Kaiso蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及預(yù)后評(píng)估價(jià)值

王 寶 李 澤 邵國(guó)光

(吉林大學(xué)第一醫(yī)院胸外科， 吉林 長(zhǎng)春 130021)

轉(zhuǎn)錄因子Kaiso是BTB/POZ(Broad complex, Tramtrak, Bric a brac /Pox virus zinc finger)-zinc finger蛋白家族中的重要成員〔1,2〕，依據(jù)其結(jié)構(gòu)及功能上的特點(diǎn)，Kaiso蛋白存在著核漿穿梭現(xiàn)象，參與細(xì)胞內(nèi)許多重要生物學(xué)活性的調(diào)節(jié)〔3〕。Kaiso能夠抑制多種與人類(lèi)腫瘤發(fā)生相關(guān)的Wnt信號(hào)通路中靶基因(如CylinD1，matrilysin)的轉(zhuǎn)錄〔4，5〕，在腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展及侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用。Kaiso蛋白在人類(lèi)多種實(shí)體性惡性腫瘤中都有表達(dá)，但目前關(guān)于Kaiso蛋白在人類(lèi)非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)中表達(dá)及與預(yù)后的報(bào)道較少。本文旨在研究Kaiso蛋白在NSCLC中的表達(dá)情況并探討其與臨床病理學(xué)因素的關(guān)系。

1 材料方法

1.1組織標(biāo)本 78例石蠟包埋組織標(biāo)本取自吉林大學(xué)第一醫(yī)院胸外科，手術(shù)時(shí)間為2008年1月至2009年6月，其中男43例，女35例；年齡60～84歲，中位年齡68歲。所有患者術(shù)前均未行放、化療。術(shù)后根據(jù)國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)制定的第7版腫瘤TNM分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行術(shù)后分期，并明確病理診斷。組織標(biāo)本采集獲得吉林大學(xué)腫瘤研究委員會(huì)批準(zhǔn)。78例患者由腫瘤研究委員會(huì)追蹤隨訪至2013年5月，生存時(shí)間的計(jì)算是從手術(shù)日期到由于復(fù)發(fā)/轉(zhuǎn)移而死亡的日期或者末次隨訪日期為止?；颊吲R床病理資料及術(shù)后總體生存數(shù)據(jù)均由吉林大學(xué)腫瘤研究委員會(huì)提供。

1.2試劑 Kaiso蛋白鼠抗人單克隆抗體購(gòu)于美國(guó)BD公司；辣根酶標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG購(gòu)于北京中杉生物技術(shù)公司；S-P免疫組化試劑盒購(gòu)于福州邁新公司。

1.3免疫組化法及判定標(biāo)準(zhǔn) 將組織標(biāo)本制作成4 μm厚的切片，常規(guī)免疫組化S-P法染色，高溫高壓修復(fù)抗原，一抗為Kaiso，工作濃度1∶40，同時(shí)用0.01 mol/L、pH7.4的磷酸鹽緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照。結(jié)果判定：選腫瘤細(xì)胞陽(yáng)性染色集中區(qū)域，每張切片計(jì)數(shù)高倍視野(×400)下400個(gè)腫瘤細(xì)胞，按Kaiso表達(dá)百分率分為四個(gè)等級(jí)：≤ 25%為0分，26%～50 %為1分，51%～75%為2分，≥75%為3分。根據(jù)免疫組化染色強(qiáng)度分為3個(gè)等級(jí)：淺黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，黃褐色計(jì)3分。以陽(yáng)性細(xì)胞率和染色強(qiáng)度的分值乘積作為每例標(biāo)本的積分。0分與1分計(jì)為陰性表達(dá)，積分≥2分為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS17.0軟件行χ2檢驗(yàn)，單因素分析采用Kaplan-Meier法，多因素分析應(yīng)用Cox模型。

2 結(jié) 果

2.1Kaiso蛋白在NSCLC組織中的表達(dá) 圖1可見(jiàn)，Kaiso蛋白表達(dá)的陽(yáng)性染色為粗細(xì)不均勻的淺黃至棕褐色顆粒，在細(xì)胞質(zhì)中分布。癌旁支氣管上皮細(xì)胞呈較弱表達(dá)，判定為陰性；肺癌組織中Kaiso表達(dá)強(qiáng)度明顯增強(qiáng)。78例NSCLC石蠟包埋組織中Kaiso蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率為66.7%(52/78)。

癌旁支氣管上皮細(xì)胞(×400)

肺鱗癌(×400)

肺腺癌(×40)

2.2Kaiso蛋白的表達(dá)與NSCLC臨床病理學(xué)因素的關(guān)系 見(jiàn)表1。Kaiso蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率與肺癌的TNM分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(均P<0.05)，與其他病理學(xué)因素如性別、年齡、組織學(xué)分型、腫瘤分化程度無(wú)關(guān)。

2.3Kaiso蛋白與預(yù)后生存期的關(guān)系 78例肺癌患者中，Kaiso蛋白陽(yáng)性表達(dá)組的中位生存期31個(gè)月，Kaiso蛋白陰性表達(dá)組中位生存期44個(gè)月。單變量分析結(jié)果顯示Kaiso蛋白陽(yáng)性表達(dá)與肺癌患者的預(yù)后不良密切相關(guān)(χ2=7.554，P=0.006，Log-rank法)；然而Cox多元分析結(jié)果顯示肺癌TNM分期、Kaiso蛋白的陽(yáng)性表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是肺癌預(yù)后獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P=0.001、0.007、0.026)。見(jiàn)圖2，表2。

表1 Kaiso蛋白表達(dá)與NSCLC臨床病理學(xué)關(guān)系〔n(%)〕

表2 78例NSCLC患者多因素Cox模型分析

3 討 論

目前已經(jīng)證實(shí)Kaiso是擁有雙重DNA綁定識(shí)別的轉(zhuǎn)錄抑制子，能夠識(shí)別與綁定特異的序列TCCTGCnA(n為任何一種氨基酸)或者甲基化的CpG雙核苷酸序列〔3.6〕，可與眾多的腫瘤相關(guān)基因siamois，cyclinD1、matrilysin(MMP-7)、MTA2的啟動(dòng)子結(jié)合；另外，Kaiso能抑制β-catenin介導(dǎo)的轉(zhuǎn)移啟動(dòng)基因matrilysin活化，表明Kaiso是與許多人類(lèi)腫瘤有關(guān)的Wnt/beta-catenin通路的負(fù)向調(diào)節(jié)子，參與惡性腫瘤的發(fā)生及進(jìn)展。研究發(fā)現(xiàn)，Kaiso缺陷小鼠與腸道腫瘤敏感的ApcMin/+小鼠雜交后，腸道腫瘤發(fā)生延遲，而且息肉減少，表明Kaiso促進(jìn)腸道腫瘤發(fā)生，而且可能作用于腫瘤發(fā)生階段〔7〕。

本研究結(jié)果提示Kaiso可能在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)發(fā)揮對(duì)其下游分子的調(diào)控作用。Dai等〔8〕發(fā)現(xiàn)Kaiso蛋白在NSCLC中大部分表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，僅極少量表達(dá)于細(xì)胞核上。本文并未發(fā)現(xiàn)Kaiso蛋白定位于細(xì)胞核上，這可能由于本研究的樣本量較少，未能客觀準(zhǔn)確地反映出Kaiso蛋白的全部定位，或者由于Kasio蛋白可能與抗體結(jié)合后發(fā)生空間構(gòu)象的改變。本研究結(jié)果顯示Kaiso蛋白在NSCLC中發(fā)揮促癌作用。然而也有報(bào)道稱(chēng)Kaiso是一個(gè)甲基化依賴的條件性癌基因，敲除Kaiso后的結(jié)腸癌細(xì)胞系會(huì)增加化療藥物的敏感性，趨于出現(xiàn)細(xì)胞周期停滯及細(xì)胞死亡〔4〕。

綜上所述，NSCLC患者Kaiso蛋白異常高表達(dá)可能引起腫瘤的進(jìn)展及侵襲轉(zhuǎn)移；通過(guò)阻斷Kaiso信號(hào)通路，有可能抑制腫瘤的發(fā)展。Kaiso蛋白可能是影響NSCLC患者預(yù)后的一個(gè)重要因素，繼續(xù)對(duì)Kaiso蛋白深入研究可能對(duì)肺癌早期診斷、突破新的治療靶點(diǎn)、判斷肺癌患者預(yù)后具有重要意義。

4 參考文獻(xiàn)

1Keirsebilck A, Bonne S, Staes K,etal. Molecular cloning of the human p120ctn catenin gene(CTNND1): expression of multiple alternatively spliced isoforms〔J〕. Genomics, 1998; 50(2):129-46.

2Anatasiadis PZ, Reynolds AB. The p120 catenin family: complex roles in adhesion, signaling and cancer〔J〕. J Cell Sci, 2000;113(8):1319-34.

3Soubry A, van Hengel J, Parthoens E,etal. Expression and nuclear location of the transcriptional repressor Kaiso is regulated by the tumor microenvironment〔J〕. Cancer Res, 2005;65(6): 2224-33.

4Lopes EC, Valls E, Figueroa ME,etal. Kaiso contributes to DNA methylation-dependent silencing of tummor suppressor genes in colon cancer cell lines〔J〕. Cancer Res, 2008; 68(18): 7285-63.

5Prokhortchouk A, Sansom O, Selfridge J,etal. Kaiso-deficient mice show resistance to intestinal cancer〔J〕. Mol Cell Biol,2006;26(1): 199-208.

6Park JI, Ji H, Jun S,etal. Frodo links dishevelled to the p120-cantenin/Kaiso pathway: distinct catenin subfamilies promote Wnt signals〔J〕. Dev Cell, 2006;11:683-95.

7Woll PS, Morris JK, Painschab MS,etal. Wnt signaling promotes hematoendothelial cell development from human embryonic stem cells〔J〕. Blood, 2007;111(1):122-31.

8Dai SD, Wang Y, Miao Y. Cytoplasmic Kaiso is associated with poor prognosis in non-small cell lung cancer〔J〕. BMC Cancer, 2009;9:178.