G蛋白耦聯(lián)受體、CD44v6和E-cadherin在卵巢黏液性腺癌中的表達(dá)及意義

欒 磊

(齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，黑龍江 齊齊哈爾 161000)

卵巢黏液性腺癌是由部分或全部含細(xì)胞內(nèi)黏液的瘤細(xì)胞構(gòu)成的腫瘤，病變進(jìn)展中多種蛋白異常表達(dá)。富含亮氨酸重復(fù)序列G-蛋白耦聯(lián)受體(LGR)5作為WNT信號通路的靶基因和腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物，與多種腫瘤的生物學(xué)進(jìn)展密切相關(guān)〔1，2〕。白細(xì)胞分化抗原(CD)44v6是一種跨膜糖蛋白，參與多種細(xì)胞生長、生存、分化的過程，在細(xì)胞惡變過程中參與黏附、移動和轉(zhuǎn)移的過程〔3，4〕。上皮型黏附素(E-cadherin)是經(jīng)典的黏附蛋白，在正常上皮中高表達(dá)，對維持上皮的結(jié)構(gòu)和功能有重要作用，當(dāng)其表達(dá)丟失后，可以引起上皮細(xì)胞的松解，使細(xì)胞易于遷移〔5，6〕。本研究針對卵巢黏液性腺癌術(shù)后組織中LGR5、CD44v6和E-cadherin的表達(dá)進(jìn)行檢測，關(guān)注其相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1臨床資料 我院近3年行卵巢黏液性腺癌根治術(shù)后的蠟塊組織及臨床資料114例作為觀察組，均符合WHO中相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)病理學(xué)醫(yī)師再次HE切片后確定。年齡50～78(平均66.3)歲。我院同期行卵巢交界性黏液性囊腺瘤術(shù)后的組織蠟塊70例作為對照組，年齡51～77(平均65.4)歲。我院同期行卵巢黏液性囊腺瘤術(shù)后的組織蠟塊70例作為正常對照組，年齡52～70(平均64.3)歲。3組一般資料無明顯差別。

1.2LGR5、CD44v6和E-cadherin蛋白的檢測 LGR5、CD44v6和E-cadherin蛋白的檢測應(yīng)用免疫組化SABC法。三種抗體的濃縮液均購自武漢博士德生物工程公司，依據(jù)不同比例進(jìn)行稀釋后進(jìn)行預(yù)實驗，選擇最理想的配比濃度進(jìn)行正式實驗，應(yīng)用DAB染色，操作均按說明書進(jìn)行，嚴(yán)格質(zhì)控，減少誤差。

1.3LGR5、CD44v6和E-cadherin結(jié)果的判斷方法 LGR5以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，CD44v6以細(xì)胞質(zhì)和(或)細(xì)胞膜中出現(xiàn)棕黃色為陽性細(xì)胞，E-cadherin以細(xì)胞膜中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。計數(shù)5個400倍視野，以陽性細(xì)胞≥5％定為陽性，以陽性細(xì)胞<5％定為陰性。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SAS6.12軟件進(jìn)行χ2檢驗、線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1觀察組不同臨床特征患者LGR5、CD44v6和E-cadherin蛋白表達(dá)陽性率的比較 觀察組LGR5、CD44v6和E-cadherin的表達(dá)與腫瘤的最大徑、脈管浸潤、TNM分期、腹水中是否有癌細(xì)胞密切相關(guān)。見表1。

表2 觀察組不同臨床特征患者LGR5、CD44v6和E-cadherin蛋白表達(dá)陽性率的比較〔n(％)〕

2.2LGR5、CD44v6和E-cadherin蛋白在三組中表達(dá)陽性率的比較 LGR5、CD44v6和E-cadherin在三組中表達(dá)陽性率的差別均顯著(P<0.000 1)。見表2。

2.3觀察組LGR5、CD44v6和E-cadherin表達(dá)的相關(guān)性分析 觀察組LGR5和E-cadherin(r=-0.47，P=0.037 1)、CD44v6和E-cadherin(r=-0.49，P=0.0251)表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)。

表2 LGR5、CD44v6和E-cadherin蛋白在三組中表達(dá)陽性率的比較〔n(％)〕

3 討 論

卵巢黏液性腺癌多見于中老年人，腫瘤細(xì)胞與宮頸內(nèi)膜、胃幽門部或小腸上皮相似，部分腫瘤中有散在的杯狀細(xì)胞分布。病變發(fā)展時常伴有出血、壞死。多種研究認(rèn)為卵巢黏液性囊腺癌在進(jìn)展時有明顯的間質(zhì)侵襲。病理學(xué)者認(rèn)為腫瘤的異質(zhì)性明顯，不僅反映腫瘤從良性到惡性的發(fā)展過程，還由于多種相關(guān)基因和蛋白的調(diào)節(jié)失常，加速了腫瘤性病變的進(jìn)展〔7〕。LGR5又名GPR49、HG38、FEX、GPR67，是由18個富含亮氨酸的重復(fù)單位和7個跨膜區(qū)域組成的大分子蛋白，其也是LGR的重要成員之一〔8〕。在WNT經(jīng)典信號途徑的研究中，LGR5作為WNT信號通路中B聯(lián)蛋白TCF4的靶向基因，可以高效調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖和分化過程〔9〕。有研究顯示LGR5陽性的細(xì)胞具有分化成為所有的上皮系細(xì)胞的潛能，也證實了其為小腸和結(jié)腸干細(xì)胞的特異性分子標(biāo)記蛋白〔10，11〕。CD44是一種廣泛分布的跨膜糖蛋白，其亞型CD44v6含有變異型拼接外顯子，即在細(xì)胞膜外靠近細(xì)胞區(qū)插入了43個由v6變異拼接型外顯子所編碼的不同序列氨基酸〔12，13〕。CD44v6作用機制可能是表達(dá)CD44v6的腫瘤細(xì)胞與遠(yuǎn)離的淋巴管和血管內(nèi)相應(yīng)配體結(jié)合，使轉(zhuǎn)移該處的腫瘤細(xì)胞的穩(wěn)定性增加〔14〕。E-cadherin作為機體調(diào)節(jié)黏附蛋白，廣泛分布在胚胎組織和成熟組織的上皮細(xì)胞中，E-cadherin可以調(diào)節(jié)胚胎組織的發(fā)育、組織的構(gòu)成，同時對調(diào)節(jié)細(xì)胞間的信息傳遞有積極作用〔15，16〕。腫瘤進(jìn)展時，E-cadherin常表達(dá)減少或丟失，引起上皮細(xì)胞松動，易于發(fā)生轉(zhuǎn)移。也有觀點認(rèn)為E-cadherin作為經(jīng)典的黏附蛋白，是腫瘤細(xì)胞浸潤轉(zhuǎn)移的抑制劑〔17〕，如果致癌因素引起E-cadherin表達(dá)失調(diào)，則細(xì)胞間連接松動，為腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)灶創(chuàng)造了重要條件，此時轉(zhuǎn)移潛能增加〔18〕。

本實驗提示LGR5、CD44v6和E-cadherin異常表達(dá)是腫瘤惡變的重要因素。LGR5作為WNT信號通路中的靶基因，當(dāng)其異常表達(dá)時，引起LGR5對WNT進(jìn)行負(fù)性調(diào)控，可以直接引起上皮細(xì)胞的增生和分化〔19〕。由于黏液性癌是上皮源性的，也起自原始干細(xì)胞，因此LGR5干細(xì)胞標(biāo)記特征也證實腫瘤細(xì)胞的分化尚不夠成熟，分化程度低。本結(jié)果提示三種蛋白參與腫瘤的進(jìn)展。由于脈管浸潤、TNM分期及腹水中有無癌細(xì)胞是判斷腫瘤生物學(xué)行為及預(yù)后的重要指標(biāo)，因此LGR5、CD44v6和E-cadherin的聯(lián)合檢測可能在一定程度上預(yù)示著腫瘤的預(yù)后。腹水中有癌細(xì)胞提示腫瘤處于進(jìn)展?fàn)顟B(tài)，其與腫瘤浸潤和播散有密切關(guān)系。LGR5和E-cadherin、CD44v6和E-cadherin的表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)性，提示三者具有協(xié)同作用，也提示LGR5和CD44v6高表達(dá)后，在一定程度上可以下調(diào)E-cadherin的表達(dá)，使腫瘤處于進(jìn)展?fàn)顟B(tài)，尤其是使癌細(xì)胞易于脫落，誘發(fā)轉(zhuǎn)移的發(fā)生。但是關(guān)于CD44v6的作用機制可能更趨多元性，有研究認(rèn)為CD44v6可以促進(jìn)腫瘤MMP-2和MMP-9的表達(dá)，使腫瘤轉(zhuǎn)移的屏障消失〔20〕，此時在E-cadherin下調(diào)引起細(xì)胞松動后，使脫落的細(xì)胞易于離開原發(fā)灶，出現(xiàn)轉(zhuǎn)移。

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