五味子多糖對(duì)腦膠質(zhì)瘤SHG-44細(xì)胞血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)水平的影響

溫 娜 唐澤波 金 宏 張 宇 劉興吉 齊 玲 于洪泉

(吉林醫(yī)藥學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，吉林 吉林 132013)

腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見的原發(fā)性腫瘤，惡性程度高，約占顱內(nèi)腫瘤的45％〔1〕。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是調(diào)節(jié)腫瘤微血管生成的重要因子之一〔2〕。五味子多糖具有抗腫瘤活性〔3～5〕，但其具體的抗腫瘤作用機(jī)制尚不清楚。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)五味子多糖可以抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)〔6〕。本文將進(jìn)一步研究五味子多糖對(duì)體外培養(yǎng)腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞株(SHG-44)細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響，旨在探討五味子多糖抑制腦腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1細(xì)胞和主要試劑 SHG-44細(xì)胞(吉林大學(xué)第一醫(yī)院神經(jīng)外科于洪泉主治醫(yī)師提供)，細(xì)胞培養(yǎng)基RPMI-1640 (美國Hyclone公司)，0.25％胰蛋白酶、小牛血清(美國Gibco公司)，五味子多糖(北華大學(xué)提供)，VEGF兔抗人多克隆抗體(北京中杉公司)。

1.2SHG-44細(xì)胞的培養(yǎng) 從液氮中取出凍存的SHG-44細(xì)胞，迅速放入37℃水浴箱中搖動(dòng)溶解，然后將細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶中，加入10 ml含10％小牛血清的RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)液，將其置入37℃、5％CO2及飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，隔日換液。

1.3酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定培養(yǎng)細(xì)胞上清中VEGF蛋白 將SHG-44細(xì)胞用0.25％胰酶消化，24孔培養(yǎng)板中接種細(xì)胞懸液，實(shí)驗(yàn)分為空白對(duì)照組(不含藥物)和3個(gè)加藥組(五味子多糖濃度分別為1.25、2.5、5 mmol/L)，作用48 h，每組設(shè)5個(gè)復(fù)孔，加藥期間用含5％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞。取細(xì)胞培養(yǎng)上清，將上清液與包被液按1∶1的比例加入96孔酶標(biāo)板中(空白對(duì)照組為100％包被液)，4℃過夜。封閉后加入VEGF兔抗人多克隆抗體(1∶500稀釋)4℃過夜。加入二抗(1∶1 000稀釋)，室溫孵育2 h，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色液室溫避光3～5 min，當(dāng)有顏色變化時(shí)加入終止液。酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀492 nm處測(cè)定吸光度(A)值。用空白對(duì)照組(無細(xì)胞)調(diào)零。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)。

2 結(jié) 果

2.1五味子多糖作用后細(xì)胞分泌VEGF蛋白的變化 1.25、2.5、5 mmol/L濃度的五味子多糖作用SHG-44細(xì)胞48 h后，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，SHG-44細(xì)胞分泌VEGF蛋白的水平不同，1.25和2.5 mmol/L濃度組SHG-44細(xì)胞分泌VEGF蛋白水平呈下降趨勢(shì)，但與對(duì)照組相比，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而5 mmol/L濃度組SHG-44細(xì)胞分泌VEGF蛋白水平明顯降低，與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見圖1。

圖1 五味子多糖作用后SHG-44細(xì)胞分泌VEGF蛋白的變化

3 討 論

腦膠質(zhì)瘤是最常見的顱內(nèi)惡性腫瘤，發(fā)病率和死亡率都很高，病程難以控制，目前治療方案仍然是手術(shù)切除輔以放療和化療等綜合治療為主。腫瘤生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)所需的氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)必須從腫瘤的新生血管中來獲得，如果腫瘤在生成過程中沒有新的血管生成，那么，即使是超過1 mm3體積大小的實(shí)體瘤也會(huì)因從血管中得不到賴以生存的氧氣和營(yíng)養(yǎng)而發(fā)生休眠、壞死或凋亡〔7，8〕。這些都充分說明了腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移在很大程度上依賴于腫瘤中新生血管的形成，新生血管的形成是腫瘤生長(zhǎng)的必要條件〔9〕。所以，腫瘤中新生血管的形成是腫瘤快速生長(zhǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。對(duì)于腫瘤而言，抑制腫瘤細(xì)胞增殖是抗腫瘤治療的一個(gè)重要環(huán)節(jié)〔10〕。抑制新生血管的生成無疑是一種簡(jiǎn)單而有效的治療策略。

VEGF廣泛分布于人和動(dòng)物大腦、腎臟、肝臟、脾臟、胰腺和骨骼等組織中，正常成人體內(nèi)維持在一個(gè)較低水平。只有在生理需要或病理的情況下，如胚胎形成、骨骼生長(zhǎng)及腫瘤形成的過程中出現(xiàn)VEGF過度表達(dá)，促使血管生成急劇增加〔11〕。五味子抗腫瘤作用主要集中在木脂素和多糖部位〔12〕，其中，五味子多糖是其抗腫瘤的主要成分之一，藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，五味子具有包括抗腫瘤作用在內(nèi)的多種活性作用〔3～5〕。

本研究結(jié)果與本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)五味子多糖可以抑制腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的結(jié)果一致〔6〕。說明五味子多糖可能是通過抑制腫瘤細(xì)胞分泌VEGF表達(dá)，從而發(fā)揮其抗腫瘤作用。

4 參考文獻(xiàn)

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