丙戊酸鈉片對老年癲癇患者腺苷酶水平的影響

林曉靜 楊建波 鄒 全 徐金鳳 張 倩 張震中

(新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，新疆 烏魯木齊 830000)

目前癲癇的發(fā)病機制尚未完全理清，但是已經(jīng)認識到腺苷系統(tǒng)在其中的積極作用，其在抗癲癇和保護腦組織方面的作用有目共睹。腺苷的產(chǎn)生主要是腺苷酸酶水解腺苷酸而成，熟知的如三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)等是該系統(tǒng)的成員，都有抗驚厥及神經(jīng)保護作用〔1〕。癲癇發(fā)作后腦內(nèi)各類腺苷含量劇增，起到自我抑制癲癇反復(fù)發(fā)作的功能，在此過程中腺苷酸酶的作用功不可沒。目前對癲癇發(fā)作后腺苷酶活性的研究甚少，而藥物對該酶的影響更為罕見，本研究嘗試在該領(lǐng)域進行研究，也取得了一定的成果。

1 臨床資料

1.1一般資料 全部病例來源于2010年5月至2013年7月我院神經(jīng)內(nèi)科住院的癲癇患者，完成全部實驗計劃的病例共69例，全部病例都有癲癇相關(guān)癥狀，并經(jīng)腦電圖(EEG)或動態(tài)腦電圖(AEEG)檢查確診，并簽訂知情同意書參與研究計劃。按有無使用丙戊酸鈉將全部病例分為兩組，使用丙戊酸鈉者36例，設(shè)為觀察組，男21例，女15例，年齡60～81〔平均(68.24±10.62)〕歲，丙戊酸鈉單一藥物使用者17例，聯(lián)合用藥者19例。未使用丙戊酸鈉者33例設(shè)為對照組，男19例，女14例，年齡60～79〔平均(66.84±8.36)〕歲，抗癲癇藥物單一藥物使用者16例，聯(lián)合用藥者17例。兩組病例在性別、年齡方面比較無顯著性差異(P>0.05) 。

1.2方法

1.2.1治療方法 觀察組患者入院后即給予常規(guī)丙戊酸鈉片(商品名：德巴金，生產(chǎn)廠家：Sanofi Winthrop Industrie；藥準字：J20030059)治療，600～1 200 mg/d，分2～3次服用。其他抗癲癇藥物按常規(guī)用藥。

1.2.2標本采集 兩組患者均在清晨靜息狀態(tài)留取肘靜脈血4 ml待查，兩組須與上次發(fā)作時間間隔12 h以上，并都放置留置針備用，及時留取標本。當癲癇再次發(fā)作后及時準點留取5、10、20、30、60 min及12 h時間點血液標本。留取標本在室溫下靜置30～60 min后離心15 min(離心溫度4℃，轉(zhuǎn)速3 000 r/min)，離心結(jié)束后留取上層血清置于Eppendorf管，置于-70℃冷藏待測。

1.2.3ATP、ADP、AMP水解率的測定 參照文獻方法，選取Tris-HCl溶液進行實驗，檢測ATP和ADP時pH 8.0，檢測AMP時pH7.2。汲取Tris-HCl溶液175 μl，后精確加入5 μl待測血清，37℃預(yù)孵育10 min。到時間后加入10 μl ATP或ADP或AMP，調(diào)制到1.0 mmol/L的反應(yīng)濃度后37℃下再次孵育10 min。到點后加入10%三氯醋酸200 μl以終止反應(yīng)。630 nm處測定吸光度。依加入腺苷酸種類的不同而得到不同的腺苷酸水解率，每個血清樣本均重復(fù)測定3次取均值，以單位毫升血清每分鐘釋放的無機磷酸鹽量(nmol)量化腺苷酸酶活性。

1.2.4磷酸二酯酶(PDE)活性測定 同樣參照文獻〔2〕方法。40 mmol/L Tris-HCL溶液中磷酸-硝基酚-5′-一磷酸胸苷(p-Nph-5′-TPM)濃度0.5 mmol/L，酸堿度pH8.9。精確汲取230 μl 37℃下預(yù)孵育10 min。到時間后加入20 μl血清反應(yīng)開始，37℃孵育10 min。到點后加入0.2 mol/L NaOH 750 μl以終止反應(yīng)。400 nm吸光度處測定磷酸-硝基酚的量。以單位毫升血清每分鐘釋放的磷酸-硝基酚量(nmol)量化酶活性。

2 結(jié) 果

兩組患者癲癇發(fā)作間期ATP、ADP、AMP水解率和PDE活性的比較無顯著性差異(均P>0.05)；癲癇發(fā)作5 min后兩組ATP、ADP、AMP水解率均快速升高，PDE活性也同時上升，20 min時各指標達到高峰，30 min時有所回落，60 min時仍保持較高水準，但觀察組各指標升高更顯著，高水平時間維持更長，癲癇發(fā)作后5～60 min各指標各時間段與對照組比較均有顯著性差異(均P<0.05)；12 h后各指標恢復(fù)原有水準，無顯著性差異(均P>0.05)。見表1。

表1 兩組患者癲癇各時間段ATP、ADP、AMP水解率和PDE活性的比較±s)

3 討 論

癲癇發(fā)病機制目前尚不明了，而老年癲癇多為繼發(fā)出現(xiàn)，其成因更為復(fù)雜，臨床上經(jīng)常找不到具體病因〔3〕。丙戊酸鈉作為抗癲癇藥物的主要種類之一因其副作用小，對幾乎所有的癲癇都有治療作用而倍受重視。在其作用機制尚不清晰、腺苷抗癲癇作用引起重視的背景下，本文嘗試從丙戊酸鈉對腺苷酶影響方面做出探索。

癲癇公認是大腦神經(jīng)元突發(fā)性異常放電使大腦功能短暫的障礙而表現(xiàn)出的一種臨床綜合征。在大腦的異常發(fā)電起始階段，興奮性神經(jīng)遞質(zhì)ATP的作用不能不討論，目前重視較高的鈣平衡學(xué)說中ATP可謂舉足輕重，該理論〔4〕認為Schwan細胞接觸神經(jīng)細胞接頭處的ATP后啟動動作電位，鈣離子就隨之內(nèi)流了，可見突觸間ATP促進了癲癇的發(fā)生。癲癇發(fā)生之后劇烈的同步放電會消耗大量能量，糖酵解隨之啟動以彌補腦的供能不足，ATP作為糖酵解的產(chǎn)物隨之大量產(chǎn)生，這有些令人困惑，似乎誘發(fā)能量增加了，但所幸ATP增加并非全部集聚于神經(jīng)肌肉接頭處，而大量ATP水解之后形成的腺苷被認為是癲癇結(jié)束的內(nèi)在保護性物質(zhì)〔5〕。ATP、ADP、AMP三者同屬腺苷酸，相互之間可相互轉(zhuǎn)化，并且可經(jīng)不同腺苷酸酶轉(zhuǎn)化為腺苷，不少研究〔6，7〕證實癲癇發(fā)生之后ATP、ADP、AMP的水解迅速升高，產(chǎn)生大量的腺苷可恢復(fù)神經(jīng)的平衡狀態(tài)抑制癲癇的再發(fā)生，可見腺苷酸酶活性增高有助于治療癲癇?？梢酝评?，如若此類酶活性增高，則不單可促進興奮性遞質(zhì)ATP的水解而維護興奮性遞質(zhì)不超量，也可以增加抑制性遞質(zhì)腺苷的存在而進一步維護神經(jīng)系統(tǒng)這兩種共軛遞質(zhì)平衡。

丙戊酸鈉的藥理學(xué)機制也不甚明了，比較統(tǒng)一的看法是激活谷氨酸脫羧酶和抑制γ-氨基丁酸(GABA)轉(zhuǎn)氨酶而起到抗癲癇作用〔8，9〕，并且抑制谷氨酸釋放。上述理論顯示丙戊酸鈉可顯著降低神經(jīng)突觸間谷氨酸含量，令人感興趣的是Nicolaidis等〔2〕認為腺苷發(fā)揮抗癲癇就是通過抑制興奮性氨基酸實現(xiàn)的，而谷氨酸就是這種類氨基酸的代表。谷氨酸和腺苷可競爭同一類鉀離子通道而起到抑制神經(jīng)抑制作用，并且腺苷可以抑制谷氨酸的釋放〔10〕，丙戊酸鈉、腺苷、谷氨酸之間有著復(fù)雜而密切的關(guān)系，雖然現(xiàn)在仍不能斷言這兩者之間到有何種聯(lián)系，但是結(jié)合本研究的結(jié)果有理由做出合理的假設(shè)，即丙戊酸鈉可以影響到腺苷的合成增量而起到控制癲癇發(fā)作，目前已知的其抑制谷氨酸釋放或許就是這個過程的次生結(jié)果，或者也可以推理丙戊酸鈉的抗癲癇作用機制的一部分就是通過影響腺苷水平而實現(xiàn)的。丙戊酸鈉從現(xiàn)藥理學(xué)研究來看并不壓制癲癇電興奮起始，而主要是增加抑制興奮在擴散類物質(zhì)的含量而起到抗癲癇作用〔11〕，GABA是此類，腺苷也有理由可認為是此作用中的一部分，從本研究的結(jié)果來看支持這一立論，顯示出其對腺苷形成有明顯的促進作用，并且維持較長的時間。

丙戊酸鈉作為抗癲癇的一線用藥，臨床中許多其他藥物不能控制的癲癇使用后也能獲得一定的控制，這種特點不能不引起重視。本文研究了丙戊酸鈉影響主要腺苷酸種類水解率的可能，并在已有條件下對PDE活性做出了直接測定，顯然丙戊酸鈉也影響到了類酶的活性，有助于更深層次的了解丙戊酸鈉藥理學(xué)機制，期待更深多的研究加以印證。

4 參考文獻

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