金山、金焰繡線菊組織培養(yǎng)技術(shù)體系的建立1)

杜明廣，孫海濱

(1.黑龍江省林業(yè)科學(xué)院江山嬌實驗林場，黑龍江寧安157432；2.黑龍江省林業(yè)科學(xué)院，哈爾濱150081)

金山繡線菊(Spiraea×bumalda‘Goalden Mound’)落葉小灌木，高達30～60cm，冠幅可達60～90cm。老枝褐色，新枝黃色，枝條呈折線狀，不通直，柔軟?；ㄆ陂L，彩葉期5個月。喜光，稍耐陰，極耐寒，耐旱，易成型。

金焰繡線菊(Spiraea×bumaldacv.coldfiame)，落葉灌木。株高0.4～0.6m，冠幅0.7～0.8m。新梢頂端幼葉紅色，下部葉片黃綠色，花期長達4個月。喜光照及溫暖濕潤的氣候，耐寒，耐修剪，可作地被。

金焰繡線菊葉色有豐富的季相變化，橙紅色新葉，黃色葉片和冬季紅葉頗具感染力?；ㄆ陂L，花量多，是花葉俱佳的新優(yōu)小灌木。可單株修剪成球型，或群植作色塊，或作花鏡、花壇植物。植株大小控制在30cm 左右。一片橙紅色新葉，似朵朵紅花開放，園林景觀觀賞效果很好。

1 實驗材料與方法

1.1 實驗材料采集

試材采自黑龍江省森林植物園珍貴樹種園，母株選取生長無病蟲害、冠型飽滿、健壯、生長狀況基本一致的繡線菊。外植體選取金山繡線菊、金焰繡線菊的幼嫩莖段為試驗材材。

1.2 實驗設(shè)計與試驗方法

外植體的處理選取健壯植株的幼嫩莖段，將葉子除去，在清水下沖洗2h左右。在超凈工作臺內(nèi)進行材料滅菌消毒。首先用70%酒精浸30s，之后采用0.1% HgCl2進行7min消毒處理，然后用無菌水沖洗3次。將滅菌的金山、金焰繡線菊嫩枝放在無菌紙上，用無菌刀將其切成2.0cm左右的帶2～3個腋芽的莖段，接種于初代培養(yǎng)基上，實驗采用正交實驗設(shè)計。

2 結(jié)果與分析

2.1 初代培養(yǎng)基選擇

以MS和WPM為初代基本培養(yǎng)基。在MS培養(yǎng)基中共設(shè)置5組進行對比，分別為6-BA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L；6-BA1.5mg/L+NAA0.1 mg/L；6-BA2.0 mg/L+NAA0.1 mg/L；6-BA2.0mg/L+NAA0.15mg/L；6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L；在WPM培養(yǎng)基中只設(shè)置一種培養(yǎng)，以6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L進行初代培養(yǎng)。每種培養(yǎng)基設(shè)置5個重復(fù)，每個培養(yǎng)基內(nèi)接種2～3個外植體，30d后進行統(tǒng)計見表1。

表1 初代培養(yǎng)基篩選

在初代培養(yǎng)基上進行帶芽莖段的誘導(dǎo)培養(yǎng)，30d后觀測結(jié)果見表1。從表1中可以看出，6號培養(yǎng)基WPM+6-BA2.0mg/L+NAA0.1mg/L對金山、金焰繡線菊嫩莖的組織培養(yǎng)有良好的效果，所用時間最少且效果最佳。1號、2號、3號、4號、5號培養(yǎng)基對金山繡線菊、金焰繡線菊嫩莖的組織培養(yǎng)有一定的促進作用，其中3號培養(yǎng)基的促進效果稍微明顯，并有展葉的趨向，表明在以MS為基本培養(yǎng)基，在6-BA濃度一定的情況下，NAA的濃度以0.1mg/L為最佳；另外1號培養(yǎng)基中的外植體萌動最晚，組培苗長勢最差，表明在以MS為基本培養(yǎng)基，NAA濃度一定的情況下，6-BA的濃度以1.0 mg/L為最差。

由此可見，以WPM為基本培養(yǎng)基，芽的誘導(dǎo)和分化情況遠遠好于以MS作為基本培養(yǎng)基，這表明WPM培養(yǎng)基比MS培養(yǎng)基培養(yǎng)效果好。WPM培養(yǎng)基在接種4d后達到萌動并展葉，大大提高了培養(yǎng)的速率，是金山、金焰繡線菊最適的初代培養(yǎng)基。

2.2 繼代增殖培養(yǎng)基選擇

金山、金焰繡線菊以WPM為繼代增殖培養(yǎng)的基本培養(yǎng)基，附加不同濃度的激素后，設(shè)計出以下培養(yǎng)基：6-BA0.25mg/L+NAA0.1mg/L，培養(yǎng)基6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L和培養(yǎng)基6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L。在上述3種培養(yǎng)基中篩選增殖培養(yǎng)基，添加2%蔗糖，每種培養(yǎng)基設(shè)置4個重復(fù)，接種30d后分別進行統(tǒng)計結(jié)果。

將2～3cm長的無菌苗從莖段上切下，再分別將其切成1～2cm的帶1～2個腋芽的莖段，轉(zhuǎn)入繼代增殖培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，30d后統(tǒng)計結(jié)果見表2。從表2可以看出，1號培養(yǎng)基幾乎沒有增殖跡象表現(xiàn)，2、3號培養(yǎng)基表現(xiàn)出增殖跡象，并在3號培養(yǎng)基上繡線菊長勢最好，2號培養(yǎng)基雖然長勢良好，但有些只能形成愈傷組織并不生長，不能達到增殖的目的。分析比較得出，3號培養(yǎng)WPM+6-BA1.0 mg/L+NAA0.1mg/L為金山、金焰繡線菊的最適增殖培養(yǎng)基。

表2 增殖培養(yǎng)基篩選

2.3 壯苗與生根

以WPM為基本培養(yǎng)基，配方采用不同的激素配比(IBA0.3mg/L+NAA0.2mg/L)培養(yǎng)基、(IBA0.3mg/L+NAA0.5mg/L)培養(yǎng)基、(IBA0.3mg/L+NAA1.0mg/L)培養(yǎng)基。在3種培養(yǎng)基中進行壯苗生根培養(yǎng)，每種培養(yǎng)基設(shè)置4個重復(fù)，接種12d后統(tǒng)計生根情況，對生根的長度、生的條數(shù)以及培養(yǎng)苗的高度進行統(tǒng)計。

表3 生根培養(yǎng)基篩選

將生長健壯、高2～3cm的無根苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，培養(yǎng)12d后調(diào)查統(tǒng)計試驗結(jié)果。從表3可以看出，3種培養(yǎng)基培育12d后莖均有生長，且3種培養(yǎng)基中外植體均能生根，經(jīng)觀察比較，其中培養(yǎng)基WPM+IBA0.3mg/L+NAA0.2mg/L在壯苗的同時可以達到較好的生根效果。

3 結(jié)論

3.1 選擇健壯的母樹，以帶腋芽的莖段為外植體，建立無菌苗繁育體系。

3.2 以WPM為基本培養(yǎng)基，增殖培養(yǎng)基為WPM+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+2%蔗糖。

3.3 生根培養(yǎng)WPM+IBA0.3mg/L+NAA0.2mg/L。

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