大鼠顱腦損傷后ICAM-1在神經(jīng)細(xì)胞中表達(dá)譜及其意義

劉 剛 李 暢 任 強 陳為龍 朱海超 陳志明

(吉林省公安廳，吉林 長春 130051)

當(dāng)顱腦損傷發(fā)生于老年人時，由于機體修復(fù)功能相對較差，死亡率極高。細(xì)胞間黏附分子(ICAM)-1在損傷后炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，進而參與損傷后組織修復(fù)，但其在顱腦損傷后的表達(dá)研究在國內(nèi)外卻鮮有報道。本研究探討ICAM-1表達(dá)與顱腦損傷后不同時間的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1動物分組及模型建立 雄性SD大鼠50只，體重250 g，隨機分為正常對照及腦損傷組。顱腦損傷組分別于傷后15、30 min、1、3、6、24、72、96、120 h處死，共計10組。采用改進的Feeney自由落體硬膜外撞擊方法。損傷裝置由底板、固定支架、垂直導(dǎo)桿、下落擊錘和聚乙烯撞擊圓錐組成。乙醚麻醉大鼠后，用 10%水合氯醛(0.35 g/kg體重)腹腔內(nèi)注射麻醉，將大鼠頭部固定后，剪去頂部皮毛，消毒皮膚后，沿中線左側(cè)切頭皮，分離骨膜，用牙科鉆于中線旁2 mm，緊挨冠狀 縫后開一直徑5 mm的圓形窗，硬膜保持完整。用20 g砝碼于30 cm高處通過一金屬導(dǎo)桿墜落，用鋅汀粉封閉骨窗，縫合頭皮，置鼠籠喂養(yǎng)。正常對照組不做任何處理。

1.2蘇木素-伊紅(HE)染色 腦組織標(biāo)本用10%甲醛溶液固定48 h，石蠟包埋，5 μm厚連續(xù)切片，常規(guī)HE染色。

1.3免疫組化染色 采用免疫組織化學(xué)SP法對腦組織中ICAM-1進行檢測，按試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)說明書操作，用已知陽性的切片做陽性對照，磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗為陰性對照。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS3.0軟件行方差分析和t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1HE染色 挫傷處腦組織周圍散在片狀出血，腦損傷2 h后，損傷灶周圍神經(jīng)細(xì)胞尼氏體溶解消失，并伴有周圍間隙增寬，呈腦水腫改變，傷后24 h，神經(jīng)細(xì)胞變性壞死，傷后72 h，出血基本吸收，傷后120 h可見有纖維組織增生。

2.2ICAM-1表達(dá)在顱腦損傷后隨時間變化 ICAM-1在正常未受顱腦損傷腦組織表達(dá)量較少，顱腦損傷0.15、30 min、1、3、6、24、72、96、120 h ICAM-1平均灰度值分別為56±3.5、58±4.2、57±3.9、67±7.2、145±6.8、130±7.9、110±6.2、98±4.3、68±6.3、53±9.2。在顱腦損傷3 h后表達(dá)增高，且達(dá)峰值，表現(xiàn)為平均灰度值增高，96 h后表達(dá)下降，至120 h表達(dá)接近正常。見圖1。

圖1 ICAM-1在顱腦損傷后的免疫組化表達(dá)

3 討 論

ICAM-1屬于免疫球蛋白超家族成員〔1～3〕，為β2 整合素的配體分子。ICAM-1特異性介導(dǎo)抗原提呈細(xì)胞與T淋巴細(xì)胞的黏附，在炎癥反應(yīng)早期，ICAM-1表達(dá)即增高，且可持續(xù)至48 h之后，提示ICAM-1可作為非常有意義的法醫(yī)學(xué)損傷時間推斷指標(biāo)。

損傷時間推斷是法醫(yī)病理學(xué)檢驗中的重要內(nèi)容之一，目前為止，免疫組織化學(xué)方法仍然是法醫(yī)學(xué)皮膚損傷時間推斷的重要檢測方法，但有效免疫組織化學(xué)指標(biāo)的缺乏是限制該方法應(yīng)用于法醫(yī)病理學(xué)實踐的主要問題，而對于有效免疫組織化學(xué)指標(biāo)的尋找是目前法醫(yī)病理學(xué)者急需解決的熱點問題。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在正常未受顱腦損傷腦組織中，ICAM-1表達(dá)量較少〔4～7〕，ICAM-1在顱腦損傷后隨時間變化呈規(guī)律性表達(dá)，這也意味著ICAM-1可作為有效的免疫組織化學(xué)指標(biāo)，在法醫(yī)學(xué)顱腦損傷時間判定中發(fā)揮重要作用。ICAM-1很有可能參與腦損傷后免疫應(yīng)答反應(yīng)，從而在顱腦損傷修復(fù)過程中發(fā)揮重要作用，但其具體分子機制仍值得進一步的深入研究。

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