冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病患者血清MMP-2、-9及IL-6水平及意義

肖憲杰 紀(jì)煥春

(大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院心內(nèi)二科，遼寧 大連 116000)

冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的主要成分是細(xì)胞外基質(zhì)，細(xì)胞外基質(zhì)的含量、厚度可維系斑塊的穩(wěn)定性，也為心血管組織細(xì)胞提供一種連接，可能在損傷后的心臟重塑過程中提供結(jié)構(gòu)上的完整性〔1，2〕。細(xì)胞外基質(zhì)合成減少和降解增加是斑塊破裂主要的內(nèi)在原因，而基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的降解是動(dòng)脈粥樣硬化斑塊易損的重要因素，MMP能夠降解細(xì)胞外所有的基質(zhì)成分〔3〕。研究證明，斑塊中的巨噬細(xì)胞可分泌多種MMP，其中MMP-2和MMP-9在冠狀動(dòng)脈粥樣硬化斑塊破裂中起著重要的作用〔4〕。本研究主要觀察冠心病患者血清MMP-2和MMP-9水平，為冠心病的程度和嚴(yán)重性評(píng)估提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1臨床資料 納入2011年1月至2013年10月來本院住院的冠心病患者97例，患者按照不同的類型分為三組：不穩(wěn)定型心絞痛患者39例(UAP組)、急性非ST段抬高心肌梗死患者30例(NSTEMI組)和急性ST段抬高心肌梗死患者28例(STEMI組)。納入患者符合美國心臟病學(xué)會(huì)(ACC)、美國心臟病協(xié)會(huì)(AHA)制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)〔5〕。均排除嚴(yán)重的瓣膜病、嚴(yán)重的腎功不全、嚴(yán)重的肝功不全、嚴(yán)重的甲狀腺疾病和惡性腫瘤疾病。另外納入30例健康體檢者(對(duì)照組)，患者身體健康，無心血管疾病、無內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病及肝腎疾病。NSTEMI組患者的平均年齡顯著高于對(duì)照組；NSTEMI組和對(duì)照組性別比例差別不大，STEMI組和UAP組男性患者明顯高于女性(P<0.05)；此外，冠心病組伴糖尿病患者明顯多于對(duì)照組(P<0.05)；其他基線資料方面組間比較無顯著性差異。見表1。

1.2方法

表1 不同類型冠心病患者及對(duì)照組基本資料分析

1.2.1標(biāo)本 所有待測(cè)者在入院后第2天清晨空腹抽取靜脈血5 ml，室溫下靜置30 min后3 000 r/min，離心10 min，分離血清，儲(chǔ)存于-70℃冰箱中待測(cè)。

1.2.2MMP-2、MMP-9和白細(xì)胞介素-6(IL-6)的測(cè)定 采用酶聯(lián)免疫疫吸附法(ELISA)測(cè)定血清MMP-2、MMP-9和IL-6的濃度〔6〕，試劑盒購于上海酶聯(lián)生物工程研究所，所有操作按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.3Western印跡檢測(cè)各組MMP-2和MMP-9蛋白的表達(dá) 常規(guī)勻漿、離心制備組織蛋白提取液(40 μg)，提取上樣8%聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)進(jìn)行還原性十二烷基硫酸鈉(SDS)-PAGE電泳，脫脂，然后把膠中的蛋白轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上，封閉液1%磷酸鹽緩沖液(PBS)封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)，過夜，分別滴加MMP-2和MMP-9單克隆抗體稀釋，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色。

2 結(jié) 果

2.1各組MMP-2、MMP-9和IL-6水平的檢測(cè)結(jié)果 三組冠心病患者與對(duì)照組比較，MMP-2、MMP-9和IL-6水平均明顯增高，其中STEMI組MMP-2和MMP-9比其他兩組增高明顯(P<0.05)，冠心病患者IL-6與MMP-2和MMP-9的相關(guān)系數(shù)分別為(r=0.547，P<0.01)和(r=0.478，P<0.01)，但三組患者間沒有明顯的差別。見表2。

表2 各組患者血清MMP-2、MMP-9和IL-6水平比較±s)

2.2Western印跡比較各組MMP-2和MMP-9蛋白的水平 三組冠心病患者的MMP-2和MMP-9蛋白均明顯高于對(duì)照組，且STEMI組患者升高最明顯，與ELISA結(jié)果相符。見圖1。

圖1 各組MMP-2和MMP-9蛋白水平

3 討 論

大部分冠心病患者均有嚴(yán)重的冠狀動(dòng)脈硬化性狹窄，這是由于冠狀動(dòng)脈內(nèi)含有斑塊造成。老年冠狀動(dòng)脈病變程度嚴(yán)重，多支血管病變，復(fù)雜病變、彌漫病變、鈣化病變多〔7〕。大規(guī)模、回顧性的聯(lián)合心血管計(jì)劃研究結(jié)果表明，50%以上確診冠心病的患者入院時(shí)均合并血糖升高〔8〕。這類患者預(yù)后和存活率更差。因而對(duì)冠心病的治療，血糖異常的處理同樣非常重要。

現(xiàn)已經(jīng)明確冠狀動(dòng)脈斑塊破裂、觸發(fā)血栓形成是導(dǎo)致冠心病的一個(gè)主要原因〔9〕。血栓可以是附壁的，可以導(dǎo)致不同程度的管腔狹窄，引起不穩(wěn)定性心絞痛，并進(jìn)一步導(dǎo)致梗死、猝死。所以，粥樣斑塊是預(yù)防治療冠心病的關(guān)鍵。而細(xì)胞外基質(zhì)是預(yù)防斑塊的關(guān)鍵，合成減少或降解增多使斑塊的完整性受損，進(jìn)而導(dǎo)致斑塊破裂〔10〕，MMPs是一組能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)的酶類，尤其是MMP-2和MMP-9在這個(gè)過程中起著關(guān)鍵的作用，可以通過加強(qiáng)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊纖維骨架中膠原降解，影響斑塊穩(wěn)定性。萬招飛等〔3〕認(rèn)為冠心病患者動(dòng)脈彈性與血清炎癥因子高敏C反應(yīng)蛋白及MMP-9均呈明顯負(fù)相關(guān)。鞠云楓等〔11〕結(jié)果表明冠心病患者血清MMP-2水平明顯升高，并且MMP-2水平與冠狀動(dòng)脈內(nèi)徑狹窄程度呈正相關(guān)，可能參與了冠心病的發(fā)生發(fā)展過程。本研究與以往國內(nèi)外的研究相符。

在AS引起冠心病的不同類型中，MMPs對(duì)斑塊破裂、炎癥都發(fā)揮重要作用〔12〕。表明IL-6與MMP-2和MMP-9可以作為冠心病風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)的指標(biāo)?？赡苓€有其他MMPs及炎癥因子參與其中，有待進(jìn)一步研究。

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