直腸癌術(shù)后組織中KLF-4、KLF-6和caveolin-1的表達(dá)及意義

楊培雄 李琳業(yè) 吳占慶 才保加 周 偉

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院創(chuàng)傷急救中心外科,青海 西寧 810000)

直腸癌常見于中老年人，尤其見于伴有腸道息肉綜合征的患者。本病是由直腸黏膜上皮來源的惡性腫瘤，具有明顯肌層浸潤性生長的特征。直腸癌以腺癌為主，機(jī)體蛋白表達(dá)的失常是重要誘發(fā)因素〔1〕。KLF-4、KLF-6是機(jī)體中存在的一種多功能轉(zhuǎn)錄因子，正常時高表達(dá)于上皮細(xì)胞，可以抑制腫瘤性增殖和黏附改變〔2，3〕。窖結(jié)構(gòu)是一種細(xì)胞質(zhì)膜向內(nèi)凹陷形成的小窩結(jié)構(gòu)，呈現(xiàn)出囊狀結(jié)構(gòu)的脂筏，窖蛋白(Caveolin)-1是此種結(jié)構(gòu)的標(biāo)志性蛋白，不僅表現(xiàn)在許多正常的生理現(xiàn)象中，還對信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、血管生成和腫瘤的進(jìn)程有重要促進(jìn)作用〔4，5〕。本文關(guān)注直腸癌術(shù)后組織中KLF-4、KLF-6和Caveolin-1的表達(dá)特征及相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1一般資料 2010年1月至2013年12月我院直腸腺癌行根治手術(shù)的患者110例作為觀察組，均符合WHO中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)病理科醫(yī)師確診，男60例，女50例；年齡54～79歲，平均(66.4±5.3)歲。50例直腸黏膜上皮內(nèi)瘤變的組織作為對照組，年齡53～76歲，平均(66.1±5.5)歲；男26例，女24例。50例正常的直腸黏膜組織作為正常對照組，年齡50～70歲，平均(59.9±5.9)歲；男27例，女23例。3組一般臨床資料無明顯差別，具有可比性。

1.2KLF-4、KLF-6和Caveolin-1蛋白的檢測方法 KLF-4、KLF-6和Caveolin-1蛋白均為濃縮液，購自武漢博士德生物工程公司?？贵w均進(jìn)行預(yù)實驗，選擇最理想的配比濃度進(jìn)行正式實驗。KLF-4、KLF-6和Caveolin-1蛋白的正式實驗應(yīng)用免疫組化SP法，DAB染色，嚴(yán)格按說明書操作，嚴(yán)格質(zhì)量控制，努力減少人為誤差。

1.3KLF-4、KLF-6和Caveolin-1結(jié)果的判定方法 KLF-4和KLF-6均以細(xì)胞核中顯現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，Caveolin-1以細(xì)胞質(zhì)和(或)膜中顯現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞，每張切片計數(shù)10個高倍(400倍)視野，計數(shù)陽性細(xì)胞的百分率，取其平均值。KLF-4、KLF-6和Caveolin-1均以陽性率≥5％計為陽性，以陽性率<5％計為陰性。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12軟件進(jìn)行χ2檢驗和線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.13組KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表達(dá)的比較 3組KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表達(dá)陽性率差異顯著(P<0.000 1)。見表1。

表1 3組KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表達(dá)的比較〔n(％)〕

2.2觀察組不同臨床特征中KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表達(dá)陽性率的比較 觀察組KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表達(dá)的陽性率均與腫瘤的最大徑線、TNM分期、脈管浸潤和腸周淋巴結(jié)檢出數(shù)量密切相關(guān)。見表2。

表2 觀察組不同臨床特征中KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表達(dá)陽性率的比較〔n(％)〕

2.3觀察組中KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表達(dá)相關(guān)性 觀察組中KLF-4與KLF-6(r=0.45，P=0.0420)的表達(dá)呈正相關(guān)。其他指標(biāo)間未見明顯相關(guān)性(P>0.05)。

3 討 論

直腸癌特點是向下浸潤性生長，大部分腫瘤形成腺樣結(jié)構(gòu)，腺腔內(nèi)常包含細(xì)胞碎屑。腫瘤進(jìn)展時常沿管壁延伸，侵過肌層到直腸旁組織，并可以侵犯鄰近結(jié)構(gòu)。在腫瘤性病變進(jìn)展中，機(jī)體癌相關(guān)基因異常表達(dá)，使正常的平衡失調(diào)，加速病變進(jìn)展〔6〕。KLF家族是真核生物中廣泛存在的一類基因和蛋白，廣泛參與細(xì)胞的增殖和分化過程。KLF-4和KLF-6是家族中的重要蛋白，二者在細(xì)胞生長分化過程中的作用常一致，并被認(rèn)為腫瘤的抑制基因〔7，8〕。Chen等〔9〕認(rèn)為KLF-4高表達(dá)可以抑制細(xì)胞周期中G1向S期轉(zhuǎn)變，進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖，發(fā)揮抑癌基因的作用。也有研究認(rèn)為KLF-4和KLF-6 高表達(dá)可以抑制細(xì)胞DNA的合成及細(xì)胞繁殖〔10，11〕。也有觀點認(rèn)為KLF4和KLF-6通過調(diào)節(jié)下游相關(guān)靶基因轉(zhuǎn)錄過程，使二者參與細(xì)胞的周期調(diào)控、增生分化與程序性死亡〔12，13〕。也有觀點認(rèn)為KLF-6可以作用于缺乏TATA盒的核心啟動元件，通過參與細(xì)胞分化、發(fā)育、生長信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞增殖和凋亡過程發(fā)揮作用〔14〕。近來也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)KLF-6可以有效調(diào)節(jié)P21WAFI/CIP1的活化，進(jìn)而有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖過程，抑制細(xì)胞周期素D1的活性，有效抑制細(xì)胞周期的進(jìn)展，調(diào)節(jié)增殖全過程〔15〕。Caveolin-1是1953年發(fā)現(xiàn)的，曾被命名為質(zhì)膜囊泡，富含膽固醇和鞘磷脂，在多種細(xì)胞中高表達(dá)，尤其是內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等細(xì)胞中含量豐富〔16〕。Caveolin-1可以對多種關(guān)鍵信號分子的活性狀態(tài)起直接調(diào)節(jié)作用〔17〕。

本實驗結(jié)果提示KLF-4、KLF-6和Caveolin-1表達(dá)的丟失或下降使直腸黏膜形成惡性轉(zhuǎn)變。此時細(xì)胞異型程度增加，細(xì)胞增殖活躍，腫瘤體積增大，侵襲能力增強(qiáng)。KLF-4、KLF-6和Caveolin-1三種蛋白參與腫瘤的生長及浸潤過程，KLF-4、KLF-6和Caveolin-1的抑癌作用丟失后，癌基因相對激活，從而引起細(xì)胞增殖分化失控、凋亡障礙以及血管生成通路異常，加速腫瘤的進(jìn)展。近年評估直腸腺癌的高危因素除了分化程度低、血管淋巴侵犯及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移外〔18〕，多項研究在關(guān)注腸周淋巴結(jié)的檢出數(shù)量，并認(rèn)為腸周淋巴結(jié)檢出數(shù)量小于12個的患者，無論是否伴有轉(zhuǎn)移，均提示亦為高危因素或預(yù)后不良〔19，20〕。而對于淋巴結(jié)檢出數(shù)量>12個的病例，顯示出明顯的反應(yīng)性增生的特征，是機(jī)體免疫力增加和抗腫瘤能力的表現(xiàn)。本實驗提示KLF-4、KLF-6和Caveolin-1，三種蛋白可能與腸周的淋巴結(jié)反應(yīng)具有一定關(guān)聯(lián)性，也提示腸周淋巴結(jié)檢出<12個的患者KLF-4、KLF-6和Caveolin-1的表達(dá)下降，因此正常情況下KLF-4、KLF-6和Caveolin-1在發(fā)揮抑癌作用的過程中，可能對腸周淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移起到一定抑制的作用，即三者可能具有多元性的作用特征。KLF-4和KLF-6具有協(xié)同正向作用。近年也有學(xué)者認(rèn)為Caveolin-1對腫瘤血管生成有影響，因此Caveolin-1作用也可能與腫瘤細(xì)胞的失控性增殖和血管生成有關(guān)〔21〕，但是其作用過程需待證實。

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