黃芪多糖對小鼠益智和低氧/復氧損傷的保護作用

王振富 鐘 靈 肖本見 楊付明

(湖北民族學院醫(yī)學院，湖北 恩施 445000)

黃芪主要含有多糖、皂苷、黃酮、氨基酸及微量元素等有效成分〔1〕。臨床常用于防治免疫功能紊亂性疾病、心腦血管疾病、促智、延緩衰老和抗腫瘤等多種疾病,療效確切且副作用較少〔2〕。黃芪提取物(EA) 是從黃芪中提取的有效部位群,主要包括黃芪總苷(AST ) 和黃芪多糖(APS)。本實驗通過建立苯異丙腺苷(PIA)致小鼠學習記憶障礙模型；復制低氧/復氧損傷模型，采用堿醇提取法提取黃芪多糖，進一步研究黃芪多糖對小鼠益智和低氧/復氧損傷的保護作用及其機制。

1 材料與方法

1.1主要試劑和儀器 苯異丙腺苷(PIA)購自美國Sigma公司；活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)試劑盒(南京建成生物工程研究所)；WFZ- UV2000紫外可見分光光度計(尤尼科上海儀器有限公司)，TJ270-30A 紅外分光光度計(天津光學儀器廠) ，TGL-16G 高速臺式離心機(上海安亭儀器廠) ，DL-50型超級恒溫器，F(xiàn)-160型藥物粉碎機(北京市永光明醫(yī)療儀器廠)，RE52-3旋轉蒸發(fā)器(上海滬西分析儀器廠)。

1.2APS提取物的制備 參照田洛等〔3〕采用堿醇提取黃芪多糖。準確稱取黃芪飲片，用5%乙醇與黃芪藥材按10∶1的量，在pH12(碳酸鈉調節(jié))、溫度90℃的條件下提取2次，每次1.5 h，過濾，合并濾液，濃縮沉糖。冷凍干燥保存。實驗前以純水為溶劑配制不同濃度樣品,4℃ 低溫保存,備用。

1.3益智實驗動物分組、造模及處理〔4〕昆明種小鼠，體重25～30 g，由湖北民族學院實驗動物中心提供。將40只小鼠隨機分為4組，每組10只(雌雄各5只)：PIA組，APS低劑量組，APS高劑量組和生理鹽水組。APS低、高劑量組分別灌胃50、150 mg/kg，PIA組、生理鹽水組灌胃等量生理鹽水，連續(xù)給藥5 d。末次給藥1 h后，PIA組和APS低劑量組、APS高劑量組分別腹腔注射PIA1 mg/kg。15 min 后將小鼠放入跳臺儀進行訓練,適應環(huán)境3 min,隨后即在銅條上加36 V 交流電,訓練時間為5 min。24 h 后,將小鼠放置橡皮塞上,并通電,進行3 min 測試,記錄潛伏期(小鼠停留在橡皮塞上到第1次跳下的時間) 及錯誤(小鼠在橡皮塞上用前足向下觸銅條或從橡皮塞跳下銅條) 次數(shù)。

1.4低氧/復氧損傷模型及處理 昆明種小鼠30 只,隨機分為3組,每組10只(雌雄各5只)： APS低劑量組，APS高劑量組和生理鹽水組。APS低劑量組，APS高劑量組分別灌胃50、150 mg/kg,生理鹽水組灌胃等量生理鹽水,自由攝食飲水,連續(xù)給藥5 w,實驗日將小鼠放入鈉石灰瓶(150 ml 廣口瓶,10 g鈉石灰) 中,每瓶放小鼠1只,塞緊瓶塞,8 min 后取出,自由呼吸8 min后處理小鼠斷頭取血,放入帶蓋的肝素化試管中,立即蓋緊,按試劑盒說明書檢測全血ROS、CAT、SOD和MDA 各項指標。

2 結 果

2.1APS益智作用 與生理鹽水組比較，PIA組小鼠出現(xiàn)明顯學習記憶障礙(P<0.01)；與PIA組比較，APS低、高劑量可減弱PIA所致小鼠學習記憶障礙的影響(P<0.01)，見表1。

2.2APS對小鼠低氧/復氧損傷保護作用 與生理鹽水組比較，APS低、高劑量組均能升高SOD 、CAT活力，降低ROS、MDA含量(P<0.01)，見表2。

表1 APS對PIA所致小鼠學習記憶障礙的影響

表2 APS對小鼠SOD、CAT、ROS、MDA的影響

3 討 論

所謂自由基(又稱游離基),就是具有未配對的原子、原子團、分子或離子叫自由基。自由基的化學性質活潑,有極強的氧化反應能力,可使各種生物膜的不飽和脂肪酸發(fā)生過氧化,形成過氧化脂質〔5〕,這些產(chǎn)物具有一定毒性,能使蛋白質分子內和分子間發(fā)生交聯(lián),發(fā)生去氫、加成、裂解等反應,從而引起DNA的雙螺旋交聯(lián)出現(xiàn)錯誤或無法分裂,一些酶的活性改變,影響細胞的代謝。過量的氧自由基可引起神經(jīng)元細胞的損傷,使腦內總RNA和蛋白質含量下降,腦內神經(jīng)元密度降低,造成動物學習記憶能力下降及機體的衰老〔6〕。許多中草藥是強有力的抗氧化劑,適當補充外源性抗氧化物質,可提高機體抗氧化系統(tǒng)的活力,降低過氧化質子含量,從而起到抗衰老作用〔7〕。研究表明，中藥黨參對PIA致小鼠學習記憶障礙有明顯的益智作用〔8〕。本實驗結果顯示：APS具有提高小鼠學習記憶能力，類似黨參的作用。其可能機制為對抗PIA的作用或直接清除自由基。復制小鼠低氧/復氧損傷模型試驗結果顯示：低氧/ 復氧損傷會產(chǎn)生大量活性氧，胞膜脂質過氧化而導致細胞損傷，產(chǎn)生代謝產(chǎn)物MDA。同時抗氧化酶的活性也有不同程度降低。APS能顯著提高SOD、CAT活性和降低ROS、MDA含量，提示APS可通過提高機體抗氧化能力和直接清除自由基等方面發(fā)揮其對低氧/復氧損傷的保護作用。

4 參考文獻

1曲敬波，齊建祥，崔傳芳，等.甘草對老年大鼠SOD、CAT、GSH-Px、LPO影響的實驗研究〔J〕.中國醫(yī)學寫作雜志，2005；12(1) :10.

2陳聰穎，陸 陽，陳澤乃.內蒙黃芪的研究概況〔J〕.中草藥，2001；32(6):567-9.

3田 洛，宣依昉，范榮軍，等.醇堿提取法提取黃芪多糖〔J〕.吉林大學學報(理學版)，2006；44(4):652-7.

4魏 偉，吳希美，李元建.藥理實驗方法學〔M〕.第4版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2010:663.

5李義奎，王欽茂.中藥藥理實驗方法學〔M〕.上海: 上海科學技術出版社，1989:202.

6畢 敏，尹 政.核桃仁提取物抗腦衰老作用的實驗研究〔J〕.現(xiàn)代中藥研究與實踐，2006；20(3):35.

7楊 輝，程清洲，許 彬，等.竹節(jié)參多糖抗腦衰老作用的實驗研究 〔J〕.時珍國醫(yī)國藥，2009；20(9)：2311-2.

8肖本見，陳國棟，蘭宗平.富硒板黨地上部分對小鼠益智和低氧/復氧損傷的保護作用的研究〔J〕.中藥材，2005；28(8)：688-90.