染色體12p13 rs12425791多態(tài)性與老年人血脂代謝的相關(guān)性

馬春林 謝娟娟 宋旭津 陳 清 蘇 莉 古 聯(lián)

(廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，廣西 南寧 530023)

缺血性腦卒中是一種多基因復(fù)雜疾病，而血脂異常是缺血性腦卒中最常見的危險(xiǎn)因素之一，全基因組關(guān)聯(lián)研究(GWAS)發(fā)現(xiàn)染色體12p13上NINJ2基因附近的遺傳多態(tài)性rs12425791與缺血性腦卒中的關(guān)聯(lián)達(dá)到GWAS顯著性水準(zhǔn)〔1〕。rs12425791被認(rèn)為是很有希望的缺血性腦卒中的易感遺傳變異。本研究旨在分析GWAS支持的遺傳變異rs12425791與老年人血脂代謝的相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1對(duì)象 2009年7月至2011年6月期間，在廣西中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院體檢中心進(jìn)行健康體檢的60歲以上老年人，共143例。其中，男102例、女41例，平均年齡(70.32±8.56)歲。排除有腦卒中、腦動(dòng)脈瘤、阿爾茨海默病、癡呆、帕金森病等神經(jīng)精神疾病病史者。研究對(duì)象均知情同意，無親緣關(guān)系。經(jīng)HWE檢驗(yàn)rs12425791基因型在143例老年體檢者的頻數(shù)分布符合HarDY-Weinberg平衡定律(P>0.05)，說明所應(yīng)用的抽樣群體適合于遺傳分析。

1.2標(biāo)本采集及血脂檢測(cè) 于體檢當(dāng)日上午空腹抽取外周血液標(biāo)本5 ml，分為抗凝血和非抗凝血?？鼓糜?4℃保存，并于3 d內(nèi)提取血液基因組DNA。將非抗凝管血進(jìn)行血脂水平檢測(cè)，采用日立 7600全自動(dòng)生化分析儀來檢測(cè)血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL)水平。血脂異常：根據(jù)中國(guó)成人血脂異常診斷標(biāo)準(zhǔn)〔2〕，TC≥6.22 mmol/L為TC升高，TG≥2.26 mmol/L為TG升高，LDL≥4.14 mmol/ L為L(zhǎng)DL升高，HDL<1.04 mmol/L為HDL降低。

1.3DNA提取及基因分型 采用天根科技(北京)有限公司生產(chǎn)的血液基因組DNA提取試劑盒〔TIANamp Blood DNA Kit(離心柱形)〕提取血液基因組DNA，試劑盒目錄號(hào)為DP318DNA，按照產(chǎn)品說明書所述步驟提取血液基因組DNA。將提取后的DNA分裝為3管，置于-20℃保存?zhèn)溆?。使用美?guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)(ABI) 公司生產(chǎn)的ABI7500 Fast 實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀TaqMan SNP基因分型試劑盒〔試劑盒包括2×通用PCR預(yù)混試劑Universal PCR Master mix (無AmpErase UNG酶)，40×SNP 基因分型試劑Genotyping Assay Mix〕，運(yùn)用TaqMan MGB探針等位基因分型技術(shù)進(jìn)行rs12425791遺傳多態(tài)性的基因分型。PCR反應(yīng)體系的總體積為10 μl，包含：基因組DNA，1.00 μl ；無核酸H2O，3.75 μl；Assay-on-Demand SNP Genotyping Assay Mix(40×)，0.25 μl；2×TaqMan Universal PCR Mix，5.00 μl。PCR反應(yīng)條件為：預(yù)變性95℃ 10 min，變性92℃ 15 s、退火60℃ 1 min，變性以及退火程序循環(huán)43次。對(duì)實(shí)驗(yàn)操作者進(jìn)行設(shè)盲，使其在進(jìn)行基因分型實(shí)驗(yàn)操作時(shí)不知道標(biāo)本的病例/對(duì)照狀態(tài)；每次96孔PCR反應(yīng)板均設(shè)置2個(gè)空白對(duì)照、并設(shè)置3個(gè)隨機(jī)重復(fù)樣本作為陽(yáng)性對(duì)照；隨機(jī)抽取總檢測(cè)樣本的5％做盲法重復(fù)測(cè)定，測(cè)定結(jié)果一致率達(dá)100％。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 運(yùn)用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間比較行χ2和t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1不同rs12425791基因型老年人的血脂水平比較 G/G基因型攜帶者與(G/A+A/A)組在TC、TG、LDL、HDL水平上的分布差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.050)；G等位基因攜帶者與A等位基因攜帶者在TC、TG、LDL、HDL水平上的差異也均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.050)。見表1。

2.2不同rs12425791等位基因老年人血脂異常比較 G/G基因型攜帶者與(G/A+A/A)組在TC升高、TG升高、LDL升高、HDL降低異常率上的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.050)；G等位基因攜帶者與A等位基因攜帶者在TC升高、TG升高、LDL升高、HDL降低異常率上的差異也均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.050)。見表2。

表1 不同rs12425791基因型、等位基因老年人血脂水平比較

表2 不同rs12425791基因型、等位基因老年人血脂異常率比較〔n(％)〕

3 討 論

多年來，國(guó)內(nèi)外學(xué)者進(jìn)行了有關(guān)易感基因遺傳多態(tài)性與血脂異常的相關(guān)性，以探討遺傳因素對(duì)血脂異常的影響。近期Kornfeld等〔3〕報(bào)道在非糖尿病人群中STAT5B基因的遺傳變異rs8082391和rs8064638與血清TC和LDL水平顯著關(guān)聯(lián)，Kiyomi等〔4〕報(bào)道APOA4基因360Hs等位基因與TG升高和HDL降低發(fā)生率顯著關(guān)聯(lián)；而國(guó)內(nèi)張明明等〔5〕報(bào)道固醇酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(CETP)基因D442G突變與高膽固醇血癥顯著相關(guān)，而何美霞等〔6〕報(bào)道IL-6 -634 CG及GG 基因型和G 等位基因攜帶者具有高脂血癥易感性。

近兩年來，各國(guó)學(xué)者進(jìn)行了多個(gè)有關(guān)于rs12425791遺傳多態(tài)性與缺血性腦卒中的關(guān)聯(lián)研究，但研究結(jié)果不一致〔7～9〕。NINJ2基因編碼ninjurin2蛋白，ninjurin2是一種嗜同種的與基質(zhì)金屬蛋白酶相互作用的細(xì)胞-細(xì)胞黏附分子〔10〕，在人類骨髓、外周白細(xì)胞、肺和淋巴結(jié)中高表達(dá)，但目前NINJ2基因?qū)θ毖阅X卒中的功能作用在很大程度上仍是不清楚的，NINJ2基因遺傳變異作用于缺血性腦卒中的功能機(jī)制值得探索。本文探索NINJ2基因附近的遺傳變異rs12425791與缺血性腦卒中危險(xiǎn)因素的相關(guān)性，而rs12425791與血脂代謝的數(shù)量性狀和質(zhì)量性狀的相關(guān)性研究目前尚未見文獻(xiàn)報(bào)道，本研究表明染色體12p13上的遺傳變異rs12425791與血脂代謝的數(shù)量性狀和質(zhì)量性狀均無顯著關(guān)聯(lián)。本研究提示，rs12425791遺傳多態(tài)性可能與血脂代謝無關(guān)聯(lián)，NINJ2基因可能不是通過影響血脂代謝來作用于缺血性腦卒中的病因機(jī)制的，但還有待于更大樣本量的同類研究來驗(yàn)證。

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