大黃素對高脂血癥金黃地鼠脂代謝紊亂的改善作用

范寶妍+朱海波

[摘要] 目的 研究大黃素對高脂血癥金黃地鼠脂代謝的改善作用。 方法 將40只金黃地鼠隨機(jī)分成4組，正常對照組（Con組）、模型對照組（HFD組）、陽性對照組（Simvastatin組，6 mg/kg）及大黃素組（emodin組，70 mg/kg），除Con組外，各組給予高脂飲食誘導(dǎo)形成高脂血癥模型，并于給藥治療4周后測定血中三酰甘油（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）及高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）水平，收取血漿樣品繪制脂蛋白譜及進(jìn)行核磁共振代謝組學(xué)研究。 結(jié)果 ①高脂血癥金黃地鼠給予大黃素治療后，血中TG、TC和LDL-C含量顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；②脂蛋白譜分析顯示，大黃素可調(diào)節(jié)脂代謝紊亂金黃地鼠血清脂蛋白亞型的分布及不同脂蛋白亞型內(nèi)的脂質(zhì)含量，調(diào)節(jié)高密度脂蛋白脂質(zhì)運(yùn)載能力；③核磁共振代謝組學(xué)結(jié)果表明，大黃素可改善血漿內(nèi)源性分子的代謝輪廓，其改善效果與辛伐他汀相當(dāng)。 結(jié)論 大黃素具有改善高脂血癥金黃地鼠的脂代謝紊亂的作用。

[關(guān)鍵詞] 大黃素；高脂血癥；金黃地鼠；脂蛋白譜；代謝組學(xué)

[中圖分類號] R285.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2014）08（c）-0004-05

Improvement of emodin for lipid metabolism disorder in hyperlipidemia hamster

FAN Baoyan ZHU Haibo▲

State Key Laboratory of Bioactive Substance and Function of Natural Medicines & Ministry of Health Key Laboratory of Biosynthesis of Natural Products Beijing Key Laboratory of New Drug Mechanisms and Pharmacological Evaluation Study， Institute of Materia Medica， Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College， Beijing 100050， China

[Abstract] Objective To investigate the improvement effects of emodin on lipid metabolism in hyperlipidemia golden hamster. Methods 40 golden hamsters were randomly divided into four groups， namely， normal control group （Con）， high fat diet group （HFD）， Simvastatin （6 mg/kg） group， emodin （70 mg/kg） group. Except the control group， the other groups were induced hyperlipidemia by high fat diet. After 4 weeks of treatment， content of serum triglycerides （TG）， total cholesterol （TC）， low-density lipoprotein-cholesterol （LDL-C）， and high-density lipoprotein-cholesterol （HDL-C）， and plasma samples were drawn for lipoprotein and lipids profiles analysis and proton nuclear magnetic resonance spectroscopy （1H-NMR）-based metabonomics analysis. Results ①Comparing with HFD fed hamster， emodin significantly reduced serum TC， TG and LDL-C levels （P < 0.05）. ②Lipid profile analysis showed emodin could regulate the proportion of lipoprotein subtypes and lipid content， suggesting the function of lipoprotein was improved by emodin. ③1H-NMR-based metabonomics study gave us highlight that， emodin and Simvastatin could improve the metabolic profile of plasma endogenous molecules to a similar degree. Conclusion Emodin can regulate lipid metabolism in hyperlipidemia hamster model.

[Key words] Emodin； Hyperlipidemia； Hamster； Lipid profile； Metabonomics

高脂血癥是體內(nèi)脂質(zhì)代謝紊亂而形成的血漿中一種或多種脂質(zhì)含量超過正常值的一種病癥，其中低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）是導(dǎo)致動脈粥樣硬化（AS）的獨(dú)立危險因素，臨床上控制循環(huán)中脂質(zhì)水平是防治心腦血管疾病的必要手段[1]。但已上市的一線化藥，如他汀類、貝特類等，其不良反應(yīng)限制了其應(yīng)用范圍[2]。因此具有調(diào)血脂功效的天然產(chǎn)物逐步受到重視。

大黃素是中藥大黃的主要有效成分，中醫(yī)傳統(tǒng)認(rèn)為大黃具有攻積滯、清濕熱、瀉火、涼血等功效，近年來文獻(xiàn)報道大黃素也具有抗氧化、抗腫瘤、保肝、抗菌等作用[3]。本研究建立實(shí)驗(yàn)性高脂血癥金黃地鼠模型，觀察大黃素對高脂血癥的改善作用，并結(jié)合脂蛋白譜分析及核磁共振代謝組學(xué)技術(shù)，尋找大黃素改善脂質(zhì)代謝的精細(xì)差異，為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)證據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物

SPF級敘利亞金黃地鼠，雄性，體重90～110 g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供，合格證號：SCXK（京）2006-0009。

1.2 飼料

基礎(chǔ)飼料與高脂飼料均由北京華阜康生物科技股份有限公司提供。高脂飼料配方：由基礎(chǔ)飼料添加0.2%膽固醇，20%動物脂肪重新制粒，滅菌封裝。

1.3 模型與分組給藥

動物適應(yīng)環(huán)境飼養(yǎng)1周后，根據(jù)體重隨機(jī)分成4組，分別為正常對照組（Con組）、模型對照組（HFD組）、陽性對照組（Simvastatin組）及大黃素組（Emodin組）。高脂飼料造模1周（Con組給予普通飼料）后開始給藥。各給藥組每天灌胃給藥1次，Simvastatin組給予辛伐他汀6 mg/kg，Emodin組給于大黃素70 mg/kg。Con組、HFD組每天給予等體積的蒸餾水。

1.4 藥物與試劑

辛伐他汀購自杭州默沙東制藥有限公司（批號：120945），總膽固醇（TC）、三酰甘油（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、LDL-C檢測試劑盒均購自中生北控生物科技股份有限公司。Amplex Red、Nile Red染料購自Sigma公司，其余分析純試劑均購自北京化學(xué)試劑公司。

1.5 儀器

熒光酶標(biāo)儀，美國MD公司；AKATA Purifier 10 System、900 fraction collector、Superdex 200、Superose 6，GE公司；Bruker AVANCE Ⅲ-500超導(dǎo)傅立葉變化核磁共振波譜儀，瑞士布魯克公司。

1.6 生化指標(biāo)檢測

于給藥第28天動物眼眶靜脈取血（禁食12 h），參照試劑盒說明書測定血清中血脂指標(biāo)。

1.7 血清脂蛋白的分離和脂質(zhì)熒光檢測

用3%戊巴比妥鈉溶液麻醉動物后，采集腹主動脈血液，分裝至含1%肝素鈉的EP管中。參照文獻(xiàn)[4]方法進(jìn)行血漿脂蛋白分離及脂質(zhì)熒光檢測實(shí)驗(yàn)。

1.8 核磁共振代謝組學(xué)

取血漿30 μL，添加生理鹽水后混勻，離心后取上清60 μL加入1.7 mm核磁樣品管中，于4℃冰箱保存?zhèn)溆?。在Bruker VARIAN Ⅲ-500超導(dǎo)傅立葉變化核磁共振波譜儀上，血漿樣品調(diào)用NOESY脈沖序列、弛豫時間編輯（Carr-Purcell-Meiboom-Gill，CPMG）和擴(kuò)散編輯（longitudinal eddy-delay，LED）相關(guān)脈沖序列，采用預(yù)飽和方式抑制水峰，預(yù)飽和時間為2 s ，譜寬8000 Hz，采樣點(diǎn)數(shù)32 k，累加次數(shù)128次，預(yù)飽和頻率和中心頻率都在水峰位置。自由感應(yīng)衰減（free induction decay，F(xiàn)ID）信號經(jīng)過32 k點(diǎn)傅立葉變換轉(zhuǎn)為一維NMR譜圖。以TSP為化學(xué)位移參考峰的位置，設(shè)為0。調(diào)用AMIX（Analysis of MIXtures software v.3.0，Bruker Biospin）軟件中的程序?qū)?H-NMR圖譜按5～0.5的范圍進(jìn)行分段積分，每段為0.04。將積分?jǐn)?shù)據(jù)歸一化之后，用SIMCA-P12.0軟件包進(jìn)行模式識別分析及皮爾森相關(guān)性分析。采用主成分分析（principal components analysis，PCA）觀察試驗(yàn)樣品的自然分布和組別關(guān)系，為進(jìn)一步區(qū)分不同組別差異，采用偏最小方差判別分析（partial least squares discriminate analysis，PLS-DA）。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件GraphPad Prism 5進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大黃素對金黃地鼠血脂水平影響

與Con組比較，給藥4周后HFD組TC、TG、LDL-C水平均顯著升高（P < 0.05）；與HFD組相比，Simvastatin組給藥4周后TC、TG、LDL-C水平明顯下降（P < 0.05），大黃素在70 mg/kg劑量下的血清TC、TG及LDL-C水平與HFD組相比有顯著性降低（P < 0.05），但對HDL-C水平無顯著影響（P > 0.05）。見表1。

2.2 高脂血癥金黃地鼠脂蛋白差異譜繪制

Con組、HFD組、Simvastatin組和Emodin組的金黃地鼠血清脂蛋白譜具有顯著差異（圖1A～D）。將紫外吸收數(shù)值根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)蛋白回歸公式計(jì)算獲得各組脂蛋白含量與Con組相比，HFD組VLDL及LDL含量明顯升高，HDL含量明顯降低，VLDL及LDL中脂質(zhì)成分TC及TG的含量明顯升高，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.01）；給予辛伐他汀后能顯著降低VLDL及LDL水平，降低VLDL中TC、TG的含量，降低LDL中TC含量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；給予大黃素能顯著降低高脂血癥金黃地鼠血清VLDL水平，升高HDL水平，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。大黃素可降低VLDL及HDL中TG的含量，降低VLDL中TC含量，升高HDL中TC含量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見圖1 E～G。

A

B

C

2.3 NMR代謝組學(xué)研究結(jié)果

應(yīng)用核磁共振代謝組學(xué)技術(shù)，從CPMG、LED實(shí)驗(yàn)及模式識別分析發(fā)現(xiàn)，HFD組血漿中HDL（δ 0.86）、乳酸（δ 1.34、4.1、4.14）、乙酸（δ 1.94）、丙氨酸（δ 1.50）、葡萄糖（δ 3.42～3.98）、賴氨酸（δ1.70、3.02）、檸檬酸（δ 2.54）、磷脂酰膽堿（δ 3.22）、不飽和脂肪酸（δ 2.78、2.82）等含量較低，而VLDL/LDL（δ 0.9、0.94、1.34、1.38）、N-乙酰糖蛋白（δ 2.02、2.06）、甲硫氨酸（δ 2.14）、甜菜堿（δ 3.30）等含量較高，Con組和HFD組能明顯區(qū)分。給予辛伐他汀及大黃素后內(nèi)源性小分子和大分子代謝物均表現(xiàn)向正常狀態(tài)回歸的趨勢。見圖2、3。

▲為Con組；◆為HFD組；●為Simvastatin組；■為Emodin組；R2X值表示模型擬合情況；Q2值表示模型的預(yù)測能力；圖中A、C、D為PCA分值散點(diǎn)分布，B為因子載荷

圖2 血漿1H-NMR CPMG實(shí)驗(yàn)PLS-DA得分及載荷圖

▲為Con組；◆為HFD組；●為Simvastatin組；■為Emodin組；R2X值表示模型擬合情況；Q2值表示模型的預(yù)測能力；圖中A、C、D為PCA分值散點(diǎn)分布，B為因子載荷

圖3 血漿1H-NMR LEDBP實(shí)驗(yàn)PLS-DA得分及因子載荷圖

3 討論

高脂血癥作為腦卒中、冠心病、心肌梗死等的危險因素之一，進(jìn)行早期控制，減少并發(fā)癥發(fā)生，是降低患者心血管事件發(fā)生的有效控制手段。本研究采用高脂血癥動物模型，觀察大黃素對血脂紊亂的改善作用，研究結(jié)果表明，大黃素70 mg/kg給藥可以改善動物模型血脂紊亂，降低血清脂質(zhì)含量。

調(diào)血脂藥物的藥效評價需要建立可靠的血脂代謝紊亂動物模型，豚鼠和金黃地鼠兩種動物具有成本較低、造模時間較短的優(yōu)點(diǎn)，因此目前國際上趨向于采用上述兩種動物來建立高脂模型研究血脂代謝相關(guān)疾病[5]。通過前期的研究發(fā)現(xiàn)，金黃地鼠的脂蛋白譜特征與人類更為相似，并已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于脂代謝研究中[4]。因此，本研究采用金黃地鼠，結(jié)合喂養(yǎng)給予高脂飼料后誘導(dǎo)動物發(fā)生血脂增高，建立接近于人類高脂血癥發(fā)病機(jī)制的動物模型。從結(jié)果分析，金黃地鼠給予高脂飼料后，血脂水平顯著升高。血清指標(biāo)：模型組血清TC、TG、LDL-C 含量升高，與同期正常組相比，有顯著性差異。采用該模型觀察，大黃素顯著降低血清TC、TG和LDL-C水平，顯示出顯著地改善血脂紊亂作用，并且大黃素并未降低血清中HDL-C含量，提示大黃素在降低血清脂質(zhì)的同時，不影響HDL-C水平。由于高密度脂蛋白的主要功能是轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇排出，是一種抗動脈粥樣硬化的血漿脂蛋白，是冠心病的保護(hù)因子[6]。據(jù)此推測，大黃素改善HDL-C功能的性質(zhì)可能對心血管疾病的治療有積極意義。

脂蛋白是TG、膽固醇、膽固醇酯和磷脂等與不同載脂蛋白形成的功能性復(fù)合體[7]，其中的脂質(zhì)成分除了為機(jī)體提供能量，還參與了細(xì)胞成分構(gòu)建和信號傳遞等重要的生理生化過程[8]。機(jī)體內(nèi)的脂質(zhì)存在于不同的載體上，代表著不同的代謝狀態(tài)，脂蛋白的含量和脂質(zhì)運(yùn)載情況能直觀反映這種代謝差異。本研究采用分子篩凝膠色譜法對微量血清中脂蛋白進(jìn)行分離，將脂蛋白VLDL、LDL峰群與HDL峰完全分離，提高了脂蛋白分析的精確性[5]。本研究結(jié)果顯示，不同脂蛋白組分中脂質(zhì)含量存在差異。給予大黃素使血清VLDL中TC和TG含量顯著下降，但LDL轉(zhuǎn)運(yùn)TG的能力較強(qiáng)，而HDL轉(zhuǎn)運(yùn)TC的作用更加突出。脂蛋白譜不僅驗(yàn)證了生化指標(biāo)變化的結(jié)果，同時能精細(xì)分析大黃素對不同脂蛋白功能的改變，因此本研究進(jìn)一步分析了大黃素對HDL功能影響。

HDL是一種獨(dú)特的脂蛋白，具有明確的抗動脈粥樣硬化的作用，并因此獲得具有“抗動脈粥樣硬化性脂蛋白”的美稱，但是以Torcetrapib為代表的藥物，通過增加高密度脂蛋白濃度來改善冠心病的藥物卻遭受失敗的重創(chuàng)[9]。因此，反思CEPT抑制劑的開發(fā)歷程，研究人員發(fā)現(xiàn)，單純提高高密度脂蛋白數(shù)量，不能夠等同于心血管事件的降低，而高密度脂蛋白功能卻被忽視了。最新的研究表明，高密度脂蛋白功能的提升，有助于改善實(shí)驗(yàn)性心血管事件的發(fā)生[10]。通過脂蛋白譜結(jié)合脂質(zhì)檢測分析，大黃素治療后，金黃地鼠血清HDL運(yùn)載TC、TG的能力顯著提高。提示其可能具有調(diào)節(jié)HDL功能改善血脂代謝紊亂的作用，具體的機(jī)制仍需后續(xù)研究補(bǔ)充。

采用代謝組學(xué)方法研究內(nèi)源性物質(zhì)的變化及代謝輪廓的變化，不僅可以觀察到傳統(tǒng)指標(biāo)的變化，還可以觀察到糖、氨基酸代謝狀態(tài)的改變，可以加深對疾病狀態(tài)下機(jī)體組織功能的改變，也是全面評價藥物的新手段，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)生化指標(biāo)檢測的不足之處[11-12]。

研究表明，與正常動物相比，高脂血癥金黃地鼠的糖、脂及氨基酸代謝均有明顯變化在糖代謝方面，三羧酸循環(huán)的中間產(chǎn)物乳酸及檸檬酸濃度的降低表明糖酵解速率改變，三羧酸循環(huán)減弱；在脂代謝方面，F(xiàn)C、FFA明顯升高，與生化檢測結(jié)果一致，合成脂蛋白的膽堿類化合物及不飽和脂肪酸含量下降；在氨基酸代謝方面，模型組甲硫氨酸和甜菜堿濃度升高，表明體內(nèi)甲硫氨酸循環(huán)增強(qiáng)，可能導(dǎo)致致動脈粥樣硬化危險因素——同型半胱氨酸的升高[13]。N-乙酰糖蛋白的增高提示炎性反應(yīng)發(fā)生。大黃素可降低TG、游離膽固醇以及酯化膽固醇、游離脂肪酸含量，使膽堿化合物磷脂酰膽堿含量升高，后者是合成脂蛋白HDL的重要成分[14]。大黃素促進(jìn)脂蛋白合成，防止膽固醇在肝臟內(nèi)的堆積。卵磷脂使血液中膽固醇及TG含量降低，減少由膽固醇引起的血管內(nèi)膜損傷，抑制粥樣硬化斑塊生成[15]。大黃素升高卵磷脂含量，有助于降低血中TC、TG含量，利于預(yù)防及治療心血管疾病。

本研究顯示，大黃素具有顯著改善高脂血癥金黃地鼠血脂代謝紊亂的作用，使血清脂蛋白譜向正?；貧w，且能夠增加高密度脂蛋白的脂質(zhì)運(yùn)載能力，代謝組學(xué)研究結(jié)果表明，大黃素可調(diào)節(jié)血脂水平紊亂動物的血漿內(nèi)源性代謝物代謝輪廓向正?；貧w。提示大黃素在治療高脂血癥方面具有深入研究價值。

[參考文獻(xiàn)]

[1] Wang TJ，Gona P，Larson MG，et al. Multiple biomarkers for the prediction of first major cardiovascular events and death [J]. N Engl J Med，2006，355（25）：2631.

[2] Stancu C，Sima A. Statins： mechanism of action and effects [J]. J Cell Mol Med，2001，5（4）：378-387.

[3] 張喜平.大黃素的藥理作用研究概況[J].中國藥理學(xué)通報，2003，19（8）：851-854.

[4] 高瑩，李可基，唐世英，等.幾種高脂血癥動物模型的比較[J].衛(wèi)生研究，2002，31（2）： 97-99.

[5] Yang L，F(xiàn)an B，Yang K，et al. A simple and sensitive method for lipoprotein and lipids profiles analysis of individual micro-liter scale serum samples [J]. Chemistry and Physics of Lipids，2012，165：133-141.

[6] Yusuf S，Reddy S，Ounpuu S，et al. Global burden of cardiovascular diseases. PartⅠ. General considerations，the epidemiologic transition，risk factors，and impact of urbanization [J]. Circulation，2001，104：2746–2753.

[7] Olson RE. Discovery of the lipoproteins，their role in fat transport and their significance as risk factors [J]. J Nutr，1998，128：439S-443S.

[8] Vaisar T，Pennathur S，Green PS，et al. Shotgun proteomics implicates protease inhibition and complement activation in the antiinflammatory properties of HDL [J]. J Clin Invest，2007，117（3）：746-756.

[9] Tall AR，Yvan-Charvet L，Wang N. The Failure of Torcetrapib，was it the Molecule or the Mechanism？ [J]. Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology，2007，27：257-260.

[10] Florentin M，Liberopoulos EN，Mikhailidis DP，et al. Emerging options in the treatment of dyslipidemias：a bright future？ [J]. Expert Opin Emerg Drugs，2011，16：247-270.

[11] Rochfort S. Metabolomics review：a new “omies” platform technology for systems biology and implications for natural products research [J]. J Nat Prod，2005，68：1813-1820.

[12] Griffin JL. Metabonomics：NMR spectroscopy and pattern recognition analysis of body fluids and tissues for characterization of xenobiotic toxicity and disease diagnosis [J]. Curr Opin Chem Biol，2003，7：648-654.

[13] Ueland PM，Holm PI，Hustad S. Betaine：a key modulator of one-carbon metabolism and homocysteine status [J]. Clin Chem Lab Med，2005，43：1069-1075.

[14] Willker W，Leibfritz D. Assignment of mono-and polyunsaturated fatty acids in lipids of tissues and body fluids [J]. Magn Reson Chem，1998，36：S79-S84.

[15] Kuksis A，Roberts A，Thompson JS，et al. Plasma phosphatidylcholine/free cholesterol ratio as an indicator for atherosclerosis [J]. Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology，1983，3：389-397.

（收稿日期：2014-05-19 本文編輯：程 銘）

[參考文獻(xiàn)]

[1] Wang TJ，Gona P，Larson MG，et al. Multiple biomarkers for the prediction of first major cardiovascular events and death [J]. N Engl J Med，2006，355（25）：2631.

[2] Stancu C，Sima A. Statins： mechanism of action and effects [J]. J Cell Mol Med，2001，5（4）：378-387.

[3] 張喜平.大黃素的藥理作用研究概況[J].中國藥理學(xué)通報，2003，19（8）：851-854.

[4] 高瑩，李可基，唐世英，等.幾種高脂血癥動物模型的比較[J].衛(wèi)生研究，2002，31（2）： 97-99.

[5] Yang L，F(xiàn)an B，Yang K，et al. A simple and sensitive method for lipoprotein and lipids profiles analysis of individual micro-liter scale serum samples [J]. Chemistry and Physics of Lipids，2012，165：133-141.

[6] Yusuf S，Reddy S，Ounpuu S，et al. Global burden of cardiovascular diseases. PartⅠ. General considerations，the epidemiologic transition，risk factors，and impact of urbanization [J]. Circulation，2001，104：2746–2753.

[7] Olson RE. Discovery of the lipoproteins，their role in fat transport and their significance as risk factors [J]. J Nutr，1998，128：439S-443S.

[8] Vaisar T，Pennathur S，Green PS，et al. Shotgun proteomics implicates protease inhibition and complement activation in the antiinflammatory properties of HDL [J]. J Clin Invest，2007，117（3）：746-756.

[9] Tall AR，Yvan-Charvet L，Wang N. The Failure of Torcetrapib，was it the Molecule or the Mechanism？ [J]. Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology，2007，27：257-260.

[10] Florentin M，Liberopoulos EN，Mikhailidis DP，et al. Emerging options in the treatment of dyslipidemias：a bright future？ [J]. Expert Opin Emerg Drugs，2011，16：247-270.

[11] Rochfort S. Metabolomics review：a new “omies” platform technology for systems biology and implications for natural products research [J]. J Nat Prod，2005，68：1813-1820.

[12] Griffin JL. Metabonomics：NMR spectroscopy and pattern recognition analysis of body fluids and tissues for characterization of xenobiotic toxicity and disease diagnosis [J]. Curr Opin Chem Biol，2003，7：648-654.

[13] Ueland PM，Holm PI，Hustad S. Betaine：a key modulator of one-carbon metabolism and homocysteine status [J]. Clin Chem Lab Med，2005，43：1069-1075.

[14] Willker W，Leibfritz D. Assignment of mono-and polyunsaturated fatty acids in lipids of tissues and body fluids [J]. Magn Reson Chem，1998，36：S79-S84.

[15] Kuksis A，Roberts A，Thompson JS，et al. Plasma phosphatidylcholine/free cholesterol ratio as an indicator for atherosclerosis [J]. Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology，1983，3：389-397.

（收稿日期：2014-05-19 本文編輯：程 銘）

[參考文獻(xiàn)]

[1] Wang TJ，Gona P，Larson MG，et al. Multiple biomarkers for the prediction of first major cardiovascular events and death [J]. N Engl J Med，2006，355（25）：2631.

[2] Stancu C，Sima A. Statins： mechanism of action and effects [J]. J Cell Mol Med，2001，5（4）：378-387.

[3] 張喜平.大黃素的藥理作用研究概況[J].中國藥理學(xué)通報，2003，19（8）：851-854.

[4] 高瑩，李可基，唐世英，等.幾種高脂血癥動物模型的比較[J].衛(wèi)生研究，2002，31（2）： 97-99.

[5] Yang L，F(xiàn)an B，Yang K，et al. A simple and sensitive method for lipoprotein and lipids profiles analysis of individual micro-liter scale serum samples [J]. Chemistry and Physics of Lipids，2012，165：133-141.

[6] Yusuf S，Reddy S，Ounpuu S，et al. Global burden of cardiovascular diseases. PartⅠ. General considerations，the epidemiologic transition，risk factors，and impact of urbanization [J]. Circulation，2001，104：2746–2753.

[7] Olson RE. Discovery of the lipoproteins，their role in fat transport and their significance as risk factors [J]. J Nutr，1998，128：439S-443S.

[8] Vaisar T，Pennathur S，Green PS，et al. Shotgun proteomics implicates protease inhibition and complement activation in the antiinflammatory properties of HDL [J]. J Clin Invest，2007，117（3）：746-756.

[9] Tall AR，Yvan-Charvet L，Wang N. The Failure of Torcetrapib，was it the Molecule or the Mechanism？ [J]. Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology，2007，27：257-260.

[10] Florentin M，Liberopoulos EN，Mikhailidis DP，et al. Emerging options in the treatment of dyslipidemias：a bright future？ [J]. Expert Opin Emerg Drugs，2011，16：247-270.

[11] Rochfort S. Metabolomics review：a new “omies” platform technology for systems biology and implications for natural products research [J]. J Nat Prod，2005，68：1813-1820.

[12] Griffin JL. Metabonomics：NMR spectroscopy and pattern recognition analysis of body fluids and tissues for characterization of xenobiotic toxicity and disease diagnosis [J]. Curr Opin Chem Biol，2003，7：648-654.

[13] Ueland PM，Holm PI，Hustad S. Betaine：a key modulator of one-carbon metabolism and homocysteine status [J]. Clin Chem Lab Med，2005，43：1069-1075.

[14] Willker W，Leibfritz D. Assignment of mono-and polyunsaturated fatty acids in lipids of tissues and body fluids [J]. Magn Reson Chem，1998，36：S79-S84.

[15] Kuksis A，Roberts A，Thompson JS，et al. Plasma phosphatidylcholine/free cholesterol ratio as an indicator for atherosclerosis [J]. Arteriosclerosis Thrombosis and Vascular Biology，1983，3：389-397.

（收稿日期：2014-05-19 本文編輯：程 銘）