組織蛋白酶D、Tmem 16a和乳腺腫瘤激酶在結(jié)腸癌中的表達(dá)及意義

陳 曦 孫海斌

(鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院消化內(nèi)科， 河南 鄭州 450052)

組織蛋白酶(Cath)-D作為一種特異性的水解酶，與腫瘤的侵襲相關(guān)，也與腫瘤的脈管轉(zhuǎn)移密切相關(guān)〔1〕?？缒さ鞍?6a(TMEM 16a)作為新發(fā)現(xiàn)的氯離子通道蛋白在惡性腫瘤中可以異常表達(dá)〔2〕。乳腺腫瘤激酶(BRK)是在轉(zhuǎn)移性乳腺癌中發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞內(nèi)酪氨酸激酶，包含SH2、SH3和酪氨酸激酶催化結(jié)構(gòu)域，近年來研究顯示BRK在多種惡性腫瘤中高表達(dá)〔3〕。本實驗應(yīng)用免疫組化方法檢測結(jié)腸癌中Cath-D、Tmem 16a和BRK的表達(dá)，探討三者的關(guān)系及其在結(jié)腸癌進(jìn)展中的意義。

1 材料和方法

1.1一般資料 收集2011年6月至2013年4月行結(jié)腸癌根治手術(shù)的患者97例作為觀察組，男50例，女47例，年齡58～76，(平均64.6)歲。納入標(biāo)本均由病理主治醫(yī)師再次確定，其分型符合世界衛(wèi)生組織(WHO)關(guān)于結(jié)腸癌的判斷標(biāo)準(zhǔn)。同時選擇50例距離腫瘤邊緣>5 cm的正常結(jié)腸黏膜組織作為對照組，其中男25例，女25例，年齡58～75，(平均64.0)歲。兩組一般臨床資料無明顯差別，具有可比性。

1.2Cath-D、Tmem 16a和BRK蛋白檢測 Cath-D、Tmem 16a和BRK蛋白均購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司。Cath-D、Tmem 16a和BRK的檢測應(yīng)用免疫組化二步法，應(yīng)用DAB染色，均由同一技師完成，嚴(yán)格質(zhì)量控制，減少誤差。

1.3結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 結(jié)果均由病理主治醫(yī)師判讀，均采用盲法。Cath-D、Tmem 16a和BRK染色的陽性部位定位在細(xì)胞質(zhì)中，以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反應(yīng)細(xì)胞，以陽性率≥25%為陽性，以陽性率<25%為陰性。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SAS6.12軟件進(jìn)行χ2檢驗和線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組Cath-D、Tmem 16a和BRK表達(dá)陽性率的比較 Cath-D、Tmem 16a和BRK在觀察組中的陽性率明顯高于對照組(P<0.000 1)，見表1。

2.2觀察組中Cath-D、Tmem 16a和BRK在不同臨床病理特征中表達(dá)的比較 觀察組中Cath-D、Tmem 16a和BRK的表達(dá)與腫瘤的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、脈管浸犯、臨床分期和Ki67增殖指數(shù)有關(guān)(P<0.05)。見表2。

表1 兩組Cath-D、Tmem 16a和BRK表達(dá)陽性率的比較〔n(%)〕

表2 觀察組中Cath-D、Tmem 16a和BRK在不同臨床病理特征中陽性表達(dá)的比較〔n(%)〕

2.3觀察組中Cath-D、Tmem 16a和BRK表達(dá)的相關(guān)性分析 觀察組中Cath-D和Tmem 16a(r=0.46，P=0.018 7)、Cath-D和BRK(r=0.44，P=0.016 9)、Tmem 16a和BRK(r=0.48，P=0.016 5)正相關(guān)。

3 討 論

結(jié)腸癌的發(fā)生和進(jìn)展時多種基因和蛋白出現(xiàn)變化。Cath-D是癌細(xì)胞合成的水解酶之一，是分子量為34 kD的糖蛋白，具有肽鏈內(nèi)切酶的活性，在腫瘤進(jìn)展中Cath-D常常表達(dá)升高，并具有刺激細(xì)胞的生長、溶解基底膜及促進(jìn)間質(zhì)反應(yīng)的作用〔4〕。Tmem 16a作為氯離子通道是一大類廣泛存在于各種細(xì)胞膜和細(xì)胞器上的離子通道，在細(xì)胞興奮性調(diào)節(jié)、跨上皮物質(zhì)轉(zhuǎn)運、細(xì)胞容積調(diào)節(jié)和細(xì)胞器酸化過程中發(fā)揮作用。近年學(xué)者們相繼發(fā)現(xiàn)Tmem 16a在食管癌、胃腺癌中表達(dá)上調(diào)，并對腫瘤進(jìn)展起重要的促進(jìn)作用〔5,6〕。BRK最初是在有關(guān)調(diào)節(jié)小腸上皮細(xì)胞分化的研究中發(fā)現(xiàn)，在結(jié)構(gòu)上與Src家族酪氨酸激酶相似，但是缺少Src激酶定位于細(xì)胞膜所必需的N端-肉豆酸酰化位點。也有觀點認(rèn)為BRK可以引起磷酸化，對下游信號對接位點的暴露更加突出，此時當(dāng)有效信號刺激后，可以有效地調(diào)解細(xì)胞因子、生長因子和連接蛋白，調(diào)節(jié)生長因子的生物利用度，誘導(dǎo)細(xì)胞遷移，使腫瘤細(xì)胞具有侵襲性〔7〕。

本實驗提示Cath-D、Tmem 16a和BRK參與腫瘤的進(jìn)展，3種蛋白對于腫瘤生長及轉(zhuǎn)移可能有促進(jìn)作用。Cath-D、Tmem 16a和BRK的作用途徑是“增殖”誘導(dǎo)途徑，使腫瘤細(xì)胞增殖旺盛，進(jìn)展加速。本實驗提示三種蛋白具有協(xié)同作用。有研究認(rèn)為Tmem 16a和BRK可以直接刺激內(nèi)皮細(xì)胞遷移，并通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子信號途徑促進(jìn)內(nèi)皮生長因子的高表達(dá)〔8〕，而Cath-D也具有促進(jìn)內(nèi)皮生長因子的作用，因此三者可能是通過生長因子途徑聯(lián)系在一起的，但是其具體機(jī)制并不清楚，需要更多基礎(chǔ)實驗證實。

4 參考文獻(xiàn)

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7于涓瀚, 張 勇, 劉 洋, 等. BRK在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及與Ki67表達(dá)的關(guān)系〔J〕. 解剖科學(xué)進(jìn)展, 2013; 19(1): 9-12.

8Davis AJ, Forrest AS, Jepps TA,etal. Expression profile and protein translation of TMEM16A in murine smooth muscle〔J〕. Am J Physiol Cell Physiol, 2010; 299(5): 948-59.