療組的血清鈣、磷、ALP、Trap-5b值明顯升高（P < 0.05或P < 0.01），但與SHAM組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表3。

表3 重組人甲狀旁腺素1-34對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠

生化指標(biāo)水平的影響（x±s）

注：與OVX安慰劑組比較，*P < 0.05，#P < 0.01；BALP：骨源性堿性磷酸酶；Trap-5b：抗酒石酸酸性磷酸酶-5b

3 討論

甲狀旁腺素是甲狀旁腺主細(xì)胞分泌的一種激素，含有34個(gè)氨基酸殘基，是調(diào)節(jié)鈣磷代謝的主要激素之一。hPTH1-34與天然甲狀旁腺素氨基酸結(jié)構(gòu)完全一致，具有相同的受體親和力和生理作用，可以通過(guò)增加成骨細(xì)胞及破骨細(xì)胞數(shù)目，促進(jìn)骨吸收及生長(zhǎng)，刺激骨松質(zhì)層和骨皮質(zhì)層的新骨形成效應(yīng)，改善骨小梁微結(jié)構(gòu)，增加骨量、BMD和骨強(qiáng)度[8]。2002年12月美國(guó)FDA和歐洲批準(zhǔn)了PTH應(yīng)用于臨床治療絕經(jīng)后和男性骨質(zhì)疏松癥。目前認(rèn)為，PTH對(duì)骨代謝具有雙向調(diào)節(jié)作用：持續(xù)升高的PTH能通過(guò)骨鈣入血，維持血鈣水平，最終骨量減少；治療作用表現(xiàn)在有計(jì)劃、小劑量、間斷給予PTH可顯著促進(jìn)骨形成[9]。

絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥動(dòng)物模型于1969年首先由Saville通過(guò)切除大鼠卵巢來(lái)建立，后被反復(fù)證實(shí)并被廣泛采用，目前已成為標(biāo)準(zhǔn)化的公認(rèn)的絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥病理模型。文獻(xiàn)報(bào)道SD雌鼠去卵巢至12周左右骨質(zhì)疏松癥病理模型能夠復(fù)制成功[10]。筆者在實(shí)驗(yàn)中術(shù)后12周成功制作去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松癥模型，認(rèn)為造模因素單一，模型確定，重復(fù)性好，實(shí)驗(yàn)結(jié)果可信度大。骨強(qiáng)度的大小除了與骨結(jié)構(gòu)有關(guān)外，更主要的是與骨量相關(guān)，骨強(qiáng)度的60%～80%都是由骨量來(lái)決定的，骨量與骨強(qiáng)度成正比例關(guān)系，而BMD是全面評(píng)價(jià)骨量和診斷骨質(zhì)疏松癥的可靠指標(biāo)，也是衡量臨床骨質(zhì)疏松癥治療效果的評(píng)價(jià)指標(biāo)[11]。在本研究中筆者發(fā)現(xiàn)hPTH1-34治療組股骨和腰椎BMD較OVX安慰劑組明顯升高，且以松質(zhì)骨為主的腰椎BMD升高率較皮質(zhì)骨為主的股骨更加明顯（P < 0.01或P < 0.05），與SHAM組無(wú)差異，提示了hPTH1-34治療不僅能保護(hù)松質(zhì)骨骨量，阻擋松質(zhì)骨骨量的繼續(xù)丟失，預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的進(jìn)一步加重，而且明顯加重和恢復(fù)已丟失的骨量，使松質(zhì)骨骨量達(dá)到了正常水平。

由于骨骼由生理變化反應(yīng)到BMD的變化存在著滯后性，以BMD作為療效觀察指標(biāo)敏感性和時(shí)效性均較差，臨床中需要快速、靈敏及有效的檢測(cè)指標(biāo)用于原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的療效監(jiān)測(cè)。雌激素減少后，骨轉(zhuǎn)化增加，骨吸收大于骨形成，導(dǎo)致骨量的丟失，血液中骨代謝指標(biāo)能敏感地反映骨骼的變化情況，如血清骨轉(zhuǎn)換標(biāo)志物BALP、Trap-5b等，有關(guān)PTH治療對(duì)骨轉(zhuǎn)換等生化指標(biāo)的影響報(bào)道不一[12]。BALP是組織非特異性堿性磷酸酶的一種特殊形式，由成熟階段成骨細(xì)胞合成并分泌，與細(xì)胞外骨基質(zhì)結(jié)合，是最常見的評(píng)價(jià)骨形成和骨轉(zhuǎn)換的生化指標(biāo)，可特異敏感性反映骨形成的活躍程度[13]。Trap-5b可反映破骨細(xì)胞的活性。本實(shí)驗(yàn)中通過(guò)檢測(cè)去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠hPTH1-34治療期間BALP、Trap-5b水平，分析骨轉(zhuǎn)換指標(biāo)在療效監(jiān)測(cè)中的價(jià)值，OVX大鼠每周3次皮下注射20 μg/kg的hPTH1-34，治療3個(gè)月的結(jié)果顯示，OVX安慰劑組大鼠血清BALP、Trap-5b水平明顯低于SHAM組，證明由于雌激素水平下降，導(dǎo)致骨轉(zhuǎn)換加快，骨形成也加快，是高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松。而hPTH1-34組治療12周后，血清中的BALP、Trap-5b水平均明顯高于OVX安慰劑組，提示PTH可以降低大鼠去卵巢增加的骨轉(zhuǎn)化，骨形成速率得到提高。研究還發(fā)現(xiàn)BALP作為療效觀察指標(biāo)在監(jiān)測(cè)hPTH1-34治療原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥中可能更為敏感，可以為臨床提供更具時(shí)效性的數(shù)據(jù)。在促進(jìn)骨合成的治療過(guò)程中，BALP均持續(xù)升高，表明患者骨形成活躍。有研究證實(shí)OVX后大鼠破骨細(xì)胞數(shù)量持續(xù)下降而活性持續(xù)升高，破骨細(xì)胞數(shù)量與血清Trap-5b水平密切相關(guān)，在OVX大鼠，血清Trap-5b水平變化并不能真正代表破骨細(xì)胞骨吸收活性的變化，而在更大程度上代表破骨細(xì)胞數(shù)量的變化[14]。本研究結(jié)果提示在促進(jìn)骨合成的治療中，同時(shí)聯(lián)合血液骨轉(zhuǎn)換標(biāo)志BALP、Trap-5b等的監(jiān)測(cè)可以彌補(bǔ)單純觀察BMD導(dǎo)致敏感性欠缺的不足，了解用藥是否規(guī)范，及時(shí)調(diào)整治療方案，有助于更準(zhǔn)確地判斷藥物的療效及依從性，為臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

骨鹽的主要成分是鈣和磷，是骨基質(zhì)的基本原料，當(dāng)骨鹽的流失到一定的程度，體內(nèi)鈣和磷就缺乏，引起血液鈣和磷水平的降低。骨中鈣維持著骨骼的強(qiáng)度。鈣流失過(guò)多，骨的顯微結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，則骨強(qiáng)度減弱。鈣代謝受多種因素影響，其中之一就是雌激素的水平。雌激素作用于成骨細(xì)胞，拮抗了糖皮質(zhì)激素對(duì)成骨細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制，阻滯了鈣過(guò)多的從骨骼中游離出來(lái)[15]。本實(shí)驗(yàn)中，大鼠OVX后，鈣含量顯著降低，提示OVX能影響鈣代謝，使骨骼中鈣流失過(guò)多。hPTH1-34治療12周后，血鈣、磷含量顯著增加，明顯高于對(duì)照組，提示鈣、磷代謝得到改善，考慮原因：PTH是血鈣、磷的主要調(diào)節(jié)激素，文獻(xiàn)報(bào)道PTH可增加1，25（OH）2VitD水平，后者促進(jìn)腸鈣、磷吸收增加和尿磷排泄減少所致[16]。

因有試驗(yàn)結(jié)果提示使用hPTH1-34可能會(huì)增加小鼠癌癥（如骨肉瘤）的傾向，雖然在本實(shí)驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)，但在臨床應(yīng)引起重視，其影響有待進(jìn)一步觀察與探討[17]?？傊?，hPTH1-34能增強(qiáng)骨合成代謝，抑制骨吸收，對(duì)股骨、腰椎骨量和BMD有增高作用，是治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥非常有前景的藥物。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Baron R，Hesse E. Update on bone anabolics in osteoporosis treatment：rationale， current status，and perspectives[J]. J Clin Endocrinol Metab，2012， 97（2）： 311-325.

[2]NOF. Clinician′s guide to prevention and treatment of osteoporosis[EB/OL]. http：//www.nor.org，2010-05-18.

[3]那鍵，許永，馬超，等.老年骨質(zhì)疏松的分子生物學(xué)發(fā)病機(jī)制[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2011，31（20）：4070-4073.

[4]Hodgson SF，Watts NB，Bilezikian JP，et al. American Association of Clinical Endocrinologists medical guidelines for clinical practice for the prevention and treatment of postmenopasal osteopomsis：2001 edition，with selected updates for 2003 [J]. Endocr Pract，2003，9（6）：544-564.

[5]Akhter MP，Kinmel DB，Recker RR. Effect of parathymid hormone （hPTH1-84）treatment on hone mass and strength in ovariectomized rats [J]. J Clin Densito，2001，4：13.

[6]Wronski TJ，Dann LM，Scon KS，et al. Long-term effects of ovariectomy and aging on the rat skeleton [J]. Calcif Tissue Int，1994，4（1）：360-366.

[7]Kaija H，Jia J，Lindqvist Y，et al. Tartrate-resistant bone acid phosphatase：large Scale production and purification of the recombinant enzyme，characterization，and crystallization [J]. J Bone Miner Res，1999，14：424-430.

[8]Guo QR，Wei DZ，Tong WY，et al. Partial purification of human parathyroid hormone 1-84 as a thioredoxin fusion form in recombinant Eacherichia coli by thermoosmotic shock [J]. Protein Expr Purif，2006，49（1）：32-38.

[9]Miyakoshi N. Morphological analysis of bone dynamics and metablic bone disease：Effects of parathyroid hormone on bone tissue [J]. Clin Calcium，2011，21（4）：575-581.

[10]Liu Z，Naoto E，Noriaki Y，et al. Effects of single and concurrent intermittent administration of human PTH（1-34）and incadronate on cancellous and cortical bone of femoralneck in ovariectomized rats [J]. Tohoku J Exp Med，1998， 186：131-141.

[11]Njeh CF，Boivn CM，Langton CM. The role of Ulteasound in the assessment of osteoporosis：A reveiew [J]. Osteoporos Int，1997，7（1）：7-22.

[12]Kawane T，Takahashi S， Saitoh H， et al. Anabolic effects of recombinant human parathyroid hormone（1-84）and synthetic human parathyroid hormone（1-34） on the mandibles of osteopenic ovariectomized rats with maxillary molar extraction [J]. Horm Metab Res，2002，34：293.

[13]Gundberg CM. Biochemical markers of hone formation [J]. Clin Lab Med，2000，20（3）：489-501.

[14]Rissanen JP，Suominen MI，Peng Z，et al. Secreted tartrate-resistant acid phosphatase 5b is a marker of osteoclast number in human osteoclast cultures and the rat ovariectomy model [J]. Calcif Tissue Int，2008，82：108-115.

[15]金邦荃.植物異黃酮與骨質(zhì)疏松的預(yù)防[J].衛(wèi)生研究，2002，31：94-79.

[16]Kalu DN，Echon R，Hollis BW. Modulation of ovariectomy-related Bone loss by parathyroid bormone in rats [J]. Mech Ageing Dev，1990，56：49.

[17]褚加成，李劍，歐陽(yáng)玲莉，等.甲狀旁腺激素預(yù)防和治療絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥療效的系統(tǒng)評(píng)價(jià)[J].中國(guó)循證醫(yī)學(xué)雜志，2008，8（10）：879-886.

（收稿日期：2014-03-01本文編輯：衛(wèi)軻）

[基金項(xiàng)目] 廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究基金課題（編號(hào)WST JJ20121212430682197109140015）。