人類免疫缺陷病毒Ⅰ型B'亞型感染者人類白細(xì)胞抗原Ⅰ類基因?qū)Σ《据d量的影響

馬永莉++++++陳燕麗++++++郝金娟++++++阮玉華++++++邵一鳴++++++洪坤學(xué)

[摘要] 目的 探討人類免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）B′亞型感染者人類白細(xì)胞抗原（HLA）-A、-B、-C位點(diǎn)等位基因的分布及其對(duì)病毒載量的影響。 方法 對(duì)146例HIV-1B′亞型感染者采用聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性引物（PCR-SSP）擴(kuò)增方法進(jìn)行HLA-A、-B、-C位點(diǎn)等位基因檢測(cè)，計(jì)算各位點(diǎn)等位基因的頻率及其對(duì)感染者病毒載量的影響。 結(jié)果 在146例HIV-1B′亞型感染者中分別檢出HLA-A位點(diǎn)14個(gè)等位基因，-B位點(diǎn)24個(gè)等位基因，-Cw位點(diǎn)12個(gè)等位基因，其中頻率大于0.1的等位基因?yàn)镠LA-A*02，-A*11，-A*24，-A*30，-B*13，-B*40，-B*51，-Cw*03，-Cw*06，-Cw*08；HLA-A、-B、-C等位基因純合子攜帶者的病毒載量高于雜合子（P=0.0013）；HLA-A*03（P=0.0314）、-A*30（P=0.0072）、-B*13（P=0.0087）、-Cw*06（P=0.0145）等位基因攜帶者具有較低病毒載量。 結(jié)論 HIV-1B′亞型感染者HLA-A*03、-A*30、-B*13、-Cw*06等位基因與低病毒載量相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 人類免疫缺陷病毒；人類白細(xì)胞抗原；病毒載量；感染

[中圖分類號(hào)] R117[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A[文章編號(hào)] 1673-7210（2014）06（c）-0009-04

Impact of HLA class Ⅰ alleles on viral load in HIV-1 B′ infected individuals

MA Yongli CHEN Yanli HAO Jinjuan RUAN Yuhua SHAO Yiming HONG Kunxue▲

National Center for AIDS/STD Control and Prevention, Chinese Center for Disease Control and Prevention, State Key Laboratory for Infectious Disease Control and Prevention, Beijing 102206, China

[Abstract] Objective To study the distribution of HLA-A, -B, and C alleles in HIV-1 B′infected individuals and to analyze its impact on HIV-1 viral load. Methods 146 HIV-1 infected individuals were recruited and their HLA-A, -B, and C alleles were genotyped using PCR-SSP technique. Allele frequencies and association of HLA-A, -B, and C alleles with HIV-1 viral loads were also analyzed. Results 14 HLA-A allels, 24 HLA-B allels, and 12 HLA-Cw allels were detected in 146 HIV-1 B' infected individuals. Of them, HLA-A*02, -A*11, -A*24, -A*30, -B*13, -B*40, -B*51, - Cw*03, -Cw*06, -Cw*08 were among the most common alleles with frequencies above 0.1; subjects homozygous at HLA class Ⅰ loci had higher viral loads (P=0.0013), subjects carrying HLA-A*03 (P=0.0314), -A*30 (P=0.0072), -B*13 (P=0.0087) and -Cw*06 (P=0.0145) alleles had lower viral loads. Conclusion HLA-A*03, -A*30, -B*13 and -Cw*06 alleles may associate with lower viral loads in HIV-1 B′infected individuals.

[Key words] Human immunodeficiency virus; Human leukocyte antigen; Viral load; Infection

人類白細(xì)胞抗原（human leukocyte antigen，HLA）基因影響人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus，HIV）感染者的病毒復(fù)制，有研究報(bào)道攜帶HLA-B*27，-B*57等位基因的HIV感染者病毒載量較低，多表現(xiàn)為緩慢疾病進(jìn)程，而HLA-B*35，-B*08，-B*56等位基因則與HIV-1感染者的疾病快速進(jìn)展相關(guān)[1-2]。HLA不同等位基因?qū)IV病毒復(fù)制影響的差異可能與其提呈HIV保護(hù)性或非保護(hù)性抗原表位，從而激發(fā)具有細(xì)胞毒作用的CD8+T細(xì)胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL）免疫應(yīng)答的能力不同有關(guān)[3-4]。然而HLA基因?qū)IV-1病毒復(fù)制和感染者疾病進(jìn)展的作用受不同人群特定的遺傳背景的影響，目前在不同地區(qū)不同種族人群中的研究結(jié)果并不完全一致[5]。本研究探討了146例未接受抗病毒治療的B′亞型HIV-1感染者的HLA Ⅰ類等位基因分布，并分析了該感染人群HLA Ⅰ類等位基因?qū)IV-1病毒載量的影響。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

根據(jù)知情同意原則從HIV-1B′亞型感染人群中招募146例未經(jīng)抗病毒治療者，所有病例均經(jīng)HIV抗體初篩和確證試驗(yàn)檢測(cè)陽(yáng)性，其中男82例，女64例，年齡22～60歲，平均（47.6±10.2）歲。采集EDTA抗凝靜脈血標(biāo)本5 mL，常規(guī)分裝全血和血漿，-80℃保存?zhèn)溆?。研究方案?jīng)中國(guó)疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。患者均知情同意并簽署知情同意書。

1.2 HLA基因分型

提取全血基因組DNA，并應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性引物擴(kuò)增（PCR-SSP）試劑盒（HLA-ABC SSP MorganTM）進(jìn)行HLA基因分型。

1.3 病毒載量測(cè)定

使用羅氏公司HIV-1定量檢測(cè)試劑盒（COBAS AMPLICOR HIV-1 MONITOR Test）檢測(cè)血漿病毒載量，定量測(cè)定的檢出限為50拷貝/mL。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SigmaPlot 10.0和GraphPad Prism 5.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和作圖，攜帶或不攜帶HLA純合子、攜帶或不攜帶某HLA等位基因的感染者間病毒載量的差異分析用Mann-Whitney U檢驗(yàn)進(jìn)行，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 研究對(duì)象中HLA-A、-B、-C位點(diǎn)等位基因的多態(tài)性分布

endprint

本研究在146例HIV-1感染者中分別檢出HLA-A位點(diǎn)14個(gè)等位基因，-B位點(diǎn)24個(gè)等位基因，-Cw位點(diǎn)12個(gè)等位基因，其中頻率大于0.1的高頻率的等位基因?yàn)镠LA-A*02，-A*11，A*24，A*30，-B*13，-B*40，-B*51，- Cw*03，-Cw*06，-Cw*08，研究人群中HLA-A、B、C位點(diǎn)等位基因呈現(xiàn)多樣性分布（圖1）。

2.2HLA-Ⅰ類基因與病毒載量的相關(guān)性

分別對(duì)HLA-A、B、C位點(diǎn)等位基因和病毒載量關(guān)聯(lián)性進(jìn)行分析，結(jié)果顯示攜帶或不攜帶HLA純合子的HIV感染者的病毒載量差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.0013），HLA純合子感染者的病毒載量高（圖2）。攜帶HLA-A*03（P=0.0314），-A*30（P=0.0072），-B*13（P=0.0087），和-Cw*06（P=0.0145）等位基因的HIV感染者病毒載量低于不攜帶相應(yīng)基因者（圖3）。

3 討論

HLA等位基因控制HIV病毒復(fù)制的的保護(hù)性作用機(jī)制尚未完全清楚，以往有關(guān)的研究多集中于對(duì)攜帶HLA-B*27和HLA-B*57等位基因的HIV感染者進(jìn)行分析，研究結(jié)果提示這種保護(hù)性效應(yīng)可能與HLA-B*27和HLA-B*57限制識(shí)別的表位及其誘發(fā)的CTL應(yīng)答特征相關(guān)[6]，其中HLA-B*27識(shí)別的免疫顯性表位KK10（KRWIILLNK263~272）和HLA-B*57識(shí)別的免疫顯性表位TW10（TSTLQEQIGW240~249）位于序列相對(duì)保守的p24Gag區(qū)，其所誘導(dǎo)的特異性CTL應(yīng)答呈現(xiàn)多功能特征（CD107a，IFN-γ，TNF-α，IL-2，MIP-1β），這種多功能的CTL應(yīng)答與病毒復(fù)制的控制顯著相關(guān)[7]。新近的研究發(fā)現(xiàn)HLA-B*27還能結(jié)合Leu268Met的KK10表位突變體，且所誘導(dǎo)的攜帶TRBV6-5 TRBJ1-1基序T細(xì)胞受體的CTL克隆能交叉識(shí)別野生型及突變型KK10表位，進(jìn)一步說明HLA-B*27的保護(hù)性效應(yīng)與其結(jié)合的KK10表位誘導(dǎo)的特異性CTL效應(yīng)相關(guān)[8]。但本研究未觀察到HLA-B*27和HLA-B*57與病毒載量相關(guān)的保護(hù)性效應(yīng)，這可能是這兩個(gè)等位基因在亞洲人群中的頻率低所致[5]。

本研究人群中檢出的高頻率等位基因?yàn)镠LA-A*02、-A*11、-A*24、-A*30、-B*13、-B*40、-B*51、-Cw*03、-Cw*06、-Cw*08，符合我國(guó)漢族人群HLA-Ⅰ類等位基因的分布特點(diǎn)。對(duì)HIV-1B′亞型感染者的分析結(jié)果表明攜帶HLA-Ⅰ類等位基因純合子感染者的病毒載量較高（P=0.0013），這與以往的研究報(bào)道一致，表明HLA-Ⅰ類等位基因純合狀態(tài)不利于控制病毒的復(fù)制和疾病的發(fā)展。HLA雜合子則可能通過遞呈更多的CTL表位而誘導(dǎo)廣譜的CTL免疫反應(yīng)，有利于控制病毒通過序列變異逃逸感染者體內(nèi)CTL的識(shí)別與殺傷，因而在控制HIV感染者病毒復(fù)制和疾病進(jìn)展中表現(xiàn)出一定的優(yōu)勢(shì)[9-10]。各等位基因與病毒載量相關(guān)性分析結(jié)果表明攜帶HLA-A*03、-A*30、-B*13、-Cw*06等位基因的感染者分別比不攜帶相應(yīng)HLA等位基因的感染者的病毒載量低，其中HLA-B*13的保護(hù)性作用以往有報(bào)道，其與低病毒載量相關(guān)的保護(hù)性作用與其識(shí)別的表位誘導(dǎo)的CTL應(yīng)答多功能特征密切相關(guān)[11]。HLA-A*03、-A*30、-Cw*06這三個(gè)等位基因與低病毒載量相關(guān)的保護(hù)性作用研究尚少，但有報(bào)道表明我國(guó)漢族人群中HLA-A*30-B*13-Cw*06處于連鎖不平衡狀態(tài)，因而需要進(jìn)一步的研究明確HLA- A*30、-Cw*06在HIV-1B′亞型感染者中與低病毒載量相關(guān)是否由于與HLA- B*13連鎖所致[12]。

本研究表明HIV-1B′亞型感染者HLA-A*03、-A*30、-B*13、-Cw*06等位基因攜帶者病毒載量較低，這種關(guān)聯(lián)可能與不同HLA-Ⅰ類分子提呈HIV保護(hù)性或非保護(hù)性抗原表位能力存在差異，從而激發(fā)具有細(xì)胞毒作用的CTL免疫應(yīng)答的能力不同有關(guān)[13-14]。這為進(jìn)一步深入鑒定相關(guān)HLA等位基因限制的CTL表位及探討其在控制HIV病毒感染復(fù)制中的作用機(jī)制提供了基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2014-03-14本文編輯：衛(wèi)軻）

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（收稿日期：2014-03-14本文編輯：衛(wèi)軻）

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