慢性阻塞性肺疾病患者誘導(dǎo)痰中正五聚蛋白3水平的變化及意義

劉 超 王 偉

(山東大學(xué)第二醫(yī)院呼吸內(nèi)科，山東 濟(jì)南 250033)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種可以預(yù)防和治療的疾病，其特征是持續(xù)存在的氣流受限并且氣流受限呈進(jìn)行性發(fā)展，伴有氣道和肺對(duì)有害顆?；驓怏w所致慢性炎癥反應(yīng)的增加。急性加重和并發(fā)癥影響患者整體疾病的嚴(yán)重程度〔1〕。正五聚蛋白3(PTX3)作為長(zhǎng)PTXs成員之一介導(dǎo)固有免疫反應(yīng)，一般情況下在正常人血清和組織中表達(dá)很低，在感染，自身免疫病，退行性病變中表達(dá)增高〔2〕。 Jaillon等〔3〕的研究表明PTX3存儲(chǔ)于中性粒細(xì)胞的特殊顆粒之中，當(dāng)介導(dǎo)微生物識(shí)別和傳輸炎癥信號(hào)時(shí)中性粒細(xì)胞會(huì)快速釋放PTX3，部分釋放的PTX3會(huì)定植于中性粒細(xì)胞外基質(zhì)中。本研究通過(guò)觀察COPD患者和健康體檢者誘導(dǎo)痰中PTX3的水平變化，探究PTX3在COPD氣道炎癥中的水平及其與中性粒細(xì)胞和氣道狹窄的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象 選擇2012年3月至2013年1月山東大學(xué)第二醫(yī)院呼吸內(nèi)科門診及住院部收治的COPD患者90例，其中COPD急性加重期45例(A組)，男28例，女17例，平均年齡(65.25±2.36)歲，第1秒用力呼氣容積與用力肺活量比值(FEV1/FVC)為35.29±7.85,第1秒用力呼氣容積占預(yù)計(jì)值的百分比(FEV1 pre％)為(29.52±3.46)％；COPD穩(wěn)定期45例(B組)，男25例，女20例，平均年齡(67.48±1.45)歲，F(xiàn)EV1/FVC為(58.18±4.72)，F(xiàn)EV1pre％(56.93±7.33)％;對(duì)照組選擇同期山大二院體檢中心健康體檢者45例(C組)，男27例，女18例，平均年齡(67.39±1.32)歲，F(xiàn)EV1/FVC為(86.51±10.21),FEV1pre％為(91.45±9.96)％。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有COPD患者均符合COPD診斷、處理和預(yù)防全球策略(2011年修訂版)的診斷標(biāo)準(zhǔn)，除外合并有其他心肺腦腎和血管疾病、腫瘤、自身免疫系統(tǒng)疾病患者，所有受試者1個(gè)月內(nèi)未服用任何激素及抗炎藥物，且均無(wú)吸煙史，以排除吸煙對(duì)氣道炎性的影響，所有研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)。三組年齡性別無(wú)差異(P>0.05)，A、B組肺功能較C組明顯下降(P<0.05)，A組較B組下降(P<0.05)。

1.2方法

1.2.1肺功能檢測(cè) 使用美國(guó)R&D公司生產(chǎn)的肺功能儀檢測(cè)3組受試者的肺功能，檢測(cè)指標(biāo)主要包括第1秒用力呼氣容積與用力肺活量比值(FEV1/FVC)和第1秒用力呼氣容積占預(yù)計(jì)值的百分比(FEV1 pre％)。

1.2.2誘導(dǎo)痰的采集和處理 ①痰液采集：依據(jù)R?pcke等〔4〕的方法，囑受試者在痰誘導(dǎo)前10 min吸入沙丁胺醇400 μg；霧化前使用清水漱口、擤鼻；選擇3％～5％高滲鹽水超聲霧化吸入15 min，用力咳痰至培養(yǎng)皿；②痰液處理：痰液稱重，加入4倍體積的0.1％的DTT充分混合，37℃水浴10 min，離心沉淀細(xì)胞，計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)。沉渣涂片，HE染色，細(xì)胞分類計(jì)數(shù)。

1.2.3PTX3檢測(cè) 選擇法國(guó)Transgene公司生產(chǎn)的PTX3試劑盒，采用ELISA法檢測(cè)誘導(dǎo)痰上清液中PTX3濃度(ng/ml)，相應(yīng)濃度經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換處理，以lgPTX3表示。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)，相關(guān)性檢驗(yàn)采用Pearson直線相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1誘導(dǎo)痰中PTX3水平及中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù) A、B兩組與C組的細(xì)胞總數(shù)比較無(wú)差異(P>0.05)；A組PTX3水平和中性粒細(xì)胞百分比高于B組(P<0.05)；且兩組PTX3水平和中性粒細(xì)胞百分比均高于C組(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 三組誘導(dǎo)痰中中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)和PTX3比較

2.2相關(guān)性分析 A組誘導(dǎo)痰中中性粒細(xì)胞百分比和PTX3水平呈正相關(guān)(r=0.63，P<0.05)；A組誘導(dǎo)痰中PTX3水平與FEV1 pre％呈負(fù)相關(guān)(r=-0.78，P<0.05)；B組誘導(dǎo)痰中PTX3水平與FEV1 pre％呈負(fù)相關(guān)(r=-0.57，P<0.05)

3 討 論

COPD通常被視為一種炎性氣道疾患，受損的免疫防御機(jī)制導(dǎo)致小氣道低級(jí)別的病毒感染和細(xì)菌定植，而中性粒細(xì)胞通過(guò)釋放各種炎性介質(zhì)，在COPD尤其是急性加重期的炎性機(jī)制中發(fā)揮重要的作用〔5〕，本研究通過(guò)測(cè)定不同程度COPD患者誘導(dǎo)痰中中性粒細(xì)胞的數(shù)量和百分比，發(fā)現(xiàn)COPD患者誘導(dǎo)痰中性粒細(xì)胞數(shù)量和百分比明顯高于健康體檢者，且急性加重期COPD患者誘導(dǎo)痰中中性粒細(xì)胞數(shù)量和百分比也高于穩(wěn)定期COPD患者，在排除了吸煙及藥物因素對(duì)氣道炎癥影響的情況下，進(jìn)一步說(shuō)明中性粒細(xì)胞是參與COPD發(fā)病過(guò)程的重要炎性細(xì)胞。

PTX3作為一種體液因子參與固有免疫進(jìn)程之中，當(dāng)諸如煙霧，流感病毒等可選擇性病原體侵蝕人體時(shí)，其可迅速做出反應(yīng)，發(fā)揮抵抗病原菌的作用〔6〕，當(dāng)前，對(duì)于PTX3的諸多研究〔7〕已應(yīng)用于心肌梗死，高血壓等心血管疾病之中，但在呼吸系統(tǒng)疾病方面卻少有探究。C反應(yīng)蛋白(CRP)和PTX3同屬PTX家族，有研究〔8〕顯示誘導(dǎo)痰中CRP水平可作為預(yù)測(cè)慢性阻塞性肺疾病的嚴(yán)重程度和預(yù)后的指標(biāo)，即CRP水平越高，COPD患者的預(yù)后越差，死亡風(fēng)險(xiǎn)也越高，但對(duì)于同屬PTX家族的PTX3在COPD炎性過(guò)程中的作用目前尚缺乏相關(guān)報(bào)道。

與CRP類似，PTX3參與微生物的調(diào)理作用以及凋亡細(xì)胞的清除，除了固有防御功能，PTX3也參與到中性粒細(xì)胞外基質(zhì)的形成和穩(wěn)定之中〔9〕，本研究顯示，COPD急性加重期患者誘導(dǎo)痰PTX3水平與中性粒細(xì)胞百分比呈正相關(guān)，這一結(jié)果提示誘導(dǎo)痰中PTX3這一固有分子的表達(dá)水平可能與其在中性粒細(xì)胞顆粒中的儲(chǔ)存量有關(guān)，但相關(guān)機(jī)制還需進(jìn)一步探究。

此外，本研究中COPD患者誘導(dǎo)痰中PTX3水平與肺功能呈負(fù)相關(guān)，表明隨著COPD的進(jìn)展，PTX3參與到氣道狹窄的過(guò)程之中，在某種程度上可以作為衡量氣道阻塞程度的標(biāo)記物。與我們的研究結(jié)果不同，Van Pottelberge等〔10〕并未發(fā)現(xiàn)誘導(dǎo)痰中PTX3的含量與COPD患者的嚴(yán)重程度存在相關(guān)性，造成這一差異的原因可能是多方面的，包括受試者的人種，年齡，生活習(xí)慣，所處的環(huán)境水平等都不盡相同。

綜上所述，本研究表明PTX3作為固有免疫反應(yīng)的體液因子在COPD發(fā)病過(guò)程中表達(dá)增多，使得PTX3同CRP以及白細(xì)胞介素(IL)等炎性因子一樣有望成為一種新的氣道炎性標(biāo)記物。同時(shí)由于COPD活體患者肺組織標(biāo)本數(shù)量有限，現(xiàn)階段我們對(duì)于PTX3的研究?jī)H局限于誘導(dǎo)痰中，對(duì)于肺泡和氣道PTX3在mRNA和蛋白質(zhì)兩個(gè)層面的表達(dá)還需進(jìn)一步論證，以便于全面探究PTX3在COPD發(fā)生，發(fā)展過(guò)程中的作用機(jī)制。

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